Name: Murine B 세포를 정화에 유도 및 클래스 스위치 재조합 평가 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-08-13T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 49 s
Description: 배우세요 마우스 비장 B 세포 분리 및 활성화를 통한 클래스 스위치 재조합 분석 방법입니다. 이 기술은 면역학 연구에서 항체 동형 전환과 세포 증식을 연구하는 데 활용됩니다.

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우리는 도움이 토론에 대한 마틴의 실험실에 감사하고 있습니다. 이 책자는 건강 연구의 캐나다 연구소 (걸레 - 89783)에서 부여로 지원됩니다. AM은 캐나다 연구 의자 티어 II 수상에 의해 지원됩니다.

단계 I : 자기 강화를 통해 지라 B 세포의 절연 <ol><li> 실험 생쥐는 면역 체계의 전체 성숙을 보장하기 위해 8~12주 이상되어야합니다. </li><li> 자궁 경부 전위로 마우스를 안락사와 70 % 에탄올에서 만끽해보세요. 수술 복부의 왼쪽 hypochondrium의 피부와 근육을 통해 절개하여 비장을 제거하고 인산의 3 대 조각으로 잘라 (PBS) 살린 버퍼. 모든 도구와 시약은 멸균 수 있도록. </li><li> 부드럽게 매쉬는 PBS로 70 μm의 셀 스트레이너를 통해 1 ML 주사기 플런저의 고무 끝을 비장 사용합니다. 연삭가 큰 (proliferating 예) 세포의 파열로 이어질 수 있으므로 추진 운동보다는 연삭 모션을 사용해야합니다. </li><li> 5 분 더 이상 350 이상 g에서 세포를 스핀 다운 및 PBS의 펠렛을 resuspend. hemocytometer를 사용하여 resuspended 세포를 계산합니다. </li><li> 뚜껑이있는 멸균 5 ML의 폴리스티렌 튜브 5% 정상 쥐의 혈청 (튜브 당 2 ML 최대 볼륨)과 1x10 8 셀 / PBS에 ML의 정지를 준비합니다. </li><li> 세포의 모든 ML에 대한 부정적 EasySep 선택 마우스 B 세포 농축 칵테일 50 μL를 추가합니다. 혼합물을 피펫, 튜브 캡, 15 분 동안 냉장고에 곳입니다. </li><li> 세포의 모든 ML 100 μL EasySep 비오틴 선택 칵테일을 추가합니다. 혼합물을 피펫, 튜브 캡, 15 분 동안 냉장고에 곳입니다. </li><li> 세포의 모든 ML에 대한 EasySep 마그네틱 Nanoparticles 100 μL를 (nanoparticles 잘 혼합되고 솔루션은 동질한지) 추가합니다. 혼합물을 피펫, 튜브 캡, 5 분 동안 냉장고에 곳입니다. </li><li> PBS로 5 분 EasySep 자석의 장소 2.5mL 위로는 솔루션입니다. 자석과 튜브를 반전하고 새로운 폴리스티렌 튜브에 신속하게 부어. 부정적인 선택 세포가 자기 (磁 气) 튜브 벽에 바인딩되므로 튜브를 흔들지 마세요. </li><li> 더욱 세포 현탁액의 순도를 높이려면, 튜브가 추가 5 분 자석에 다시 삽입하고 새로운 튜브로 부어있을 수 있습니다. 이것은 전체 세포 복구를 줄일 수 있습니다. </li><li> B 세포의 순도는 B 세포 표면 마커의 흐름 cytometric 분석에 의해 평가하실 수 있습니다. 농축 다음, 우리는 지속적으로&gt; 95% B220 긍정적인 세포의 순도를 참조하십시오. </li></ol> CFSE 세포 얼룩 : II 단계 <ol><li> ML 당 1 × 10 6 세포의 최종 농도에서 알부민 0.1 % 소 혈청과 보충 따뜻한 PBS에서 분리된 세포를 Resuspend. </li><li> CFSE (무균 디메틸 sulfoxide에 희석)의 5mM 재고 솔루션을 준비하고 튜브에 세포의 모든 ML에 대한 2μL를 추가합니다. 10μM의 최종 농도는 기본 B 세포의 얼룩에 최적입니다. </li><li> 37 품어 ° 어둠 속에서 10 분 동안 C (참고 : CFSE 빛을 민감한하고 가능하면 어둠에 보관한다.) </li><li> 당신의 세포에 소 송아지 혈청의 동일한 볼륨을 추가하고 5 분 얼음 잠복기로 얼룩을 끄다. </li><li> G.를 (제조법 단계 III 참조) 문화 매체로 튜브를 토핑하고 350에 centrifuging하여 세포 와시 미디어 적어도 5 배 부피 상응하는이 소 송아지 혈청의 점도를 중화하고 세포의 펠렛 생산에 추가할 수 있어야합니다. </li><li> 문화 매체에 두 번 더 세포를 씻으십시오. 세포는 이제 자극에 대한 준비가되어 있습니다. </li></ol> III 단계 : LPS와 함께 세포 자극을 <ol><li> 10% 소태아 혈청 및 50 μm의 β - 메르 캅 토 에탄올 /로 RPMI 1640을 보완하여 체외의 B 세포 배양 매체에서를 준비합니다. </li><li> 50μg/mL의 최종 농도에서 LPS를 추가하여 자극 미디어를 준비합니다. 