Pseudofracture : 급성 주변 조직 외상 모델

대퇴골이나 경골과 같은 긴 뼈가 골절되면 손상된 근육과 연조직이 손상된 뼈 조각과 골수에 노출됩니다. 그 다음에는 조직 복구를 돕기 위해 강력한 면역 반응이 나타납니다. 이러한 노출의 영향을 연구하기 위한 모델은 대퇴골과 경골을 모두 채취하여 생성할 수 있습니다.

기증자 마우스에서. 뼈를 으깨서 뼈 용액을 만든 다음 이식 마우스의 부상당한 허벅지에 주입합니다. 그런 다음 면역 반응을 모니터링하고 원격 장기 손상을 평가하여 골절로 인한 외상의 장기적인 영향을 연구합니다.

양측 대퇴골 골절 모델과 같은 기존 말초 조직 외상 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 이 모델, 즉 유사 골절 모델이 장기간의 마취 또는 복잡한 골절 고정 기술의 합병증 없이 장기 생존을 가능하게 하여 외상 후 후기 면역 반응을 연구할 수 있다는 것입니다. 절차를 시작하기 전에 얼음 양동이, 베타 딘 수술 도구, GRE 지혈기, 모르타르 및 유봉 집게, 20 게이지 바늘, CC 주사기 1 개, PBS 마취 및 불소 코 원뿔 등을 준비하십시오. 단일 안락사된 연령과 체중이 일치합니다.

Genic donor mouse는 3명의 수혜자에게 충분한 물질을 제공해야 합니다. 기증자를 플렉시 글라스 보드에 테이프로 붙이고 발끝에서만 하지를 테이프로 감습니다. 하지를 조심스럽게 면도하십시오.

그런 다음 베타딘과 알코올로 완전히 덮어 불임으로 하지에서 긴 뼈를 제거하고 서혜부 피부를 외과 적으로 절개하고 사지의 길이를 따라 발목까지 피부를 계속 자르고 피부를 수축시켜 피하 근막과 근육에서 해부합니다. 내측과 측면 측면 모두에서. 그런 다음 경골의 앞쪽과 옆쪽에 있는 근육 아래에 가위의 한 날을 삽입합니다. 칼날을 근위와 원위부로 밀어 근육을 밑에 있는 뼈에서 깨끗하게 들어 올립니다.

경골의 뒤쪽과 내측 아래쪽에 이 기술을 반복하여 경골 아래의 근육을 분리합니다. 원위로 미끄러질 때 다리 근육의 근위부 끝에 있는 경골에서 비골을 떼어내기 위해 뒤쪽에 최소한의 추가 힘을 사용해야 합니다. 힘줄을 삽입부에 최대한 가깝게 자르고 근육 그룹을 함께 당기면서 근육을 원위부로 후퇴시킵니다. 아래쪽으로 작게 잡아당기면 발목 관절을 절단한 가위를 사용하여 발목 관절에서 원위 부착물을 풀어줍니다.

이 시점에서 대퇴골에서 경골을 분리하지 마십시오, 이 연결은 고관절에서 대퇴골을 절개하는 데 도움이 되는 추가 지렛대를 제공합니다. 대퇴골에서 근육을 풀어주기 위해 유사한 기술을 사용하십시오. 이것을 후방으로 수행하고 필요한 경우 중간 및 측면으로 수행하십시오.

이러한 근육 그룹의 원위 부착을 잘라 무릎 관절에서 풀어줍니다. 적절한 노출을 달성하기 위해 필요에 따라 피부 절개 부위를 확장하고 근육 아래를 따릅니다. 고관절에서 대퇴골 끝을 절개하려면 대퇴골을 제거하고 기증자 마우스에서 경골을 부착하고 멸균 거즈에 놓습니다.

무릎 관절에서 두 뼈를 분리하려면 별도의 손으로 각 뼈를 잡고 긴 AE를 따라 반대 방향으로 두 뼈를 부드럽게 비틀거나 회전시킵니다. 긴 뼈에서 남아 있는 힘줄 부착물을 제거하려면 뼈 길이에 4x4 조각의 거즈를 감습니다. 단단히 잡고 뼈의 전체 길이를 여러 번 긁어 표면에서 나머지 조직을 제거합니다.

수집된 뼈를 얼음 위의 멸균된 1.5ml 마이크로 거부 튜브에 넣습니다. 기증자 뼈를 철저히 소독된 생물 안전 캐비닛으로 운반합니다. 뼈 용액의 준비를 위해.

후드는 멸균 필드 드레싱, 멸균 모르타르 및 유봉, 멸균 집게, 멸균 8 밀리리터 튜브, 멸균 PBSA 1 밀리리터 피펫으로 준비해야합니다. 100마이크로리터 피펫 작업자가 각각 팁, 1밀리리터 주사기, 집게를 사용하여 20게이지 바늘을 사용하여 뼈를 모르타르로 옮기고 유봉을 사용하여 뼈를 부드럽게 으깨줍니다. PBS 1ml를 모르타르에 피펫팅하고 완전한 소생 현탁액을 보장하기 위해 원을 그리며 나머지 조각을 계속 분쇄합니다.

