Name: SJL 마우스의 실험적 면역 Hypophysitis의 유도 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-17T17:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 38 s
Description: 학습하세요 SJL 마우스에서 자가면역 뇌하수체염을 유도하는 방법을. 뇌하수체 면역원 주사와 조직병리학적 분석을 통해 질병 중증도를 평가하는 실험 동물 모델 구축 프로토콜을 확인하세요.

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이 작품은 PC에 NIH 부여 DK080351에 의해 그리고 테리와 크리스틴 고어 가족의 관대한 선물에 의해 지원되었다.

실험 프로토콜 뇌하수체 immunogen가 (동반자 문서를 참조) 준비되면, 그것은 SJL 마우스 (잭슨 연구소, 주식 000,686)으로 subcutaneously 주입니다. 두 번째 동일한 주사는 7 일 후에 반복됩니다. 생쥐는 다음 생체내 및 사후 결과에 수집하는 데 사용됩니다. 1 단계. SJL 마우스로 뇌하수체 immunogen의 피하 주입 마우스는 20 MG / ML 2,2,2 - Tribromoethanol 0.5 ML (Avertin, TCI 미국, T - 1420) intraperitoneally를 주사하여 첫번째 anesthetized 있습니다. 생쥐는 다음 2181 문서를 조브로 동반자에 표시된, 뇌하수체 유제 100 μl와 subcutaneously 주입 뇌하수체 추출하고 완전한 프로 인드의 도움이되는의 0.25 MG 1 MG를 포함하고 있습니다. 에멀전은 왼쪽 지느러미 뒷부분 다리 지역 ((50 μL)과 오른쪽 사타구니 지역 (50 μL)에 주입합니다. 뇌하수체 유제는 반대 사이트 (50 오른쪽 지느러미 뒷부분 다리 지역에서 μl과에 일 7 일에 다시 주입 왼쪽 사타구니 지역에 50 μl). 마우스는 처음 3 일 동안 매일 모니터링하고 처음으로 예방 접종 후 일반적으로 28일는 희생의 날 때까지 매주 수 있습니다. 2 단계. 생체내의 결과에의 수집 : 블러드 assays 생쥐가 살아있는 동안 가장 일반적으로 실험 결과를 평가하는 데 사용되는 조직은 혈액이다. 혈액은 일상적 십사일 뇌하수체 항체 또는 크린 시토킨 및 chemokines 같은 다른 마커의 혈청 수준을 측정하는 최초의 예방 접종 후에 그려진 것입니다. 혈액은 다음과 같이 라이브 생쥐에서 수집됩니다. 생쥐는 목의 아저씨에 의해 안전하게 개최되고 턱뼈의 뒤쪽이 있습니다. 턱뼈의 뒤쪽이있는되면, 4mm의 lancets은 은빛의 턱밑 혈관 번들을 사용하고 있습니다. 혈액을 수집 후 지역에 온 장소 압력은 혈종을 피하기 위해 알코올 면봉을 사용합니다. 수집된 혈액은 20 분 동안 2,000g에 centrifuged 및 사용 ° C까지 -80에 저장됩니다. 3 단계. 사후 결과의 수집 : 뇌하수체 조직 병리학 마우스는 일반적으로 28일 첫 예방 접종 후 희생하고 있습니다. 사나의 진단을 수립하는 데 필요한 추기경 기능은 조혈 mononuclear 세포에 의해 뇌하수체의 침투이다. 생쥐는 CO 2 perfused되는 밀폐된 플라스틱 챔버에서 그들을 배치하여 euthanized 있습니다. 마우스는 8 분 총 챔버에 보관됩니다. 안락사 후, 뇌하수체는 동반자 문서에 설명된대로 수집됩니다. 병에 걸린 뇌하수체가 부풀어 오르고 주변 두라 메이터 더 확고 자기편 나타납니다. 샤프 포셉은 뇌하수체를 둘러싼 meninges을 느슨하게하는 데 사용됩니다. 일단 쐐기 꼴의 뼈에서 자유롭게 이동 뇌하수체, 뇌하수체의 한쪽 끝을은 집게로 쥐었다이며, 뇌하수체는 신중하게 해제됩니다. 선 그러면 벡스 테드의 정착액 5 포함된 microcentrifuge 관에 배치됩니다. 뇌하수체는 야간 고정 렌즈 종이에 싼, 그리고 카세트에 배치됩니다. 이 선들은 다음 프로토콜을 사용하여 처리됩니다 : <table border="1"><tbody><tr><td> 역 번호 </td><td> 시약 </td><td> 분 시간 </td><td> 온도 (섭씨) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 70 % 알콜 </td><td> 5 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 70 % 알콜 </td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 95 % 알콜 </td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 95 % 알콜 </td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 5 </td><td> 100 % 알코올 </td><td> 15 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 6 </td><td> 100 % 알코올 </td><td> 7.5 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 7 </td><td> 100 % 알코올 </td><td> 7.5 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 8 </td><td> 크실렌 </td><td> 20 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 9 </td><td> 크실렌 </td><td> 20 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 10 </td><td> 크실렌 </td><tD&gt; 20 </td><td> 25 </td></tr><tr><td> 11 </td><td> 파라핀 </td><td> 30 </td><td> 58 </td></tr><tr><td> 12 </td><td> 파라핀 </td><td> 5 </td><td> 58 </td></tr><tr><td> 13 </td><td> 파라핀 </td><td> 5 </td><td> 58 </td></tr></tbody></table> 처리 후, 뇌하수체 분비는 파라핀에 포함된하고 적어도 5 nonconsecutive 섹션 (5 μm의 두께)가 각각의 선 (腺)에서 절단됩니다. sectioning 후,이 선들은 hematoxylin과 eosin 물들일 및 mononuclear 침투를 정할 분석하고 있습니다. 가장 심각한 침투있는 부분은 점수를 위해 선택됩니다. 심각도는 면역 세포에 의해 앞쪽에 뇌하수체 교체 또는 파괴의 범위의 주관적 평가에 따라 점수입니다 등급 0, 아니 질병, 1 학년, 2% -20 % 참여, 학년이, 20 % -30 %, 3 학년, 30% -50 %; 학년 4, 50 % -90 %; 5 학년, 큰 90 % 이상. 모든 섹션은 섹션의 원본 멀게 두 명으로 득점하고 있습니다.