평평한 바닥의 각 잘 96 - 웰 조직 배양 플레이트에 자극을 매체의 나누어지는 125 μL. </li><li> 3.2 X 10 6 세포 / ML의 최종 농도에서 LPS없는 배지에서 CFSE - 스테인드 B 전지를 준비합니다. 귀하의 자극 미디어 부드럽게 pipetting으로 혼합을 포함하고있는 우물에 세포 현탁액 125 μL를 추가합니다. </li><li> 각 물론 지금은 25 μg / ML의 최종 LPS 농도 4 X 10 5 세포가 포함되어 있습니다. 이러한 값을 변경을 원하는대로 만들 수 있지만 이것은 세포 증식 및 클래스 스위칭의 최적 수준을 제공합니다. </li><li> 37 세포를 품어 ° C와 5% 72~96시간에 대한 CO 2. 48 시간 후, 큰 proliferating B 세포의 클러스터는 현미경으로 명확하게 볼 수 있습니다. </li></ol> 단계 IV : 클래스 스위칭의 흐름 cytometric 분석 <ol><li> 이 클래스 스위칭 볼 준비가되면, 그들의 문화 조건에서 세포를 제거하고 얼룩 버퍼 (2 % 소 송아지 혈청 PBS) 1 ML 두 번 그들을 씻으십시오. </li><li> 350g과 incuba에서 그들을 회전하여 세포 펠릿 세포가 아닌 특정 항체 얼룩을 방지하기 위해5% 정상 마우스 혈청 얼음에 15 분 동안 FcBlock per106 세포의 1μg과 버퍼를 얼룩의 100μL에 테 그들. 셀 차단은 얼음에서 수행되어야합니다. </li><li> 당신의 세포를 세척하지 않고, 찬란 태그를 방지 마우스 IgG3 항체의 10 6 세포 당 1μg을 추가하고 세포가 얼음에 30 분 동안 착색 수 있습니다. </li><li> 얼룩 버퍼의 200-300 μL에서 원심 분리하고 resuspend에 의해 두 번 세포를 씻으십시오. 세포는 이제 유동세포계측법에 의해 평가를위한 준비가되어 있습니다. </li><li> CFSE는 최적의 492 nm의에서 흥분 (아르곤 이온 레이저로)와 517 nm의에서 방출됩니다. IgG3 항체의 여기 및 발광 스펙트럼은 형광 염료 공액에 따라 달라집니다. </li></ol> 대표 결과 자기 강화에 따라 세포 현탁액은 분간 작은 원형 세포 (그림 1A)의 동질적인 인구처럼 보이게한다. 자극 48~72시간 후, 확대 proliferating 세포의 격리 클러스터 (그림 1B) 명확하게 볼 수 있습니다. 그들은 apoptosis를 받아야 같은 비 - proliferating 세포의 큰 비율은 작은 입상 나타납니다. 세포의 대부분 7 죽기 시작하기 전에 CSR은 일반적으로 자극 후 72 96시간 사이에서 가장 높은 수준에서 검색하실 수 있습니다. 이 단계에서, 세포는 나중에 딸 세포 인구에 나타나는 전환 세포와 세포 분열의 번호를받은 것입니다. CFSE 희석과 LPS의 자극 96 시간 후 IgG3의 표면 표현의 대표적인 흐름 cytometric 플롯은 그림 2에서 볼 수 있습니다. 표 1. 칵테일 스위칭 Isotype. 참고 : 흥분제 농도 값은 권장 사항입니다. Titrations가 필요할 수 있습니다. <table border="1"><tbody><tr><td> 원하는 Isotype </td><td> 자극 칵테일 </td></tr><tr><td> IgG1and IGE </td><td> LPS (25μg/mL)와 IL - 4 (10 NG / ML) </td></tr><tr><td> IgG1and IGE </td><td> 안티 CD40 (10μg/mL)와 IL - 4 (10 NG / ML) </td></tr><tr><td> IgG2a </td><td> LPS (25μg/mL)와 IFN - γ (10 NG / ML) </td></tr><tr><td> IgG2b 및 IgG3 </td><td> LPS (25μg/mL) </td></tr><tr><td> 이가 </td><td> LPS (25μg/mL), TGF - β (2 NG / ML)와 IL - 5 (1.5 NG / ML) </td></tr></tbody></table><img src="/files/ftp_upload/2130/2130fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. 지라 분리 및 B 세포의 LPS의 자극. (A) 자기 (磁 气) LPS의 자극 전 지라 B 세포를 풍부하게. (B) 48시간 25 μg / LPS의 ML과 자극 후. Proliferating 세포 가공 및 apoptotic 세포의 배경에 클러스터로 볼 수 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/2130/2130fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2. 96시간 후 확산 및 클래스 스위치 재조합. (A) LPS에 대한 CFSE 희석은 문화에 96시간 후 세포를 자극. 각각의 독립적인 피크는 독립적인 세포 분열에 대응하는 CFSE의 형광에 희석을 나타냅니다. (B) IgG3 표현은 세포 분열의 여러 순찰 다음 IgG3 긍정적인 인구의 출현을 보여주는.

