Name: RNAi Effectors의 세균성 배송 : Transkingdom RNAi (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-08-18T17:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 56 s
Description: 학습하세요 transkingdom RNAi 기술을 활용하여 비병원성 대장균으로 shRNA를 암세포에 전달하고 다제내성을 역전시키는 방법을. 이 기법은 표준 RNAi 전염법보다 효과적인 유전자 침묵화를 제공합니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

작품은 부여없이 지원했습니다. &quot;Bundesministerium FÜR Forschung 놀이 Technologie (BMBF)의 01GU0615.

shRNAs 1) 세균성 배달 <ol><li> 세균성 문화와 시작하기 전에, 하나는 LB - 미디엄과 LB - 한천을 준비한다. </li><li> LB - 매체는 효모 추출물 (0.5 % W / V), bacto tryptone (1.0 % W / V) 및 NaCl (0.6 % W / V)을 무게와 아쿠아 bidest에서 이러한 구성 요소를 희석하십시오. 준비 솔루션은 압력솥에 소독을해야하고 사용할 수 있습니다. </li><li> LB - 한천 플레이트에 대한 bacto 한천 (1.5 % W / V)은 살균 이전 LB - 매체에 추가되어야합니다. </li><li> LB - 한천이 완전히 해산 때까지 전자 레인지에 LB - 한천을 가열. 병가 불에받지 않고 쉽게 감동 수있을 때까지 솔루션은 진정하자. 추가 단계에 긍정적인 클론의 선택에 대한 kanamycin을 (100 MG / ML) 추가합니다. </li><li> 10 cm 페트리 - 요리로 LB - 한천 솔루션 20 ML을 pipetting하여 층류 벤치 (무균 조건)에 LB - 한천 플레이트를 준비합니다. 액체가 고체가 될 때까지 플레이트가 진정하자. 접시는 이제 사용할 수 있습니다 4 ° C에 저장할 수 있습니다. </li><li> ShRNA 인코딩 표현 벡터는 관할 E.로 변환 아르 CaCl 2 프로 시저를 사용하여 열 충격에 의해 대장균 ceq221. </li><li> 플레이트 100 μg / ML의 kanamycin이 포함된 LB - 한천 플레이트에 변형 박테리아가, 뚜껑을 닫으 parafilm으로 접시를 봉인하고 37 거꾸로 육성 ° 밤이여 C. </li><li> 치아 선택과 성장 식민지를 채취하여 긍정적인 클론과 박테리아 미니 문화의 예방. 치아가 100 MG / ML kanamycin과 ° C 박 200 rpm으로 쉐이크에서 37 육성을 포함하는 신선한 LB - 매체의 7.0 ML로 선택 전송합니다. </li><li> 100 ML의 예방 신선한 ° C 박 200 rpm으로 쉐이크에서 37여 밤 미니 1리터 Erlenmeyer 플라스크에 문화, 부화 100 MG / ML kanamycin 1:100이 포함된 LB - 중간. </li><li> 시드 25 X 10 4, 6에서 잘마다 인간의 위장 암종 세포 (EPG85 - 257RDB) (씨앗을 품고 세포의 숫자에 따라 세포주의 세포 성장의 속도에 따라 달라집니다 confluency 24 시간 시딩 후 ~ 70-80%해야합니다) - 물론 요리와 37 이들을 품어 ° C, 밤 동안 5 % CO 2, 수증기 포화 분위기 인치 </li><li> 암 세포 감염으로 이전, TK RNAi 벡터가 포함된 E.의 밤 문화를 통해 대장균은 OD 600 결정하는 광도계로 측정하고 있습니다. 0.5의 광학 밀도까지 박테리아 솔루션을 희석하면 (OD 600 = 0.5 1.6 X 10 8 박테리아 세포 / ML와 동일)에 도달입니다. </li><li> FCS없는 중간 공동 배양 세균 이전에 30 분 대한 암종 세포의 FCS 함유 세포 배양 매체를 교체합니다. </li><li> 1 X PBS로 두 번 박테리아를 씻어하고, 혈청이없는 Leibovitz L - 15 중간에 희석. </li><li> 37 암 원하는 뫄에서 세포 (암 세포 당 세균 세포의 감염의 다중성은 = 숫자)와 공동으로 품어 박테리아와 2 시간 동안 암세포에 희석 세균을 추가 ° C. </li><li> 공동 배양 암세포 2 시간 100 U / ML 페니실린, 100 μg / ML 스트렙토 마이신, 2.5 μg / ML amphotericin, 150 μg /로 보충 혈청 함유 Leibovitz L - 15 중간과 함께 한 1X X PBS로 두 번 세탁하고 나서 ML gentamicin, 100 μg / ML의 kanamycin. </li><li> 37 암 세포를 배양 ° C를 5 % CO 2, 수증기 포화 분위기에서 진행합니다. </li><li> 세균성 치료의 효과는 mRNA 레벨에서 정량 실시간 RT PCR로 측정 형광 현미경, 의해와 단백질 수준에서 서부 얼룩 분석하여 시각 수 있으며, 외과 분석 및 세포 증식의 assays 같은 기능 assays로 표시하실 수 있습니다. (원한다면, 다음 절차가 자세히 설명되어 있습니다.) </li></ol> 2) 대표 결과 프로토콜이 올바르게 수행하면, 결과는 아래의 것들과 비교해야합니다. 형광 현미경 그림 1은 세 시간 박테리아 치료 후 인간의 위장 암종 세포를 (A) 치료 세포 (B)에 비해 보여줍니다. 