그런 다음 PBS 1ml를 더 넣고 계속 분쇄하여 분홍색을 띠는 뼈 용액을 만듭니다. 모르타르의 용액을 8ml 튜브에 천천히 붓고 더 큰 잔여물이 남아 있는지 확인합니다. 뼈 용액을 1ml 주사기에 옮깁니다.

20게이지 바늘을 사용하면 뼈 용액이 얼음 위에 남아 있어야 합니다. 뼈 용액 1마이크로리터를 표면에 고르게 펴 바르는 Mac 콩가 플레이트에 피펫팅합니다. 무균 상태를 보장하기 위해 24-48시간 동안 플레이트를 배양합니다.

펜타 바르비탈 마취 마우스의 마취 깊이를 발가락으로 평가하여 연조직 손상 및 뼈 용액 주입에 대한 수술 절차를 시작합니다. 꼬집다. 플렉시 유리 보드에 누운 자세로 마우스를 놓고 40 크기의 날이 있는 5개의 클리퍼인 Oscar를 사용하여 각 사지의 원위 부분에 끈적한 면이 바깥쪽으로 나가는 얇은 테이프 스트립을 느슨하게 감아 동물을 움직이지 못하게 합니다. 동물의 복부, 서혜부, 허벅지 부위를 면도합니다.

마우스를 멸균 수술 구역으로 옮깁니다. 베타딘으로 수술 부위를 닦습니다. 그런 다음 알코올로 닦아 살균하십시오.

1ml의 불소 99%가 들어있는 거즈 조각이 들어 있는 마우스에 노즈콘을 놓습니다. 동물의 호흡이 느려지기 시작하면 콧방울을 제거합니다. 절차의 어느 부분에서든 추가 마취가 필요한 경우, 추가 펜토바르비탈을 주입하거나 불소를 투여할 수 있습니다.

다음으로 멸균 필드 드레싱을 접고 마우스에 걸쳐 드레이프하여 하지와 머리만 노출되도록 합니다. 이 연조직 손상은 양측 뒷다리 압착 손상입니다. 마우스가 뒷다리를 약간 내밀고 옆으로 회전한 위치에 있는지 확인합니다.

이것은 올바른 근육에 접근하는 데 도움이 됩니다. 무릎 굴곡근을 그룹화하여 압착 부상을 수행합니다: 대퇴골을 따라 대퇴골을 따라 뒤쪽 허벅지 근육 조직 중간 지점 주위에 18cm의 큰 지혈을 고정하고 볼록한 곡선이 대퇴골을 향하도록 합니다. 지혈을 30초 동안만 첫 번째 딸깍 소리로 잠급니다.

베벨의 끝이 대퇴골에 닿도록 피부를 통해 바늘을 2-3mm 삽입합니다. 0.15ml의 뼈 용액을 양쪽의 으깬 허벅지 근육 조직에 주입합니다. 바늘을 빼내고 멸균 장갑을 낀 손가락을 주사 부위에 재빨리 올려 상처에서 뼈 용액이 역류하는 것을 막습니다.

이 손가락을 몇 초 동안 누르고 있습니다. 마우스를 케이지에 다시 넣고 마취가 가라앉을 때 직접 완전한 움직임의 자유를 허용합니다. 적당하다. 통증 관리는 쥐가 깨어날 때 시행해야 합니다.

이 일반적인 도식은 0시 시점에서 외상 후 이위상 면역 반응을 보여줍니다. 트라우마가 유발됩니다. 그 다음에는 6시간에 최고조에 달하는 것을 볼 수 있는 조기 과염증 반응이 뒤따르며, 이는 전신 염증 및 원격 장기 기능 장애에 대한 평가를 통해 측정됩니다.

외상 후 면역 반응의 두 번째 구성 요소는 면역 세포 기능 장애에 의해 측정되는 지연된 면역 억제이며 약 48시간 동안 저점으로 묘사됩니다. 이것은 외상 후 초기에 발생하는 혈장 내 염증성 사이토카인 반응의 대표적인 다이어그램이며 전신 염증의 예입니다. 간 손상을 통해 측정된 원격 장기 기능 장애는 비슷한 기간 내에 증가한 것으로 나타났습니다.

이 대표적인 다이어그램은 외상 후 늦은 면역 세포 기능 장애를 강조하는 예입니다. 이 절차를 시도하는 동안 실험 전반에 걸쳐 무균 상태와 정확한 조작을 보장하는 것을 기억하는 것이 중요합니다. 이것은 진정한 골절이나 상처 감염의 모델이 아닙니다.