<ol><li>Hodgkin, P. D., Lee, J. H., Lyons, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B+cell+differentiation+and+isotype+switching+is+related+to+division+cycle+number%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">B cell differentiation and isotype switching is related to division cycle number.</a> J Exp Med. 184, 277-281 (1996).</li>
<li>McCall, M. N., Hodgkin, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Switch+recombination+and+germ-line+transcription+are+division-regulated+events+in+B+lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Switch recombination and germ-line transcription are division-regulated events in B lymphocytes.</a> Biochim Biophys Acta. 1447, 43-50 (1999).</li>
<li>Manis, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((53BP1+links+DNA+damage-response+pathways+to+immunoglobulin+heavy+chain+class-switch+recombination%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">53BP1 links DNA damage-response pathways to immunoglobulin heavy chain class-switch recombination.</a> Nat Immunol. 5, 481-487 (2004).</li>
<li>de Yebenes, V. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((miR-181b+negatively+regulates+activation-induced+cytidine+deaminase+in+B+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">miR-181b negatively regulates activation-induced cytidine deaminase in B cells.</a> J Exp Med. 205, 2199-2206 (2008).</li>
<li>McBride, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+class+switch+recombination+and+somatic+mutation+by+AID+phosphorylation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Regulation of class switch recombination and somatic mutation by AID phosphorylation.</a> J Exp Med. 205, 2585-2594 (2008).</li>
<li>Ramachandran, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+RNF8%2FRNF168+ubiquitin+ligase+cascade+facilitates+class+switch+recombination%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">The RNF8/RNF168 ubiquitin ligase cascade facilitates class switch recombination.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107, 809-8014 (2010).</li>
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<li>Kaminski, D. A., Stavnezer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody+class+switching+differs+among+SJL%2C+C57BL%2F6+and+129+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Immunol%22%5BJournal%5D)">Antibody class switching differs among SJL, C57BL/6 and 129 mice.</a> Int Immunol. 19, 545-556 (2007).</li>
</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

위에서 설명한 프로토콜은 기본 murine B 세포의 클래스 스위칭하는 동안 보조 표현과 기능을 분석하기위한 표준 분석을 제공합니다. 자극 미디어에 수정이 다른 isotypes (표 1 8, 9에 요약)으로 전환 유도하기 위해 만들 수 있지만이 프로토콜은, IgM에서 IgG3로 전환 유발하는 박테리아 LPS를 사용합니다. 우리는 아직 알려지지 않은 이유로, 태아 송아지 혈청 클래스 체외에서 관찰 전환 수준에 영향을 미칠 수 있다고 지적했습니다. 그것은 같은 많은 번호가 실험 일관성을 보장하기 위해 모든 CSR 실험에 사용하는 것이 중요합니다. 또한 체외 스위칭 속도에 최적의 달성 소태아 혈청 소스 패널을 화면으로 도움이 될 수 있습니다. 마우스 변종은 또한 체외 10 본 클래스 스위칭의 정도에 영향을 줄 수 있습니다. 충분히 C57BL / 감지할 수있을 정도의 스위칭 속도를 달성 6 배경 backcross...