<ol><li>Tzou, S. C., Lupi, I., Landek, M., Gutenberg, A., Tzou, Y. M., Kimura, H., Pinna, G., Rose, N. R., Caturegli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmune+Hypophysitis+of+SJL+mice%3A+Clinical+Insights+from+a+New+Animal+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Autoimmune Hypophysitis of SJL mice: Clinical Insights from a New Animal Model.</a> Endocrinology. , (2008).</li>
<li>Twarog, F. J., Rose, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+production+of+thyroid+autoantibodies+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">The production of thyroid autoantibodies in mice.</a> J Immunol. 101, 242-2450 (1968).</li>
<li>Patrick, J., Lindstrom, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmune+response+to+acetylcholine+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Autoimmune response to acetylcholine receptor.</a> Science. 180, 871-872 (1973).</li>
<li>Caturegli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmune+hypophysitis%3A+an+underestimated+disease+in+search+of+its+autoantigen%28s%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Autoimmune hypophysitis: an underestimated disease in search of its autoantigen(s).</a> J Clin Endocrinol Metab. 92, 2038-2040 (2007).</li>
<li>Beckstead, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+technique+for+preservation+of+fixation-sensitive+antigens+in+paraffin-embedded+tissues%3A+addendum%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">A simple technique for preservation of fixation-sensitive antigens in paraffin-embedded tissues: addendum.</a> J Histochem Cytochem. 43, 345-345 (1995).</li>
<li>Levine, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allergic+adenophypophysitis%3A+new+experimental+disease+of+the+pituitary+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Allergic adenophypophysitis: new experimental disease of the pituitary gland.</a> Science. 158, 1190-1191 (1967).</li>
<li>Yoon, J. W., Choi, D. S., Liang, H. C., Baek, H. S., Ko, I. Y., Jun, H. S., Gillam, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+an+organ-specific+autoimmune+disease%2C+lymphocytic+hypophysitis%2C+in+hamsters+by+recombinant+rubella+virus+glycoprotein+and+prevention+of+disease+by+neonatal+thymectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Induction of an organ-specific autoimmune disease, lymphocytic hypophysitis, in hamsters by recombinant rubella virus glycoprotein and prevention of disease by neonatal thymectomy.</a> Journal of Virology. 66, 1210-1214 (1992).</li>
<li>Davis, J. R., McMahon, R. F., Lowenstein, P. R., Castro, M. G., Lincoln, G. A., McNeilly, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenovirus-mediated+gene+transfer+in+the+ovine+pituitary+gland+is+associated+with+hypophysitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Adenovirus-mediated gene transfer in the ovine pituitary gland is associated with hypophysitis.</a> J Endocrinol. 173, 265-271 (2002).</li>
<li>Rotondo, F., Quintanar-Stephano, A., Asa, S. L., Lombardero, M., Berczi, I., Scheithauer, B. W., Horvath, E., Kovacs, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenohypophysitis+in+rat+pituitary+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Exp+Pathol%22%5BJournal%5D)">Adenohypophysitis in rat pituitary allografts.</a> Int J Exp Pathol. , (2010).</li>
</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

