Name: Pseudofracture : 급성 주변 조직 외상 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-04-18T11:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 8 s
Description: 배우세요 쥐를 이용한 pseudofracture 모델로 근골격계 외상 후 면역 반응을 평가하는 방법입니다. 이 기법은 장기 생존이 가능하여 외상 후기 면역 연구에 활용됩니다.

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출혈성 쇼크 GM053789의 기금 소스 / 번호 분자 생물학

1. 악기, 외과 필드 준비 : 모든 실험 절차는 무균 기술을 사용하여 수행됩니다. 시작하기 전에 실험 지역은 철저하게 청소하고 소독해야합니다. benchtop은 공기 건조 후 70 % 알코올로 닦여 수, 소독해야합니다. 실험 작업 영역에 드레싱 수술 블루 패드 및 살균 필드를 배치합니다. 모든 자료와 악기 압력솥 사용하기 전에 소독을하고 있습니다. 주사기와 바늘은 멸균 접수하고 있습니다. 연구원은 적절하게 실험실 외투, 수술 마스크 및 불임 수술 장갑에 garbed해야합니다. 우리 수술 악기 압력솥 매일 저녁 소독하고 있습니다. 그들은 항균 비누와 물을 사용하여 수술 후 씻어입니다. 그들은 깨끗한 수술 블루 패드에 건조 사용할 수 있습니다. 그들은 다음 조심스럽게 살균 주머니에 배치하고 나중에 사용하기 위해 소독하고 있습니다. ° F 실험을 시작하기 전에 300-350 - 그것은 적절한 온도에 도달하기 위해 핫 비드 살균기를 켭니다. 이 살균기는 각각의 생쥐에 대한 실험 절차 사이에 악기를 청소하는 데 사용됩니다. 스테인레스 스틸 악기 트레이를 70 %의 에탄올과 방법과 그 1 / 3 입력하십시오. 귀하의 수술기구를 감추기에 충분 할만큼 70 %의 에탄올이 있어야합니다. 순환 가열 패드의 전원을 켜고 그 위에 수술 블루 패드 그리고 그 위에 드레싱 멸균 필드를 놓으십시오. 이 히터는 실험 절차 및 복구 기간 동안 마우스의 적절한 온기를 보장하기 위해 사용됩니다. 멸균 드레싱 필드에있는 모든 멸균기구, 거즈, 주사기, 주사 바늘 및 1.5mL microfuge 튜브를 놓습니다. 모든 무균 악기 및 기타 항목을 열 때주의하십시오, 그들을 만져을 오염하지 않습니다. 이 설치 절차를 수행할 때 멸균 장갑을 사용하는 것이 좋습니다. 2. Pseudofracture 모델 - 실험 절차 : 1. 마취와 마우스의 위치의 유도. Pentobarbitol의 intraperitoneal 주사 (70mg/kg)을 관리하여 시작합니다. 이것은 먼저 꼬리의 근위 끝에를 사용하여 케이지에서 마우스를 리프팅하여 수행됩니다. 마우스는 다음 anaesthesic의 정확한 복용량을 계산하는 데 무게해야합니다. 여전히 꼬리를 누른 상태 다음은 새장의 상단에있는 동물을 놓으십시오. 그냥 forepaws 뒤에 마우스의 양쪽 엄지와 가운데 손가락으로 마우스의 목의 아저씨를 잡아. 검지 손가락은 다시 머리 / 목 지역에있는 피부를 당길 사용하고 부분적으로 머리를 고정합니다. 손가락이 마우스의 척추의 요추에 누르고있는 동안 마우스의 꼬리는 작은 손가락과 손가락 사이에 개최됩니다. 마취는 약 5 분 이내에 전체 적용해야하고, 반사 테스트로 확인되어야합니다. 동물이 자고 후, 플렉시 글라스 보드에 위로 향한 위치에 마우스를 놓고 자신의 사지를 녹화하여를 무력화하기 위해 느슨한 루프 테이프 기술을 사용합니다. 느슨한 루프 기술은 단순히 테이프 얇은 스트립을 절단하고 각 끝단의 말초 부분 주위에 느슨하게 테이프를 포장 알아볼 수 있습니다. 테이프 그런 다음 자체로 붙어 있으며, 테이프를 통해 왼쪽은 보드에 첨부되어 있습니다. 이것은 일관된 방식뿐만 아니라 생쥐의 사지를 보장에서 수행하는 실험 조작이보다 자연스러운 자세를 취하 수 있습니다. 동물의 복부, 사타구니와 허벅지 영역은 다음 살균 필드를 유지하기 위해 오스터 A5의 가위 (크기 40 블레이드)를 사용하여 면도 있습니다. 4X4의 거즈는 betadine 함께 묻은 거 같아요이고 수술 영역이 다음 소독을 닦아 있습니다. 무균 필드 드레싱은 다음 접힌만을 하반신과 머리의 노출을 허용하는 마우스에 걸쳐 draped 있습니다. 고정 및 살균 후, 실험 절차를 시작하기 전에 몇 초 동안 마우스의 코를 통해 isoflurane과 코 콘을 넣으십시오. 