취급 세포의 핵 주위, 박테리아 발견하실 수 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/2099/2099fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1 : 세균성 치료 (1:500) 후 형광 현미경 인간 위장 암종 세포와 치료 인간의 위장 암종 세포 제어로, DAPI - 얼룩, DAPI 밴드 필터 (Λem가 = 640 NM), 40x 목적. 정량 실시간 RT PCR 그림 2 약 70 %의 MDR1 mRNA의 아래 규정 (블랙 빔)은 치료 박테리아 치료 후 볼 수 있습니다. 부모 전지 MDR1 overexpression의 부족으로 인해 긍정적인 제어 역할을합니다. 257RDB p170가 포함된 셀 라인 플라스미드 백신 MDR1 shRNAs의 다른 R로 transkingdom RNAi 기술의 직접적인 비교로 찍은 표현나이는 전략을 입을. 치료 내성 세포주 EPG85 - 257RDB overexpressing MDR1, 플라스미드 표현 shRNA를 부족한 박테리아와 치료 같은 세포 라인이 세포주 플라스미드 표현을 방지 MRP2 shRNAs 들고 치료 박테리아 치료는 긍정적인 컨트롤로 이동되었습니다. <img src="/files/ftp_upload/2099/2099fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2 : 치료 E. 치료 후 정량적 실시간 PCR RT MDR1 mRNA의 발현 안티 MDR1 shRNAs를 (500 뫄 1) 표현 대장균 ceq221. 정규화는 가사 유전자 aldolase를 사용하여 수행되었습니다. 세포주 EPG85 - 257RDB의 치료 세포의 MDR1/aldolase 비율 100 %를 설정했다. P - 값이 학생의 T - 테스트를 사용하여 계산되었다 (* = P &lt;0.05, ** P = &lt;0.005, ** P = &lt;0.001). 서양 얼룩 분석 그림 3은 규제 아래 MDR1 또한 세균성 치료 후 단백질 수준에서 일어나는 보여줍니다. 그것은 약물에 민감한 부모 세포주 (EPG85 - 257P), 치료 약물 모성 세포주 (EPG85 - 257RDB)의 MDR1 표현과 처리 시료의 MDR1 표현의 부족 MDR1 표현을 보여줍니다. bacterially 취급 세포의 MDR1의 취소 규정은 아래로 볼 수 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/2099/2099fig3.jpg" alt="그림 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 3"> 그림 3 : 서양 얼룩 분석 치료 약물에 민감한 EPG85 - 257P의 MDR1 표현 수준, E. 공동 배양 후 치료 약물 모성 EPG - 257RDB 및 EPG85 - 257RDB니다. 대장균 ceq221 + p43 MDR1. 기본 AB C219 1:100, 및 안티 굴지 1시 5분 000, 보조 AB 방지 마우스 1시 10분 000. 세포 독성 분석 그림 4에 표시된 세포 독성 분석과 같은 기능 분석도 transkingdom RNAi의 기능에 대한 지표입니다. 부모의 세포 라인과 플라스미드 표현 anit - MDR1 shRNA를 포함하는 세포 라인은 daunorubicin 어떤 저항을 보여주지 않습니다. 내성 세포주 EPG85 - 257RDB 두 더욱 컨트롤 Daunorubicin에 대한 저항이 90 %로 되돌릴 수있는 백신 MDR1 shRNA 표현 박테리아로 처리 샘플에 비해 저항에 큰 변화를 표시하지 않습니다. <img src="/files/ftp_upload/2099/2099fig4.jpg" alt="그림 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 4"> 그림 4 : 세포 독성 분석. 의약품 특정 세포 생존에 대한 세포 독성 분석에 의해 결정 IC50 - 값. P - 값이 학생의 T - 테스트를 사용하여 계산되었다 (* = P &lt;0.05, ** P = &lt;0.005, ** P = &lt;0.001). Anthracycline 축적 분석 그림 5에서와 같이 bacterially 취급 샘플 낮춘 저항 (그림 4)에 의하면, 안티 MDR1 shRNA 취급 세포의 anthracycline 축적은 90 % 정도 증가합니다. 부모 세포주 및 세포주 257RDB p170은 100 %로 강한 daunorubicin 축적을 보여줍니다. 내성 변종은 거의 모든 축적을 보여줍니다 않습니다. 안티 MDR1 shRNA 표현 박테리아로 치료 세포는 90 %의 anthracyline 축적 증가를 보여줍니다. <img src="/files/ftp_upload/2099/2099fig5.jpg" alt="그림 5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 5"> 그림 5 : Anthracycline 축적 분석. 육일 유동세포계측법으로 측정 박테리아 치료 후 암 세포의 Anthracycline의 축적. P - 값이 학생의 T - 테스트를 사용하여 계산되었다 (* = P &lt;0.05, ** P = &lt;0.005, ** P = &lt;0.001).