<table><tbody><tr><td>인산염 완충 식염수(Phosphate Buffered Saline)</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>14190</td><td></td></tr><tr><td>EasySep 마우스 B 세포 농축 키트(EasySep Mouse B Cell Enrichment Kit)</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>19754</td><td></td></tr><tr><td>폴리스티렌 튜브(Polystyrene tubes)</td><td>BD Biosciences</td><td>352058</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민(Bovine Serum Albumin)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7030</td><td></td></tr><tr><td>CellTrace CFSE 세포 증식 키트(CellTrace CFSE Cell Proliferation Kit)</td><td>Invitrogen</td><td>C34554</td><td></td></tr><tr><td>우송아지 혈청(Bovine Calf Serum)</td><td>Hyclone</td><td>SH30072.03</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 배양 배지(RPMI 1640 Culture Medium)</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>11875</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;Escherichia coli&lt;/em&gt; 유래 리포폴리사카라이드(Lipopolysaccharides)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L6529</td><td></td></tr><tr><td>&amp;#946;-mercapt&amp;#8211;thanol</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>21985</td><td></td></tr><tr><td>소 태아 혈청(Fetal Bovine Serum)</td><td>Hyclone</td><td>SH30396.03</td><td></td></tr><tr><td>정상 마우스 혈청(Normal Mouse Serum)</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>011-000</td><td></td></tr><tr><td>정제된 랫드 항-마우스 CD16/CD32 (Mouse BD Fc Block)</td><td>BD Biosciences</td><td>553141</td><td></td></tr><tr><td>랫드 항-마우스 IgG3(Rat Anti-Mouse IgG3)</td><td>BD Biosciences</td><td>553401</td><td></td></tr></tbody></table>

murine b 세포를 정화에 유도 및 클래스 스위치 재조합 평가

Induction and Assessment of Class Switch Recombination in Purified Murine B Cells

체액성 면역은 B 세포에 의해 유지 및 항체의 분비를 통해 중재 면역 시스템의 지점이다. B 세포 활성화되면 면역 글로불린 로커스는 바인딩 용량과 분비 항체의 이펙터 기능을 변경하는 유전자 수정 일련의를 겪습. 이 프로세스는 기본 IgM 항체의 isotype은 IgG, 이가, 또는 IGE 중 하나에 대체되는 클래스 스위치 재조합 (CSR)으로 알려진 게놈 재조합 이벤트로 강조 표시됩니다. 각 isotype되므로 면역의 유지 관리 CSR은 중요하고 독특한 이펙터 기능을 가지고 있습니다. 면역 글로불린 로커스의 다변화는 효소 활성 유발 cytidine deaminase의 (AID)에 의해 중재됩니다. 자세히이 과정을 설명하는 도식 동영상은 온라인 (http://video.med.utoronto.ca/videoprojects/immunology/aam.html)입니다. AID의 활동 및 CSR의 경로는 일반적으로 B 세포 기능과 마우스의 체액성 면역의 평가에서 공부하고 있습니다. 이 보고서에 제시된 프로토콜은 murine spleens와 클래스 (다른 항체 isotypes에 대한 표 1 참조) IgG3로 전환 유발하는 박테리아 lipopolysaccharide (LPS)와 후속 자극에서 B 세포 분리의 방법을 보여줍니다. 또한, 형광 세포 염색 얼룩 Carboxyfluorescein succinimidyl 에스테르 (CFSE)를 자극 세포의 세포 분열, 스위칭 1, 2 isotype에 중요한 프로세스를 모니터하는 데 사용됩니다. 구호품과 CSR이 발생하는 메커니즘의 규정은 아직 불분명하고 있으므로 체외 클래스 스위치 assays 다양한 마우스 모델에서 이러한 프로세스를 테스트하기위한 신뢰할 수있는 방법을 제공합니다. 이러한 assays는 이전에 다음 ID로 녹아웃 마우스 3를 사용하여 유전자 결핍의 맥락에서 사용되었습니다. 또한, 관내는 B 세포의 스위칭 RNA의 분해 또는 transgene 표현 4-6에 의해 유전자 발현을 조절하는 바이러스 전달 앞에 수 있습니다. 실험 이러한 종류의 데이터는 구호 활동, CSR 반응의 해상도 및 마우스에서 항체 - 매개 면역에 대한 우리의 이해에 영향을합니다.