코 콘은 거즈로 가득 50cc 원뿔 튜브로 구성되어 있습니다. 튜브의 하단 끝의 절반은에 맞게 마우스의 코에있는 공간을 만드는 잘라입니다. 모자 (조직 스토리지 컨테이너 즉, 바로 옆에 넓은 입 항아리의 바닥)는 isoflurane 증기는 튜브를 사용하지 않을에 남아 있도록 원뿔의 절단 끝에 배치됩니다. isoflurane 중 하나 ML은 원추 내에 거즈에 추가되어 있어야합니다. 세심한주의가 마취의 사용 중에 마우스를 지불하고 특히 코 콘을 통해 isoflurane을 사용해야합니다. 동물의 호흡이 느린 시작되면, 실험을 시작할 수 있으며 코 콘은 제거하고 폐쇄하여야한다. 추가 마취가 실험의 어떤 부분에 걸쳐 필요한 경우, 추가 pentobarbital은 주입이나 isoflurane 관리 수 있습니다. isofluorane 관리의 대체 방법이 제공 및 지침 recomm 업데이 트됩니다가능한 경우, 마취의 더 나은 통제를 허용하는 정밀 기화기의 사용을 종료합니다. 그러나, 마우스의 호흡 생리에 가까운 관심은 이러한 방법 중 하나와 함께 보장되어야합니다. 2. Pseudofracture 실험. 의사 - 골절이 부상 근육 뼈 솔루션 주입에 의해 다음과 hindlimbs에 좌우 대칭으로 수행 부드러운 조직 손상의 조합입니다. 받는 생쥐의 실험 조작을 시작하기 전에 본 솔루션은 준비하셔야합니다. 3. 본 솔루션 준비. 한 사람 거였어요 마우스에서 준비 뼈를 솔루션은 충분히 3받는 마우스에 대한 것입니다. syngeneic 기증자 마우스는 연령과받는 실험 마우스 체중 일치하는 것을 사용해야합니다. 기증자 마우스 흡입 isoflurane과 euthanized 것입니다. 기증자는 다음 테이프에만 발 끝에 하반신에 세심한주의와 플렉시 글라스 보드에 녹화됩니다. 하반신은 신중하게 면도하고 철저하게 betadine로 덮여있을, 그리고 불임에 대한 알코올로 닦아해야합니다. 다음 대퇴골과 경골은 수술 두 하반신에서 살균 방식으로 제거됩니다. 낮은 말단의 긴 뼈를 제거하려면, 사타구니 지역에있는 피부에 절개 수술을하고, 아래 발목에, 말단의 길이를 따라 피부를 잘라 계속. 피부를 철회하고, 모두 최대 노출을위한 중간과 측면 측면에 피하 근막과 근육에서 멀리 해부하다. 앞쪽에 및 발목 부분의 경골 (정강뼈 앞쪽에, 신근 digitorum의 longus, 신근 hallicus의 longus, peroneus longus, peroneus brevis)와 깔끔하게 떨어져에서 근육을 리프트에 proximally와 distally 블레이드를 슬라이드 측면 거짓말 근육 아래에있는 가위 중 하나 블레이드를 삽입 뼈가 기본. 발목 부분의 경골 (gastrocnemius, soleus, plantaris 후부, 정강뼈, flexor digitorum longus의, flexor hallicus의 longus) 아래 근육을 분리하기 위해 경골의 뒷부분과 중간 아래쪽에이 기법을 반복합니다. distally 슬라이딩 때 최소한의 추가적인 노력이 떨어져 발목 부분의 경골에서 비골 스냅인을하기 위해, 뒷부분 측면에 사용해야합니다. 작은 예인선이 발목 관절에서 이러한 근육의 말초 첨부 파일을 출시할 예정 하향 방식으로 함께 근육 그룹에 당기면서이 다리 근육의 근위 끝에, 가장 가까운 자신의 삽입 가능한 힘줄을 잘라 distally 근육을 철회. 발목 관절은 가위로 직접 통과하여 갈 수 있습니다. 이 시점에서 대퇴골에서 경골을 분리하지 마십시오! 이 연결은 엉덩이 관절에서 대퇴골의 해부에 도움이 추가로 활용할 수 있습니다. 대퇴골에서 근육의 릴리스 비슷한 기법을 따라이 뒤로 두 medially하고 옆으로 또한 필요한 경우를 수행합니다. 무릎 관절에서 그들을 풀어 이러한 근육 그룹의 말초 첨부 파일을 잘라요. 절개를 계속 밖으로 엉덩이 관절의 대퇴골의 끝을 해부하다하는 근육 아래에 따르십시오. 이 부검에 투입, 피부 절개는 지금까지와 같은 적절한 노출을 달성하기 위해 필요에 따라 확장되어야합니다. 엉덩이 관절에서 대퇴골 Motion은 해부 동안 대퇴골의 근위 끝을 찾을 수 있습니다. 일단 대퇴골이 (첨부 경골)를 기증 마우스에서 제거하면 살균 4x4gauze 그들을 놓으십시오. 두 뼈를 단순히 별도의 손에 각 뼈를 쥐고 부드럽게 비틀 / 자신의 긴 축을 따라 반대 방향으로 두 뼈를 돌려 무릎 관절에서 분리하실 수 있습니다. 그들이 쉽게 수동 조작의 과잉 노력과 골절 수 있듯이 두 뼈 부드러운 절개 및 취급을 권장합니다. 