네 기술은 실험 동물에 hypophysitis을 유발하는 것으로보고되었습니다. 프로 인드의 도움이되는 섞인 뇌하수체 단백질의 주입이이 문서에서 설명하는 기술은, 1967 년 6 거슬러 올라가는 가장 오래된 하나이며, 최근에는 한 개선되었습니다. 기타 기술 1992 7 용해 풍진 바이러스 glycoproteins의 분사 2002 년 8 뇌하수체에 직접 아데노 바이러스의 stereotactic 주입, 2010 9 다른 쥐의 변형의 신장 캡슐 아래의 쥐를 변형에서 뇌하수체 분비의 이식 아르 . 프로 인드의 도움이되는 접근 방법의 주요 장점은 밀접하게 인간의 대응과 유사한 질병을 유발에 더 정확하게, 덜 침략 더 일관되고, 무엇보다도있다는 것입니다. 이 비디오 문서에서 설명하는 기술은이 매혹적인 질병의 우리의 이해를 개선하기 위해 수사관에 의해 사용할 수 hypophysitis의 재현성 모델을 산출.

<table><tbody><tr><td>SJL 마우스 (The Jackson Laboratories)</td><td></td><td>스톡 000686</td><td></td></tr><tr><td>2,2,2-트리브로모&amp;#8211;트리에탄올 (Avertin)</td><td>TCI America</td><td>T-1420</td><td></td></tr><tr><td>백스테드&amp;rsquo;고정액</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

sjl 마우스의 실험적 면역 hypophysitis의 유도

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

면역 hypophysitis는 민감한 생쥐 한에 도움이되는 섞인 뇌하수체 단백질의 주입에 의해 실험적으로 복제하실 수 있습니다. 마우스 모델은 종종 인간에서 발생하는 동일한 프로세스의 좋은 복제를 제공하고, 우리가 질병이 전개 방법을 학습하실 수 있습니다. 유형 1A 당뇨병 같은자가 면역 질환의 경우 저절로 인간의 대응과 유사한 질병을 개발하는 모델 (NOD 마우스)가 있습니다. 많은 다른 면역 질환, 그러나, 모델은 실험적으로 유도해야합니다. 이 점에서 일반적인 접근 방법은 연구되고있는 기관에서 파생된 지배적인 항원으로 마우스를 주입하는 것입니다. 예를 들어, 면역 thyroiditis에 관심이 조사는 thyroglobulin 2 마우스를 투입하고, myasthenia gravis에 관심있는 사람은 아세틸콜린 수용체 3을 주입. 특정 면역 질환에 대한 autoantigen가 알려져 있지 않을 경우, 수사는 면역 반응의 표적 기관에서 원유 단백질 추출물을 주입. 면역 hypophysitis 들어, 병원성 autoantigen (들)은 4 식별을 유지하고, 따라서 원유 뇌하수체 단백질 준비가 사용됩니다. 이 동영상이 문서에서 우리는 SJL 생쥐의 면역 실험 hypophysitis를 유도하는 방법을 보여줍니다.

이 동영상은 어떻게 조직 병리학하여 심각도를 평가하기 위해 SJL 마우스 및 면역 hypophysitis를 유도하는 방법을 보여줍니다.

SJL 마우스의 실험적 면역 Hypophysitis의 유도

자가면역성 뇌하수체염은 감수성이 있는 마우스에 보조제와 혼합된 뇌하수체 단백질을 주입함으로써 실험적으로 재현될 수 있습니다1. 마우스 ...