<ol><li>Krühn, A., Wang, A., Fruehauf, J. H., Lage, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delivery+of+short+hairpin+RNAs+by+transkingdom+RNA+interference+modulates+the+classical+ABCB1-mediated+multidrug-resistant+phenotype+of+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Cycle%22%5BJournal%5D)">Delivery of short hairpin RNAs by transkingdom RNA interference modulates the classical ABCB1-mediated multidrug-resistant phenotype of cancer cells.</a> Cell Cycle. 8, 3349-3354 (2009).</li>
<li>Lage, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MDR1%2FP-glycoprotein+%28ABCB1%29+as+target+for+RNA+interference-mediated+reversal+of+multidrug+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Drug+Targets%22%5BJournal%5D)">MDR1/P-glycoprotein (ABCB1) as target for RNA interference-mediated reversal of multidrug resistance.</a> Curr. Drug Targets. 7, 813-821 (2006).</li>
<li>Lage, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+of+cancer+multidrug+resistance%3A+a+still+unsolved+problem%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Mol.+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">An overview of cancer multidrug resistance: a still unsolved problem.</a> Cell. Mol. Life Sci. 65, 3145-3167 (2008).</li>
<li>Lage, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+potential+of+RNA+interference+in+drug-resistant+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Fut.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Therapeutic potential of RNA interference in drug-resistant cancers.</a> Fut. Oncol. 5, 169-185 (2009).</li>
<li>Nguyen, T. A., Fruehauf, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transkingdom+RNA+interference+%28tkRNAi%29%3A+a+novel+method+to+induce+therapeutic+gene+silencing%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Transkingdom RNA interference (tkRNAi): a novel method to induce therapeutic gene silencing.</a> Methods Mol. Biol. 514, 27-34 (2009).</li>
<li>Nieth, C., Priebsch, A., Stege, A., Lage, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+the+classical+multidrug+resistance+%28MDR%29+phenotype+by+RNA+interference+%28RNAi%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Modulation of the classical multidrug resistance (MDR) phenotype by RNA interference (RNAi.</a> FEBS Lett. 545, 144-150 (2003).</li>
<li>Stege, A., Priebsch, A., Nieth, C., Lage, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable+and+complete+overcoming+of+MDR1%2FP-glycoprotein-mediated+multidrug+resistance+in+human+gastric+carcinoma+cells+by+RNA+interference%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Stable and complete overcoming of MDR1/P-glycoprotein-mediated multidrug resistance in human gastric carcinoma cells by RNA interference.</a> Cancer Gene Ther. 11, 699-706 (2004).</li>
<li>Stein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complete+in+vivo+reversal+of+the+multidrug+resistance+%28MDR%29+phenotype+by+jet-injection+of+anti-MDR1+short+hairpin+RNA-encoding+plasmid+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Complete in vivo reversal of the multidrug resistance (MDR) phenotype by jet-injection of anti-MDR1 short hairpin RNA-encoding plasmid DNA.</a> Mol. Ther. 16, 178-186 (2008).</li>
<li>Xiang, S., Fruehauf, J., Li, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short+hairpin+RNA-expressing+bacteria+elicit+RNA+interference+in+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Short hairpin RNA-expressing bacteria elicit RNA interference in mammals.</a> Nat. Biotechnol. 24, 697-702 (2006).</li>
</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