긴 뼈가 남아있는 힘줄이 첨부 파일을 제거하려면 뼈의 길이 주위에 싸서 4X4의 거즈의 건조 살균 조각을 사용합니다. 그들은 거즈를 준수하고 뼈에서 끌려나 쉽고 빠르게 될 것이다 뼈에 대해 단단히이 거즈을 파악이에게 뼈 여러 번의 전체 길이를 당겨, 이것은 뼈의 표면에 묻은 나머지 조직을 다쳤어요 것입니다. 수집된 뼈가 다음 멸균 1.5mL microfuge 튜브에 직접 배치 및 전송을위한 얼음에 배치해야합니다. 이 네 기증자 뼈는 뼈 솔루션에 대한 준비를위한 생물 학적 안전 캐비닛로 이동합니다. 후드가 완전히 사용하기 전에 소독해야하며, 후드 내에서 작업 영역 드레싱 멸균 필드를 놓으십시오. 살균 박격포와 유봉, 살균 8mL 튜브 및 멸균 인산을 장소는 작업 영역에 살린 (PBS)를 버퍼. 1mL pipetteman, 그리고 각각의 조언은 후드 내에서 사용 가능한 있어야합니다. 포셉의 살균 쌍의는 1.5mL microfuge 관에서 살균 방식으로 수확 뼈를 제거하고 박격포에 배치하는 데 사용해야합니다, 유봉은 부드럽게 뼈를 부셔하는 데 사용됩니다. Phosph먹고 버퍼 호수가 주사에 대한 뼈 조각을 resuspend하는 데 사용되는 차량입니다. 피펫 박격포로 PBS의 1mL 및 전체 resuspension을 보장하기 위해 추가적인 원형 동작으로 남아있는 조각을 부수기 위해서는 계속합니다. 다음 PBS의 다른 1mL를 추가하고 &#39;뼈 솔루션&#39;을 만들 수 분쇄 진행합니다. 솔루션은 핑크 색상을 가지고 있어야하고, 완전히 깨진 수없는 박격포의 하단에있는 왼쪽부터 이어져 온있을 것입니다. 더 큰 잔존물은 절구에 남아서 확보하면서 천천히, 최대 볼륨을 잡으려고, 8mL 튜브에 박격포의 솔루션을 부어. 이 뼈를 솔루션은 실험적인 사용까지 얼음에 남아 있어야하며 주사 1mL 주사기로 전송됩니다. 는 20 게이지 바늘은 나중에 마우스로 관리하기 위해 뼈를 솔루션을 포함하는 1mL 주사기에 연결된 것입니다. 이 대형 바늘 크기는 모두 뼈 조각이 주사시 지역을 입력하고 바늘을 차단하지 않도록 선택했습니다. 받는 마우스, 뼈 솔루션의 한 방울을 분사는 문화 MacConkey 한천 플레이트 (24~48시간을위한 인큐베이션)에 배치되기 전에. 이것은 뼈 솔루션의 불임을 보장하는 것입니다. 뼈 솔루션의 산도는 중성 산도를 보장하기 위해 검사를해야합니다. 4. 연조직 손상. 이 부드러운 조직 부상은 양자 hindlimb의 호감의 부상이다. 뒷다리 팔다리 약간 납치 옆으로 회전 마우스의 초기 위치는, 올바른 근육 그룹, 무릎이 박혀 (팔뚝 femoris, semitendinosus 및 semimembranosus 근육)에 접근에 도움이됩니다. 대형 18cm hemostat는 호감 부상을 수행하는 데 사용됩니다. 이러한 응용 hemostats의 힘의 분포 분석 및 hemostat는 대퇴골에 직면하고 자사의 볼록 곡선과 대퇴골 따라 후부 허벅지의 근육, 미드 주위에 고정되어 있어야합니다 센서 제품 주식 회사에 의해 Topaq 압력 분석 시스템을 사용하여 270psi로 발견되었습니다. hemostat은 다음 첫 번째 클릭에만 잠겨 종료하고 30 초 동안 유지한다. 이 hemostat의 위치에 세심한주의가 중요하다 - 그것은 그것이 골절이 안되도록, 대퇴골을 통해 채워해서는 안됩니다. 이것은 쥐 간의 재현성 부상을 보장 때마다 일관된 방식으로 수행되어야합니다. 이 호감 부상은 모두 하반신에서 수행됩니다. 5. 본 솔루션을 주입. 받는 실험 마우스 anesthetized 이전에 설명된대로 준비되며, 이전이 뼈 주사로 부드러운 조직 부상을받은 것입니다. 본 솔루션은 다음 좌우 대칭으로받는 마우스의 조각 허벅지의 근육에 주입됩니다. 이 솔루션의 0.15mL 20 게이지 바늘을 사용하는 것은 각각의 허벅지의 뒷부분 근육에 주입됩니다. 피부를 통해 약 2 ~ 3mm를 바늘을 입력하고 바늘의 삽입의 거리에주의 - 베벨의 끝에 그냥 대퇴골에 대한 감동으로 기분 것입니다,이 위치는 이상적입니다. 이제 뼈 솔루션을 주사. 바늘을 철회하고 신속하게 상처를 밖으로 뼈 솔루션의 다시 흐름을 막을 수있는 주사 사이트를 통해 멸균 장갑 낀 손가락을 넣으십시오. 몇 초 동안이이 손가락을 잡아. 마우스는 다음 케이지에 다시 배치 직접 마취의 앉다과 같은 운동의 완전 자유를 허용됩니다. 마우스가 깨어난다 같은 적절한 통증 관리는 관리해야합니다. 6. Post-operative/recovery 기간. 