자가면역 뇌하수체염은 뇌하수선의 비대와 하나 이상의 뇌하수체 호르몬 결핍을 특징으로 합니다. 원인이 되는 자가 항원은 아직 알려지지 않았습니다. 동반 영상에서는 마우스 뇌하수체 면역원 준비 프로토콜을 보여주며, 이는 인간의 자가면역 림프구성 뇌하수체염과 유사한 마우스 모델을 제작하는 데 사용될 것입니다.뇌하수체 면역원을 감수성 마우스 계통에 주입합니다. 그 후 7일 뒤에 주입을 반복하고, 14일 후에 바이오마커 연구를 위해 혈액을 수집합니다. 28일째에 희생시킨 마우스로부터 뇌하수체를 적출하여 절편을 만들고 염색함으로써 백혈구 침윤 정도를 결정합니다.자가면역성 뇌하수체염은 안장(sella)에서 발생하는 다른 비호르몬 분비성 종괴와 구별하기 어려울 수 있어 점점 더 중요하게 인식되고 있는 질환입니다. 이 질환은 약 50년 전에 처음 기술되었으나, 자가면역성 뇌하수체염에서 환자의 면역 체계에 의해 인식되는 자가항원은 여전히 불분명한 상태였습니다. 2008년에 저희는 모사하고자 했던 인간 질병을 밀접하게 재현하는 마우스 모델의 개발 내용을 발표했습니다.이 마우스 모델은 관련된 뇌하수체 자가 항원을 발견하고, 뇌하수체염의 병인 및 자연 경과에 대해 더 자세히 알아보는 데 사용할 수 있습니다. 이 모델은 SJL 계통과 같이 감수성이 있는 계통에 마우스 뇌하수체 단백질을 주입하는 방식을 기반으로 합니다. 이러한 단백질은 강력한 면역 증강제와 혼합되어야 하며, 이를 통해 국소 염증 환경을 조성함으로써 결과적으로 뇌하수체 자가 반응성 림프구의 출현을 유도합니다.먼저 주사 부위를 배출하는 림프절에서, 그 다음으로 뇌하수체에서 발생합니다. 이 모델은 마리당 총 2 mg의 뇌하수체 단백질이라는 비교적 많은 양의 주입이 필요합니다. 이는 해당 자가항원 또는 자가항원들이 뇌하수체 내에 아주 소량으로 존재함을 시사합니다. 적절하게 준비된 에멀젼의 주입은 질환 유도에 매우 중요한데, 이는 주사 부위에서 뇌하수체 단백질이 천천히 지속적으로 방출되게 하여 궁극적으로 뇌하수체 특이적 림프구의 생성과 활성화를 지원하기 때문입니다.동반 영상에서는 뇌하수체 면역원 제조 방법이 제시됩니다. 안락사시킨 마우스에서 분리한 뇌하수체를 균질화하고 저속 원심분리를 통해 투명화합니다. 이후 BCA 분석법을 이용한 비색법으로 단백질 혼합물의 양을 측정하고, 폴리아크릴아마이드 겔 전기영동으로 품질을 평가합니다.그 다음, 수성 단백질 균질액을 비활성화된 mycoba

induction-of-experimental-autoimmune-hypophysitis-in-sjl-mice

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

지연 유형 과민성 (DTH)는 CCR7 - 효과기 기억 T (TEM) lymphocytes로 인한 염증 반응이다. 여기서 우리는, 항원 특정 TEM 세포를 활성화 루이스 쥐에서 입양 DTH를 유발하고 염증 반응을 모니터링하는 방법을 보여줍니다.

고양이의 입양 지연 유형 과민성의 유도 및 모니터링

면역 hypophysitis는 마우스 뇌하수체의 단백질 추출물을 주사로 쥐 복제하​​실 수 있습니다.

실험 면역 Hypophysitis의 유도를위한 마우스 뇌하수체 Immunogen의 준비

이 비디오는 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질과 불활성화된 결핵균의 조합을 주입하여 마우스 모델에서 실험적 자가면역 뇌척수염을 유도하는 방법을 보여줍니다. 이 모델을 통해 연구원들은 질병 메커니즘을 연구하고 치료 개입을 테스트할 수 있습니다.