휴대폰 번호는 감염 씨앗과 해당 뫄 사용되는, 비판적으로 세포 관찰하에 라인과 성장을 자신의 속도에 따라 달라집니다. 시딩을위한 최적의 휴대 전화 번호를 찾으려면, 사전 실험 성장의 속도를 결정하는 것이 좋습니다. 이 외에, 다른 MOIs는 세포가 스트레스 죽어없이 박테리아 침공 서있을 수있는 어떤 확장으로 인해 제한을 테스트해야합니다. 관찰에서 유전자의 아래 규정이 다를 수 있습니다 시간의 최적 가리 킵니다. 이것은 최적의 조건을 찾기 위해 특정 기간 동안 실험을 수행하는 것이 좋습니다.

<table><tbody><tr><td>한천(Agar)</td><td>Biochrom AG</td><td>214050</td><td></td></tr><tr><td>Amphotericin B</td><td>Biochrom AG</td><td>A2612</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco 인산 완충 식염수-PBS (10 x)</td><td>Invitrogen GmbH</td><td>14080048</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;E. coli&lt;/em&gt; ceq221</td><td>Cequent Pharmaceuticals Inc.</td><td></td><td>카탈로그 번호 없음, 직접 주문</td></tr><tr><td>Gentamycin</td><td>Biochrom AG</td><td>A2710</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin</td><td>Invitrogen GmbH</td><td></td><td>0.85% 식염수 내에 penicillin G (sodium salt) 및 streptomycin sulfate를 사용하여 penicillin (base) 5,000 units 및 streptomycin (base) 5,000 &amp;mu;g/ml 함유.</td></tr><tr><td>염화나트륨(Sodium chloride)</td><td>Merck KgaA</td><td>1064060500</td><td></td></tr><tr><td>트립톤(Tryptone)</td><td>Difco Laboratories</td><td>211705</td><td></td></tr><tr><td>효모 추출물(Yeast Extract)</td><td>Difco Laboratories</td><td>212750</td><td></td></tr></tbody></table>