느슨한 루프 테이프가 제거되고 동물은 몇 시간 포스트 복구를 위해 순환 가열 패드에 보관 깨끗한 케이지에 넣습니다. 필요한 경우 적절한 온기가 추가로 가열 램프와 함께 보장되어야합니다. 음식과 물이 쉽게 사용할 수 있습니다. 동물이 고통을 제대로 관리하기 위해서는 마취에서 waken 시작으로 진통을 관리해야합니다. Buprenorphine은 동물들이 신체 활동을 시작으로 (0.1mg/kg) subcutaneously 주입 아니지만 전에 않도록 호흡 기능을 손상하지 않습니다. 생쥐는 지속적으로 마취 또는 실험 종점에서 복구까지 마취 동안 모니터해야합니다. 생쥐도 매우 신중하게 수술 후 기간에 모니터링할 수 있어야하고 필요한 추가적인 진통제는 필요에 따라 관리되어야합니다. 모니터 동물 신체 활동, 호흡 상태, 음식과 물을 섭취와 고민의 흔적 (고심한 흔적이있는 호흡은 고통은 습관을 음식의 변화)을 따라 해결되어야합니다. 70 % 알코올로 수술 도구를 삽입하고 멸균 거즈 그들을 닦아 다음 동물 사이의 살균을위한 ~ 20 초 동안 microbead 살균기에 넣어 두었어요. 수술 도구를 제거하고 그들을 식히고 수 있도록 70 %의 알코올을 스프레이. 세인트에 그들을 플레이스erile 필드 드레싱. 다음 동물에 다시 똑됩니다 악기에 남아있는 알코올이없는 있는지 확인합니다. 3. 비교 정무 대퇴골 골절 모델 - 실험 절차 : 실험 마우스 anesthetized과 처음 설명한대로 준비합니다. 대형 18cm hemostat 약 2~3밀리미터 무릎을 마주의 볼록한 표면과 무릎 관절 위의 hindlimb 주위에 고정되어 있어야합니다. hemostat와 엉덩이 사이에 고정되어 hemostat와 검지 손가락 위에 엄지를 놓습니다. 당신이 깨고 어디 있는지 알 수 있도록 비틀 전에 대퇴골을 느낄 수 있어야합니다. 다른 손으로 시계 방향으로 비틀면서 다음 트위스트 hemostat는 반시계. contralateral 다리와 절차를 반복합니다. 4. 여러 외상 모델 - 출혈성 쇼크로 Pseudofracture의 조합에 대한 실험 절차 : 받는 마우스 anesthetized과 처음 설명한대로 준비합니다. 의사 파괴와 함께 출혈성 쇼크를 받아야하는 아르 생쥐는 pseudofracture 절차 전에 대퇴 동맥 cannulation을하고 다음 의사 골절이 완료되고 나면이 카테터에서 hemorrhaged 것입니다. 5. 성공을위한 비밀 : 일반 : <ul><li> 당신은 가능한 한 무균 유지하기 위해 여분의 노력을했는지 확인하십시오. </li><li> 세심한주의가 마취 관리 동안 호흡 속도를 포함하여, 마우스의 전체적인 생리 상태로 지불하고 코 콘을 통해 특히 isoflurane해야합니다. </li></ul> 본 솔루션 준비 : <ul><li> 뼈 부드러운 조작 -이 쉽게 간단한 수동 조작하는 동안 - 노력과 골절 수 있습니다! </li><li> 발목 부분의 경골에서 비골 제거는 절개에 보장하여야한다. </li><li> 처음에는 부드럽게 뼈를 분쇄하여 시작 - 박격포 내의 모든 조각을 유지 않도록! </li><li> 초기 단 1 ML PBS를 추가하고, 한 번 좋은 서스펜션은 형성했다, 나머지 뼈 조각을 깔아 뭉 갠다고 계속 나머지 1mL를 추가합니다. </li><li> 박격포와 유봉에서만 솔루션 수집해야합니다 - 완전히 분해되지 않을 수있는 큰 나머지 조직없이 -이 수가받는 마우스에 주입시 주사 바늘에 박혀 타 / 차단할 수 있습니다. </li></ul> 연조직 손상 : <ul><li> 아니라 대퇴골 이상이나 골절 것입니다 -이 hemostat주의 게재 중요합니다. 재현성 부상 - 올바른 근육 (무릎이 박혀 후부 허벅지) 위에 hemostat를 클램프. </li></ul> 본 솔루션 주입 : <ul><li> 솔루션을 주입하면 바늘의 삽입의 거리를 관심을 지불 - 베벨의 끝에 그냥 대퇴골에 대한 감동으로 기분 것입니다,이 위치는 이상적입니다. </li><li> 바늘을 철회하고 신속하게 상처를 밖으로 뼈 솔루션의 다시 흐름을 막을 수있는 주사 사이트를 통해 손가락을 넣으십시오. 몇 초 거기에 손가락을 잡아. </li></ul> 6. 수술의 우려를 게시 : <ul><li> 다리에 감염 확인하십시오. </li><li> 뼈 솔루션의 문화를 확인하십시오. </li><li> 동물 실험 조작과 관련된 염증의 결과로 뒷다리 팔다리를 사용하여 문제가 수 있습니다. 적절하게 고통을 관리합니다. </li></ul>