항원 노출에 따라 활성화된 B 세포의 subpopulations는 독특한 효과기 기능 항체 isotypes를 만들어 클래스 스위치 재조합 (CSR)으로 알려진 공정을 받고있다. 이 보고서에 제시된 프로토콜은 CSR을 유도하고 분석하는 방법을 설명합니다<em&gt; 체외에서</em&gt; B 세포 기능을 공부 목적.

Murine B 세포를 정화에 유도 및 클래스 스위치 재조합 평가

체액성 면역은 B 세포에 의해 유지되며 항체 분비를 통해 매개되는 면역 체계의 한 분야입니다. B 세포가 활성화되면, ...

체액성 면역 반응 동안, 항원에 의해 활성화된 B 세포는 반응이 진행됨에 따라 증식하고 항체를 분비합니다. 증식 및 클래스 전환(class switching)을 평가하기 위해 기본 IgM 항체 동형(isotype)이 더 다양한 IgG, IgA 또는 IgE 동형으로 대체됩니다. 자성 세포 분리법을 사용하여 실험용 마우스로부터 시험관 내(in vitro) 비장 B 세포를 분리합니다.세포는 증식 상태를 관찰하기 위해 형광 염료인 CFSE로 염색하며, 이러한 증식은 박테리아 L-P-S-L-P-S 처리로 인해 자극됩니다. L-P-S-L-P-S 자극은 증식과 더불어 IgG3 동형 단백질로의 클래스 전환 또한 유도하며, 이는 유세포 분석법으로 관찰할 수 있습니다. 오늘은 순수한 비장 B 세포를 분리하고 활성화하는 기술을 보여드리겠습니다. 이 기술은 인비트로(in vitro)에서 클래스 전환 재조합과 증식을 관찰하는 데 사용할 수 있으며, activation induced citing in deaminase의 기능 및 조절을 포함하여 B 세포 면역 분야의 핵심 질문들에 대한 답을 찾는 데에도 활용될 수 있습니다.안락사시킨 마우스를 70% ethanol에 담그는 것으로 시작합니다. 면역 체계가 완전히 성숙하도록 마우스의 연령은 8~12주여야 합니다. 멸균 가위를 사용하여 복부 왼쪽 늑골하 구역의 피부와 근육을 절개합니다. 가위나 포셉을 사용하여 인접 조직으로부터 비장을 적출합니다.다음으로, PBS 내에서 이를 세 개의 큰 조각으로 자릅니다. 그런 다음 1 mL 주사기 플런저의 고무 끝을 사용하여 비장을 70 µm 세포 스트레이너를 통해 PBS로 부드럽게 으깹니다. 이때 갈아내는 동작이 아니라 밀어내는 동작을 사용해야 합니다.마쇄 과정에서 크기가 큰 증식 세포가 파괴될 수 있으므로, 세포를 350 G 이하의 속도로 5분 동안 원심 분리합니다. 그 후 펠렛을 PBS에 재현탁합니다.멸균된 5 mL 폴리스티렌 튜브 내의 재현탁된 세포를 헤모사이토미터를 사용하여 계수하십시오. 5% 정상 쥐 혈청이 포함된 PBS에서 mL당 1 × 10⁸개의 세포 현탁액을 준비하십시오. 각 튜브에는 최대 2 mL까지 첨가할 수 있습니다.다음으로, 세포 1 mL당 50 µL의 EP negative selection Mouse B-cell enrichment cocktail을 추가합니다. 그 후 튜브의 캡을 닫고 냉장고에 15분 동안 보관합니다.세포 1 mL

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연구

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Immunology and Infection

면역학 및 감염학

에서 유전자의 구조와 기능 분석의 효율적인...

B 세포의 재조합 생산 및 Retroviral 감염

우리는 overexpression 또는 shRNA 함유 인간 라모스 B - 세포주에서 어떻게 이러한 세포에 체세포 hypermutation를 측정하는 구성합니다.의 retroviral 또는 lentiviral 감염을 수행하는 방법을...

특정 유전자의 Overexpression 또는 최저 후 라모스의 B 세포에서 체세포 Hypermutation을 평가

B 세포 표면의 Fc 수용체에 결합된 세포구성 IgE 분자로 인해 마우스의 클래스 스위치 재조합에 대한 체외 분석은 어렵습니다.  세포질 형광 염색을 위한 고정 및 투과화 전에 표면 결합 IgE의 트립신 매개 절단을 사용하여 IgE를 검출하는 방법을 설명합니다.