rnai effectors의 세균성 배송 : transkingdom rnai

Bacterial Delivery of RNAi Effectors: Transkingdom RNAi

RNA 간섭 (RNAi)는 mRNA의 표현의 구체적인 억제를위한 높은 효과적인 메커니즘을 나타냅니다. 강력한 실험실 도구로서의 가능성이 외에도, RNAi 경로는 치료 활용에 대한 가능성 것으로 보인다. RNA 간섭 (RNAi) 기반 요법, 인도의 개발을위한 RNAi - 중재 대상 세포에 대리인 것이 가장 큰 장애물 중 하나입니다. 이 장애물을 극복하기 위해 소설 전략 transkingdom RNAi (TK RNAi)입니다. 이 기술은 생산과 RNAi를 유도하는 대상 세포로 치료 짧은 헤어핀 RNA (shRNA)를 제공하는 이외의 병원성 세균, 예를 들어 대장균을 사용합니다. 첫 세대 TK RNAi - 중재 벡터, 여행, 관심의 치료 shRNA의 표현 규제에 대한 박테리오 파지 T7 프로 모터가 포함되어 있습니다. 또한, 여행 β1 - 인테 - 긍정적인 포유 동물 세포 listeriolysin O.이 효소를 생산 리스테리아 monocytogenes의 HlyA 유전자를 입력하는 자연 비침 투 박테리아를 허용 invasin을 인코딩 Yersinia의 pseudotuberculosis에서 인보이스 로커스을 가지고하면 치료 shRNA가에서 탈출하실 수 있습니다 항목은 대상 세포의 세포질 내에 vesicles. 여행 구조가 shRNAs의 T7 프로 모터 구동 합성에 필요한 T7 RNA 효소를 인코딩 능력 이외의 병원성 대장균 스트레인로 소개하고 있습니다. 다양한 RNAi 전략에 대해 잘 특징 암 관련 대상 분자가 ABCB1 (MDR1/P-glycoprotein, MDR1/P-gp)입니다. 마약 압출 펌프 및 mediates의 &quot;고전&quot;ABCB1 - 중재 multidrug 저항 (MDR) 특정 교차 저항 패턴이 특징입니다 인간의 암 세포의 표현형으로 ABC - 전송 역할을합니다. 다른 ABCB1 - 표현 MDR 암 세포는 안티 - ABCB1 shRNA 벡터 표현 베어링 E. 취급했다 대장균. 이 절차는 암 세포 내에서 RNAi 경로의 활성화와 ABCB1 인코딩 mRNA의 상당한 아래 규정뿐만 아니라 해당 약품 압출 펌프 결과. 따라서, 약물 축적이 간직한 약물 모성 암 세포의 향상되었으며 MDR의 표현형이 반대했습니다. 이 모델에 의해 데이터가 TK RNAi 인간 암 세포에서 암 관련 요인, 예를 들어 ABCB1의 변조에 적합한 것을 증명 개념을 제공합니다.

RNA 간섭 (RNAi) 기반 요법의 개발을위한, 소설 전략은 transkingdom RNAi (tkRNAi)를 개발하였습니다. 이 기술은 생산과 대상 세포로 치료 짧은 헤어핀 RNA (shRNA)를 제공하는 비 병원성 박테리아를 사용합니다. 여기 tkRNAi가 성공적으로 암 세포의 고전 ABCB1 - 중재 multidrug 저항 (MDR)의 반전을 위해 적용되었다.

RNAi Effectors의 세균성 배송 : Transkingdom RNAi

RNA 간섭(RNA interference, RNAi)은 mRNA 발현을 특이적으로 억제하는 매우 효과적인 메커니즘입니다. 강력한 실험실 도구로서의 잠재력 외에도...