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동물 실험 기관 애니멀 케어 및 사용위원회 및 연구 실시와 피츠버그 대학, AALAS / AAALAC 인증 기관의 준수 사무실에서 정한 지침과 규정에 따라 수행되었다. 동물 소스 잭슨 연구소와 찰스 리버스 연구소를 포함합니다. 모든 동물은 광범위한 건강 각 업체를 통해 보증뿐만 아니라, 피츠버그의 내부 동물 건강 모니터링 프로그램의 대학을 받고있다. 이 연구는 척추 동물의 사용에 대한 미국 정부의 원칙에 따라 실시됩니다. 이 프로그램은 USDA에 등록하고, 실험실 동물 복지의 보건 서비스 사무소와 보증의 편지를 가지고있다.

Pseudofracture, 무균 musculoskeletal 외상의 재현성 murine 모델, 외상후 면역 반응의 평가를 위해 수 있습니다. pseudofracture 모델 immunologically 긴 골절의 기능의 레크 리에이션을 통해 끝단 파괴 환경을 모방 : 부상 근육과 부드러운 조직은 원래 뼈 한방울 흘리지 않고 손상된 뼈 및 골수에 노출되는 38,39 biphasic 면역 반응은 다음과 같은 볼 수 있습니다. 48hrs 주변 여물로 묘사 지연 immunosuppression의 두 번째 구성 요소로 다음 6시간에서 절정을 볼 수있는 초기 hyperinflammatory 응답으로 구성되어 있습니다 pseudofracture 외상. 이 모델은 복잡하고 쉽게 재현할 수는 없습니다 이러한 파괴 - 고정으로 실험 murine 외상 모델링의 도전 중 일부를 극복하는 데 도움이됩니다. 그것이 원래 뼈의 골절없이 동물의 장기 생존을 허용으로 특히이 모델은 외상후 면역 반응이 늦은 기간 연구를 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>수술용 블루 패드</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-7105</td><td></td></tr><tr><td>멸균 필드 드레싱</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9517505</td><td></td></tr><tr><td>순환식 가열 패드 18&quot;x26&quot;</td><td>Harvard Apparatus</td><td>py872-5272</td><td></td></tr><tr><td>핫 비드 기구 멸균기</td><td>VWR international</td><td>11156-002</td><td></td></tr><tr><td>스테인리스 스틸 트레이 8&quot; x 11&quot;</td><td>VWR international</td><td>62687-049</td><td></td></tr><tr><td>플렉시글라스 보드 (10x15x0.5cm)</td><td>University of Pittsburgh Machine shop</td><td></td><td></td></tr><tr><td>테이프 롤 1&quot;</td><td>Corporate Express</td><td>MMM26001</td><td></td></tr><tr><td>50cc 원추형 튜브</td><td>모든 공급업체</td><td></td><td></td></tr><tr><td>직선형 측면 광구 병 (비강 원추 캡으로 사용)</td><td>VWR international</td><td>159000-058</td><td></td></tr><tr><td>Oster A5 클리퍼 (40번 날 포함)</td><td>VWR international</td><td>10749-020</td><td></td></tr><tr><td>수술용 가위 (직선형 &amp;#8211; 12cm)</td><td>Fine Science Tools</td><td>14068-12</td><td></td></tr><tr><td>곡선형 지혈鉗 -18cm</td><td>Harvard Apparatus</td><td>81331718</td><td></td></tr><tr><td>포셉 (0.8mm-팁, 곡선형-10cm)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11050-10</td><td></td></tr><tr><td>거즈 4&quot;x4&quot;</td><td>모든 공급업체</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1.5cc 마이크로 원심분리 튜브</td><td>모든 공급업체</td><td></td><td></td></tr><tr><td>아이스 버킷</td><td>모든 공급업체</td><td></td><td></td></tr><tr><td>막자사발과 막자</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-961AA</td><td></td></tr><tr><td>1cc 주사기 (25G 바늘 포함)</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826-88</td><td></td></tr><tr><td>20G 바늘</td><td>모든 공급업체</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1mL 피펫맨</td><td>모든 공급업체</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1mL 피펫 팁</td><td>모든 공급업체</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Falcon 폴리스티렌 8ml 튜브</td><td>VWR international</td><td>60819-331</td><td></td></tr><tr><td>멸균 파우치 3&quot;x8&quot;</td><td>VWR international</td><td>24008</td><td></td></tr><tr><td>멸균 파우치 5&quot;x10&quot;</td><td>VWR international</td><td>24010</td><td></td></tr><tr><td>MacConkey II 한천 배지 플레이트</td><td>BD Biosciences</td><td>221172</td><td></td></tr><tr><td>에틸 알코올 - 200 proof</td><td>Pharmco-AAPER</td><td></td><td>[70%]</td></tr><tr><td>펜토바르비탈 나트륨 (Nembutol Sodium 용액)</td><td>OVATION Pharmaceuticals</td><td></td><td>70mg/kg</td></tr><tr><td>Aerrane (이소플루란)</td><td>Baxter Internationl Inc.</td><td></td><td>99.9%</td></tr><tr><td>Triadine 포비돈 요오드 (베타딘)</td><td>Triad disposables</td><td></td><td></td></tr><tr><td>인산 완충 식염수 (PBS)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine HCl</td><td>Bedford Laboratories</td><td></td><td>0.1mg/kg</td></tr></tbody></table>