마우스 모델에서 실험적 자가면역 뇌척수염 유도

이 비디오에서는 실험적 자가면역 뇌척수염(EAE)을 사용하여 다발성 경화증의 마우스 모델을 구축합니다. 마우스에 뉴런 펩타이드와 보조제가 포함된 에멀젼을 주입하여 자가반응성 T세포를 활성화하는 면역 반응을 유발합니다. 그 다음에는 백일해 독소(PTX)를 주입하여 혈액뇌장벽 투과성을 높여 자가반응성 T세포가 뇌에 침투할 수 있도록 합니다. 이 침투는 궁극적으로 수초성 손상을 초래하는 신호 폭포를 시작하여 다발성 경화증의 탈수초성 상태를 모방합니다.

bm12 림프구가 C57BL/6 수용자로 이식되는 것은 전신 홍반성 루푸스의 확립된 모델입니다. 여기에서는 이 모델을 사용하여 질병을 시작하는 방법과 유세포 분석을 통해 T 여포 보조 세포, 생식 중심 B 세포 및 형질 세포를 특성화하는 방법을 설명합니다.

C57BL / 6 마​​우스의 전신 홍 반성 루푸스의 BM12 유도 성 모델 (SLE)

이 원고는 다양한 질병 단계에서 각각 유세포 분석 및 정량적 PCR을 사용하여 림프절, 비장, 혈액 및 척수의 면역 세포 분포 및 mRNA 사이토카인 수치를 평가하는 방법과 함께 실험적 자가면역 뇌척수염(EAE) 모델의 유도 및 채점 방법을 설명합니다.

다양한 조직에서 면역 세포의 질병에 의존하는 유통의 마우스 및 평가에 실험자가 면역 뇌척수염의 유도

이 보고서는 성공적으로 유도 실험 자가 면역 신경 염 (EAN) myelin 단백질을 사용 하 여 0 (P0)180-199 펩타이드 Freund의 완전 한 보조 및 백 일 해 독 소와 함께 하는 간단한 방법을 설명 합니다. 우리는 정확 하 게 기능적인 적자와이 상품에서 발생 하는 neuropathology의 정도 평가 정교한 패러다임 제시.

기능과 Neuropathological 평가 대 한 C57BL/6 쥐에 실험 자가 면역 신경 염을 유발 하는 간단한 방법

우리는이 질병에서 볼 수있는 성별 차이를 포함하여 약물 유발 자가면역 간염의 발병 기전을 연구하는 데 활용할 수있는 BALB / c 마우스의 생체 내 예방 접종, 번역 형 간염 모델을 설명합니다. 우리는이 모델이 생체 내 및 시험관 내 실험 기술을 사용하여 재현 가능한 분석을 시연하는 방법을 설명 할 것입니다.

병원성 메커니즘 연구를위한 BALB / c 마우스에서 약물 유도,자가 면역 간염의 유도

하시모토 갑상선염의 여러 유형의 동물 모델이 확립되었으며, NOD 마우스의 자발성 자가면역 갑상선염도 확립되었습니다. H-2h4 마우스는 HT 유도를 위한 간단하고 신뢰할 수 있는 모델입니다. 이 기사에서는 이 접근 방식을 설명하고 SAT 쥐 모델을 더 잘 이해하기 위해 병리학적 과정을 평가합니다.

마우스 자발성 자가면역 갑상선염 모델 생성

실험적 자가면역 뇌척수염은 다발성 경화증에서 가장 널리 사용되는 쥐 모델 중 하나입니다. 현재 프로토콜에서는 남녀 모두의 C57BL/6J 마우스에 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질 펩타이드를 면역하여 주로 꼬리와 팔다리의 상행 마비를 초래합니다. 여기서는 EAE 유도 및 평가 프로토콜에 대해 논의합니다.

두 성별의 다발성 경화증 모델링: MOG35-55-유도 실험적 자가면역 뇌척수염

본 연구에서는 SKG 마우스에서 CD4+ T 세포를 이식하여 류마티스 관절염(RA) 마우스 모델을 확립하는 프로토콜을 보고하며, 이를 통해 RA에 대한 면역학적 기전, 병리학적 진행 및 새로운 치료법 개발을 조사하기 위한 빠르고 신뢰할 수 있는 실험 도구를 제공합니다.

An Adoptive Transfer Model of Rheumatoid Arthritis in Mice

학습하세요 SJL 마우스에서 자가면역 뇌하수체염을 유도하는 방법을. 뇌하수체 면역원 주사와 조직병리학적 분석을 통해 질병 중증도를 평가하는 실험 동물 모델 구축 프로토콜을 확인하세요.

SJL 마우스의 실험적 면역 Hypophysitis의 유도

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