RNA 간섭(RNA interference) 또는 RNAi 절차에서는, 본 프로토콜의 표적 유전자인 MDR1에 대항하는 short hairpin RNA(shRNA) 또는 RNA를 암세포로 전달하기 위해 박테리아가 사용되며, 이를 통해 RNAi로 표적 유전자를 억제하는 것을 목표로 합니다. 먼저 E. coli 박테리아에 shRNA 발현 벡터를 형질전환시킵니다. 그런 다음 Beta-1 양성 암세포를 파종하며, 파종 24시간 후의 합류도(confluency)가 70%에서 80%가 되도록 합니다. 다음 단계에서, shRNA를 발현하는 박테리아와 세포를 2시간 동안 함께 배양합니다.마지막으로, 암세포에 항생제 처리를 하여 공동 배양을 종료합니다. 결과적으로 실시간 PCR, Western blot 분석, 세포 증식 분석 및 약물 축적 분석을 통해 표적 유전자가 mRNA, 단백질 및 기능적 수준에서 하향 조절됨을 보여줍니다. oligo effect mean을 사용하는 siRNA 형질전환과 같은 다른 표준 절차와 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은 target cell로의 RNA 효율적이고 직접적인 전달입니다.Trans Kingdom RNAi(TK RNAi) 기술은 비병원성 E. coli를 사용하여 치료용 short hairpin RNA 또는 shRNA를 생성하고 이를 표적 세포로 전달하여 RNAi를 유도합니다. 1세대 TK RNAi 매개 벡터 또는 trip은 관심 있는 치료용 shRNA의 발현 조절을 위해 박테리오파지 T7 프로모터를 포함합니다. 또한, trip은 invasive를 인코딩하는 Yersinia pseudotuberculosis의 INV locus를 포함하며, 이를 통해 자연적으로 비침습적인 박테리아가 beta 1 integrin 양성 포유류 세포로 진입할 수 있게 합니다.Tripp에는 listeria monocytogenes 유래 유전자인 hli가 포함되어 있으며, 이는 listeria lysin O를 생성합니다. 이 효소는 치료용 HRNA가 표적 세포 세포질 내의 진입 소포에서 빠져나올 수 있게 합니다. Trop 컨스트럭트는 T7 RNA 중합효소를 인코딩하는 수용성 비병원성 esia coli 균주로 도입되며, 이 중합효소는 T7 프로모터에 의해 구동되는 SH RNA 합성에 필요합니다. 박테리아와 진핵 세포를 함께 배양하여 박테리아가 진핵 세포 내로 진입하도록 합니다.SH RNA가 방출되어 RNAi 경로로 진

bacterial-delivery-of-rnai-effectors-transkingdom-rnai

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

RNA 간섭 (RNAi의) 기반의 유전자 녹다운 기술은 Tribolium 연구의 핵심이다. 여기서 우리는 Tribolium의 castaneum 우리의 애벌레의 RNAi 기술에 대한 개요를 제공합니다. 애벌레의 RNAi 연구자들이 다양한 상황에서 유전자의 기능을 연구 할 수 있도록, 기능 상실 표현형에 대한 빠른 액세스를 제공하는 간단하지만 강력한 기술이다.

레드 밀가루 딱정벌레의 애벌레 RNA 간섭, Tribolium castaneum

M13 phagemid 벡터에 의해 전달되는 염기서열 표적 sRNA 발현 카세트를 사용하여 증가하는 대장균 세포 집단에서 유전자 발현을 knockdown하는 방법을 설명합니다.

표적 스르나의 파지 매개 배달에 유전자 발현을 허물고 구축<em&gt; E. 대장균</em

RNA interference (RNAi)는 유전자 기능을 밝히는 데 매우 유용한 도구입니다. 그러나 성체 이전 단계에서 RNAi를 사용하여 유전자를 표적으로 하는 능력은 주요 인간 말라리아 매개체인 Anopheles gambiae에서 제한됩니다. 번데기 발달 중 직접 주입을 통해 유전자 기능을 감소시키는 RNAi 프로토콜에 대해 설명합니다.