pseudofracture : 급성 주변 조직 외상 모델

Pseudofracture: An Acute Peripheral Tissue Trauma Model

외상 다음 여러 장기의 장애와 외상 환자에서 높은 사망률을 초래할 수있는 초기 하이퍼 반응 염증 반응이있다,이 반응은 종종 감염의 임상적 합병증을 추가 지연 immunosuppression 동반되며 사망률을 높일 수 있습니다 1-9가. 많은 연구 외상 다음 면역 체계의 반응에서 이러한 변화를 평가하기 시작했습니다. 10-15도 Immunologic 연구는 크게 유전자 변형 및 생체내 모델링에 사용할 수 녹아웃 마우스의 다양한 통해 지원되며. 자세한 조사에서 이러한 변종이 원조는 immunologic 응답에 관련된 분자 경로를 평가할 16-21 마우스의 파괴 고정 기술이 복잡하고 쉽게 재현할 수는 없습니다로서 실험 murine 외상 모델링에 도전, 장기 조사입니다. 22-30 마취의 지속, 장기간 사용하지 않고 동물과 장기 생존에 이동의 자유를 허용하면서이 pseudofracture 모델, 쉽게 복제 외상 모델은, immunologically 끝단 파괴 환경을 흉내낸하여 이러한 어려움을 극복. 목적은 긴 골절의 기능을 재현하는 것입니다, 부상 근육과 부드러운 조직은 원래 뼈 한방울 흘리지 않고 손상된 뼈 및 골수에 노출되어 있습니다. hindlimbs에 양자 근육 호감 부상이 부상을 근육으로 뼈를 솔루션의 주입에 의해 다음 : pseudofracture 모델은 두 부분으로 구성되어 있습니다. 본 솔루션은 연령과 체중 일치 syngeneic 기증자 모두 hindlimbs에서 긴 뼈가 수확하여 준비가되어 있습니다. 이 유골은 다음 조각과 인산염의 resuspended하는 것은 뼈 솔루션을 만들 수 살린 버퍼. 양자 대퇴골 골절은 끝단 외상의 일반적으로 사용하고 잘 구축 모델이며, pseudofracture 모델의 개발 기간 동안 비교 모델. 우리가 멸균 아직 비례 심한 말초 조직 외상 모델을 원하는 사용 가능한 파괴 모델의 다양한 가운데, 우리는 pseudofracture 우리의 비교와 같은 부드러운 조직 손상과 파괴의 폐쇄 방법을 사용하기로 결정했습니다. 31 출혈성 쇼크가 심각한 외상의 설정에서 일반적인 발견이며, 세계 hypoperfusion는 외상 모델에 매우 관련된 요소를 추가합니다. 32-36 pseudofracture 모델이 쉽게 높은 심각도의 여러 외상 모델 출혈성 쇼크 모델과 결합 수 있습니다 . 37

Pseudofracture, 무균 musculoskeletal 외상의 재현성 murine 모델은, 늦은 용어 외상후 면역 반응의 평가를 위해 수 있습니다. 이 문서는 여러 외상의 연구를 허용하는 실험 모델 조합의 가능성을 포함하여 단계 모델 단계의 절차 실행을 설명합니다.

Pseudofracture : 급성 주변 조직 외상 모델

외상 후에는 조기 과잉 반응성 염증 반응이 나타나며, 이는 외상 환자에게 다발성 장기 부전과 높은 사망률을 초래할 수 있습니다.