진정한 검출 마우스 B 리니지 세포를 IgE 항체가 발현

bm12 림프구가 C57BL/6 수용자로 이식되는 것은 전신 홍반성 루푸스의 확립된 모델입니다. 여기에서는 이 모델을 사용하여 질병을 시작하는 방법과 유세포 분석을 통해 T 여포 보조 세포, 생식 중심 B 세포 및 형질 세포를 특성화하는 방법을 설명합니다.

C57BL / 6 마​​우스의 전신 홍 반성 루푸스의 BM12 유도 성 모델 (SLE)

림프구는 적응 면역 반응의 주요 플레이어입니다. 여기에서는 in vitro 및 in vivo에서 원하는 분자의 림프구 활성화의 생리학적 기능을 결정하기 위한 림프구 정제 프로토콜을 제시합니다. 설명된 실험 절차는 대조군 림프구와 유전자 변형 림프구 간의 기능적 능력을 비교하는 데 적합합니다.

분리 및 쥐 림프구의 활성화

후 성적인 요소는 유전자 발현을 조절 하 고 B 세포 기능을 조절 하는 유전자 프로그램으로 작용할 수 있습니다. 결합 하 여 체 외에서 B 세포 자극, qRT-PCR, 및 높은 처리량 예측에 관한 시퀀스 및 mRNA 순서 접근, 우리 B 세포에서 miRNA 및 유전자 표현의 epigenetic 변조를 분석할 수 있습니다.

MicroRNAs 받 클래스 스위치 DNA 재조합 및 플라즈마 세포 차별화에 B 세포 유도에서 mRNAs의 게놈 넓은 분석의 HDAC 억제제 중재 변조

이 종이에 우리는 ELISA를 사용 하 여 마우스에서 T-종속 및 T-독립 면역 글로불린 (Ig) isotype 응답 하는 프로토콜을 설명 합니다. 이 방법은 단독으로 사용 하거나 흐름 함께에서 cytometry 쥐 T-종속 및 T 독립적인 항 원 면역 다음에 Ig 중재 하는 B 세포 isotype 응답 차이 식별 하는 연구를 수 있게 됩니다.

Thymus 종속 및 독립 Thymus 면역 글로불린 Isotype 반응 효소 연결 된 Immunosorbent 분석 결과 사용 하 여 마우스의 특성

여기서 우리는 생체 내 B-1a 세포 이동 및 국소화를 검사하기 위해 뮤린 B-1a 세포의 레트로바이러스 과발현 및 입양 전달방법을 설명한다. 본 프로토콜은 기증자 B-1a 세포 국소화의 정량화 또는 기증자 세포 유래 분비 인자의 분석 후 입양 전달을 포함하는 다양한 다운스트림 기능 성 분석을 위해 확장될 수 있다.

뮤린 B-1a 세포에 CXCR4의 레트로 바이러스 과발현 및 골수와 IgM 생산에 표적 B-1a 세포 이동을 위한 채택 전송

여기에 제시된 마우스 페이어의 패치에서 발아 센터 B 세포를 사용하여 면역 글로불린 무거운 사슬 유전자 궤적 내의 체세포 초열을 정량화하는 분석이다.

마우스 페이어의 패치에서 발아 센터 B 세포의 JH4 인트론에서 체증 의 분석

본 명세서에 의한 복막, 비장 및 골수 조직에서 뮤린 면역 B 세포 구획의 이질성에 대한 간단한 분석을 설명한다. 프로토콜을 다른 마우스 조직으로 조정하고 확장할 수 있습니다.

뮤린 B 세포 발달의 유동 세포 측정 특성화

본 프로토콜에서, 장내 미생물-항원 특이적 T 세포 입양 상반염 모델이 기재된다. CD4+ T 세포는 CBir1 TCR 형질전환 마우스로부터 분리된다. 이들은 면역 지배적인 창자 microbiota 항원 CBir1 flagellin를 위해 특정합니다, 수신자 Rag1/-- 마우스로 전송되는, 장 염증으로 이끌어 내는.

CBir1 TCR 형질 전환 CD4+ T 세포의 입양 전달에 의한 장 염증유도

배우세요 마우스 비장 B 세포 분리 및 활성화를 통한 클래스 스위치 재조합 분석 방법입니다. 이 기술은 면역학 연구에서 항체 동형 전환과 세포 증식을 연구하는 데 활용됩니다.

Murine B 세포를 정화에 유도 및 클래스 스위치 재조합 평가

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