에 RNAi의 트리거 배달<em&gt; 아노 펠 레스 gambiae</em&gt; 번데기

여기, 우리는 실험실에서 중간 - 세균 딱정벌레, Dermestes maculatus (D. maculatus)를 양육하기위한 프로토콜을 제시한다. 우리는 또한이 종에서 유전자 기능을 연구하기 위해 배아 표현형을 분석 배아 및 부모의 RNAi를위한 프로토콜과 방법을 공유 할 수 있습니다.

양육 및 숨기기 비틀에 RNA 매개 유전자 최저를 두 번 좌초, Dermestes maculatus

이 문서에는 RNA 간섭 (RNAi) 곤충 먹이 체 관 부 수액에 대 한 식물의 혈관 조직을 통해 이중 가닥 RNA (dsRNA)의 구두 납품을 위해 개발 된 새로운 기술을 보여 줍니다.

체 관 부 식물 수액 공급 Hemipteran 곤충에 RNA 간섭을 유도 하 이중 가닥 RNA 구두 전달 방법

RNA 간섭은 특정 발달 단계에서 유전자 발현을 조작하기 위한 널리 적용가능하고 강력한 기술입니다. 여기서, 우리는 수중 다이빙 딱정벌레 Thermonectus marmoratus에서이 기술을 구현하기 위한 필요한 단계를 기술합니다, 구조 또는 행동에 영향을 미치는 유전자의 녹다운에 유전자 의 취득에서.

특정 발달 시점에서 유전자 발현을 조작하기 위한 강력한 도구로 수생 딱정벌레의 RNA 간섭

λ-적색 매개 재조합 시스템을 사용하여 작은 비암호화 RNA micC의 결실 돌연변이를 생성했습니다.

암호화되지 않은 작은 RNA MicC는 살모넬라 엔테리티디스의 외막 단백질에서 독성에 기여합니다

세균에 의해 생산된 dsRNA의 경구 투여는, 예쁜꼬 마선충에서 일상적으로 사용되는 RNA 간섭(RNAi)에 대한 전달 방법으로서, 성인 모기에 성공적으로 적용되었다. 우리의 방법은 주사를 사용하지 않고도 강력한 역 유전학 연구 및 전송 차단 벡터 연구를 가능하게합니다.

성인 Anopheles 감비아 모기에 효과적인 경구 RNA 간섭 (RNAi) 투여

역방향 유전자 접근 방법은 모기에 벡터 병원균하는 유전자 underly 저항을 결정하는 매우 유용하게 입증했습니다. 이 비디오 프로토콜은 말라리아 기생충을 항구 아노 펠 레스 모기 gambiae로 dsRNA를 주입하기 위해 Dimo​​poulos 연구실에서 사용하는 방법을 보여줍니다. 사출 설정을 조작하고 흉부에 dsRNA를 주입 기술은 그림이다.

성인 모기 (A. gambiae)에서 RNAi의 Assays을위한 프로토콜

이 비디오에서는, 우리는 새로운 초소형 유전자 총을 가진 살아있는 조직에 시약의 정확한 biolistic 전달 절차를 보여줍니다. 우리는 복부 신체 벽 및 단일 세그먼트의 신경에 dsRNA 분자를 제공함으로써 리치 태아의 축삭지도 분자 Netrin의 표현을 노크하고 있습니다.

현지화된 RNAi과 약용 거머리의 이소성 유전자 발현

학습하세요 transkingdom RNAi 기술을 활용하여 비병원성 대장균으로 shRNA를 암세포에 전달하고 다제내성을 역전시키는 방법을. 이 기법은 표준 RNAi 전염법보다 효과적인 유전자 침묵화를 제공합니다.

RNAi Effectors의 세균성 배송 : Transkingdom RNAi

더 많은 동영상 탐색