대퇴골이나 경골과 같은 장골이 골절되면, 손상된 근육과 연부 조직이 파손된 골편 및 골수에 노출됩니다. 이후 조직 수복을 돕기 위한 강력한 면역 반응이 뒤따릅니다. 이러한 노출의 영향을 연구하기 위한 모델은 양쪽 대퇴골과 경골을 채취함으로써 생성할 수 있습니다.공여 마우스로부터 채취합니다. 뼈를 분쇄하여 골 용액을 만든 후, 이를 수혜 마우스의 손상된 허벅지에 주입합니다. 이후 면역 반응을 모니터링하고 원격 장기 손상을 평가하여 골절 유발 외상의 장기적 영향을 연구합니다.양측 대퇴골 골절 모델과 같은 기존의 말초 조직 외상 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은, 가성 골절(pseudo fracture) 모델인 이 모델이 장시간의 마취나 복잡한 골절 고정 기술로 인한 합병증 없이 장기 생존을 가능하게 하여, 외상 후 후기 단계의 면역 반응 연구를 허용한다는 점입니다. 절차를 시작하기 전, 얼음 버킷, Betadine, 수술 기구, GRE 지혈鉗(hemostats), 막자와 절구, 포셉, 20 gauge 바늘, 1 CC 주사기, PBS, 마취제 및 isof fluorine 노즈콘을 준비하십시오. 연령과 체중이 일치하는 안락사된 개체 하나를 준비합니다.유전자 공여 마우스는 수혜 마우스 3마리 분량의 충분한 재료를 제공해야 합니다. 공여 마우스를 플렉시글라스 보드에 고정하되, 뒷다리는 발끝 부분만 테이프로 고정하십시오. 뒷다리 부위를 조심스럽게 제모하십시오.그 다음, 멸균을 위해 Betadine과 알코올로 완전히 도포한 후 하지의 긴 뼈를 제거하기 위해 서혜부 피부에 외과적 절개를 가하고, 발목까지 하지의 길이를 따라 피부를 계속 절개합니다. 내측과 외측 모두에서 피부를 견인하여 피하 근막 및 근육으로부터 박리합니다. 그다음 가위 날 하나를 경골의 전측 및 외측에 위치한 근육 아래로 삽입합니다. 날을 근위부와 원위부로 미끄러뜨려 근육을 하부의 뼈로부터 깨끗하게 들어 올립니다.경골(tibia)의 후면 및 내측 하단에 이 기술을 반복하여 경골 아래의 근육들을 분리합니다. 원위 방향으로 밀어내어 이 다리 근육들의 근위단에서 비골(fibula)을 경골으로부터 떼어낼 때는 후면 쪽에 추가적인 힘을 최소한으로 가해야 합니다. 힘줄을 부착 부위와 최대한 가깝게 절단하고, 근육군을 함께 아래쪽으로 당기면서 근육을 원위 방향으로 견인합니다. 가볍게 당기면 발목 관절로부터 원위 부착부가 분리되며, 가위로 발목 관절을 절단합니다.이 단계에서 경골을 대퇴골에서 분리하지 마십시오. 이 연결 부위는 대퇴골을 고관절에서 박리할 때 추가적인 지렛대 역할을 하여 해부를 돕습니다. 대퇴골에서 근육을 분리할 때도 이와 유사한 기술을 사용하십시오. 필요한 경우 후측과 내측 및 외측 모두에서 이 작업을 수행하십시오.이 근육군들의 원위 부착부를 절단하여 무릎 관절로부터 분리합니다. 충분한 노출을 확보하기 위해 필요에 따라 피부 절개 부위를 확장하고 근육 아래쪽을 따라 진행합니다. 대퇴골 끝단을 고관절에서 분리하기 위해, 공여 마우스의 대퇴골과 경골 부착 부위를 제거하여 멸균 거즈 위에 놓습니다.각 뼈를 한 손에 하나씩 잡고 긴 축을 따라 두 뼈를 서로 반대 방향으로 부드럽게 비틀거나 회전시켜 무릎 관절에서 두 뼈를 분리합니다. 긴 뼈에 남아 있는 힘줄 부착물을 제거하려면 4x4 크기의 거즈 조각으로 뼈의 길이를 감쌉니다. 거즈를 단단히 잡고 뼈 전체 길이를 따라 여러 번 긁어내어 표면에 남아 있는 조직을 제거합니다.수집한 뼈를 얼음 위에 놓인 멸균된 1.5 milliliter 마이크로 원심 분리 튜브에 넣으십시오. 공여 뼈를 철저히 소독된 생물안전작업대로 운반하십시오. 뼈 용액을 준비합니다.후드 내에 멸균 필드 드레싱, 멸균 막자사발과 막자, 멸균 핀셋, 멸균 8 mL 튜브, 멸균 PBSA, 1 mL 피펫과 해당 피펫 팁을 준비해야 합니다. 해당 팁을 장착한 100 µL 피펫, 1 mL 주사기 및 20 gauge 바늘도 준비합니다. 핀셋을 사용하여 뼈를 막자사발로 옮긴 후, 막자를 이용해 뼈를 부드럽게 분쇄합니다. 막자사발에 1 mL의 PBS를 피펫으로 넣고, 원형 동작으로 남은 조각들을 계속 분쇄하여 완전히 부유시키십시오.그런 다음 PBS 1 mL를 더 추가하고 계속해서 분쇄하여 분홍색을 띠는 골 용액을 만듭니다. 큰 잔여물은 남도록 주의하며 유발에 담긴 용액을 8 mL 튜브에 천천히 붓습니다. 이 골 용액을 1 mL 주사기로 옮깁니다.20 gauge 바늘을 사용하여 뼈 용액을 얼음 위에 보관하십시오. 뼈 용액 1 µL를 Mac congar 플레이트에 분주하고 표면에 고르게 펴 바릅니다. 멸균 상태를 확인하기 위해 플레이트를 24~48시간 동안 배양하십시오.발가락 꼬집기(toe pinch)를 통해 펜토바르비탈(penta barbital)로 마취된 마우스의 마취 깊이를 평가하여 연조직 손상 및 골 용액 주입을 위한 수술 절차를 시작합니다. 마우스를 플렉시글라스 보드 위에 배와 위로 향하게(supine position) 배치하고, 40번 날의 오스카 클리퍼(Oscar clippers)를 사용하여 복부, 서혜부 및 허벅지 부위의 털을 깎습니다. 각 사지의 원위부를 접착면이 밖으로 향하게 한 얇은 테이프 조각으로 느슨하게 감아 동물을 고정합니다.마우스를 멸균된 수술 구역으로 옮깁니다. 수술 부위를 Betadine으로 닦아냅니다. 그런 다음 알코올로 닦아 멸균합니다.1 mL의 99% isof fluorine을 적신 거즈 조각이 들어 있는 노즈콘을 마우스에 씌웁니다. 동물의 호흡이 느려지기 시작하면 노즈콘을 제거합니다. 실험 과정 중 추가 마취가 필요한 경우, pentobarbital을 추가로 주입하거나 isof fluorine을 투여할 수 있습니다.다음으로 멸균된 필드 드레싱을 접어 마우스의 하지와 머리 부분만 노출되도록 덮어줍니다. 본 연조직 손상 모델은 양측 후지 압착 손상입니다. 마우스의 후지가 약간 외전되고 외회전된 상태로 위치하도록 확인하십시오.이는 정확한 근육에 접근하는 데 도움이 됩니다. 압착 손상을 유도하기 위해 슬관절 굴곡근을 그룹화합니다. 대퇴골의 중앙 지점에 있는 대퇴 후측 근육 주위에 18 centimeter 크기의 대형 지혈鉗(hemostat)을 고정하며, 이때 볼록한 곡면이 대퇴골을 향하게 합니다. 지혈鉗을 첫 번째 클릭 소리가 날 때까지만 잠그고 30 seconds 동안 유지합니다.베벨의 끝부분이 대퇴골에 닿을 때까지 바늘을 피부를 통해 2~3mm 삽입합니다. 양측의 파쇄된 대퇴 근육 조직에 골 용액 0.15 milliliter를 주입합니다. 바늘을 빼낸 후, 멸균 장갑을 낀 손가락으로 주입 부위를 빠르게 눌러 상처 부위로 골 용액이 역류하는 것을 방지합니다.이 손가락을 수 초 동안 그대로 유지하십시오. 생쥐를 다시 케이지에 넣고 마취가 풀리는 즉시 자유롭게 움직일 수 있도록 하십시오. 적절한 통증 관리는 생쥐가 깨어날 때 실시해야 합니다.이 일반적인 도식은 0시간 시점의 외상 이후 발생하는 이상성 면역 반응을 보여줍니다. 외상이 유도됩니다. 이어서 초기 과염증 반응이 나타나며, 이는 6시간째에 정점에 도달하는 것을 확인할 수 있고 전신 염증 및 원격 장기 기능 장애 평가를 통해 측정됩니다.외상 후 면역 반응의 두 번째 구성 요소는 면역 세포 기능 장애로 측정되는 지연성 면역 억제이며, 이는 약 48시간 전후의 저점으로 묘사됩니다. 이것은 외상 직후에 발생하는 혈장 내 염증성 사이토카인 반응의 대표적인 도식이며 전신 염증의 한 예입니다. 간 손상을 통해 측정된 원격 장기 기능 장애 또한 유사한 시간 범위 내에서 증가하는 것으로 나타났습니다.이 대표 도식은 외상 후 후기에 나타나는 면역 세포 기능 장애를 강조하기 위한 예시입니다. 이 절차를 수행할 때, 실험 전 과정에서 멸균 상태를 유지하고 정밀하게 조작하는 것이 중요합니다. 이는 실제 골절이나 상처 감염 모델이 아닙니다.

pseudofracture-an-acute-peripheral-tissue-trauma-model

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연구

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이 문서는 수정된 Ilizarov 외부의 fixators의 적용을 기반으로 긴 뼈 골절을 안정화하는 방법을...

산만 Osteogenesis, 또는 임계 크기의 결함의 치유는 Intramembranous 골화을 평가하기위한 Rigidly 안정 골절 만들기

동물 모델은 생물 의학 연구에서 심각한 뼈 손상을 모방하기 위해 자주 사용됩니다. 크기가 작기 때문에 생쥐에서 안정화된 뼈 병변을 확립하는 것은 대부분의 연구 그룹의 능력을 넘어섭니다. 여기에서는 마우스의 실험적 대퇴골 결함을 확인하고 분석하는 간단한 방법을 설명합니다.

마우스의 간단한 임계 크기의 대퇴 결함 모델

이 프로토콜의 정형 외과 수술 후 neuroinflammation 및 행동 변화, 그리고 노화 중 조직 재생 연구 parabiosis와 결합 메커니즘을 연구 하는 데 사용 되었습니다 마우스 모델을 설명 합니다.

정형 외과 수술 후 인지 기능 장애 및 조직 재생 연구의 마우스 모델

이 프로토콜 분석 endochondral 뼈 쥐에서 치유 하는 데 사용할 수 있습니다 대 퇴 골 골절의 표준화 된 안정화를 위한 intramedullary 나사를 사용 하 여 최소 침 습 osteosynthesis 기술을 설명 합니다.

Endochondral 골절 표준화 된 Biomechanical 조건 하에서 쥐에서 치유를 분석 하는 최소 침 습 모델

Murine 닫힌된 대 퇴 골절 모델 골절 치유를 공부 하는 강력한 플랫폼 이며 뼈 재생을 촉진 하는 새로운 치료 전략. 이 수술 프로토콜의 목표는 일방적인 폐쇄 대 퇴 골절 대 퇴 골을 안정화 하는 intramedullary 강철 막대를 사용 하 여 마우스에 생성.

마우스에 닫힌된 대 퇴 골절의 발생: 뼈 치유 연구 모델

프로토콜의 목표를 일관 된 골절 골절 생성 매개 변수를 최적화 하는 것입니다. 이 프로토콜은 뼈 크기와 동물 사이 존재할 수 있는 형태 변화에 대 한 계정. 또한, 비용 효과적인, 조정 가능한 분쇄 장치 설명 되어 있습니다.

골절 기구 디자인 및 설치류에서 폐쇄 안정 골절에 대 한 프로토콜 최적화

이 프로토콜은 성인 마우스에서 골절을 수행하고 치유 과정을 모니터링하는 방법을 설명합니다.

안정화 핀을 가진 마우스 대퇴골의 횡단 골절

이 프로토콜은 골절 치유 연구를 위해 골수 내 와이어로 안정화된 마우스의 대퇴골에 골절 골절을 확립하기 위한 수술 절차를 설명합니다.

마우스에서 Diaphyseal 대퇴골 골절 모델 확립

이 연구는 쥐 요골골절 모델에서 안정적인 내부 고정을 위해 봉합사와 티타늄 바늘을 혁신적으로 결합하였습니다. 골절 치유는 마이크로 컴퓨터 단층촬영(micro-CT)을 통해 평가되었고, 추가 연구를 위해 일차 등근 신경절(DRG) 신경세포를 분리하여 배양하였다.

쥐 요골골절에 대한 새로운 내부 고정 모델 개발: 골절 치유 평가 및 등근 신경절 분리

이 동영상은 CO를 수행하는 방법에 대해...

만료 CO 2</sub응급실에서 Intubated 또는 자연스럽게 호흡 환자> 측정

배우세요 쥐를 이용한 pseudofracture 모델로 근골격계 외상 후 면역 반응을 평가하는 방법입니다. 이 기법은 장기 생존이 가능하여 외상 후기 면역 연구에 활용됩니다.

Pseudofracture : 급성 주변 조직 외상 모델

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