Name: 인간 혀에서 Fungiform (맛) 용의자를 수집하는 기술 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-09-18T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 39 s
Description: 학습하세요 인간 혀의 fungiform 유두를 최소 침습적으로 생검하는 기술을 통해 미각 조직을 수집하는 방법을. 이 기법은 분자 및 세포 수준의 미각 연구에 필수적인 생체 샘플을 제공하여 동물 모델의 한계를 극복합니다.

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이 작품은 NIH R21 DC03969 - 01 (JGB)을 지원했다. 우리는 기술 지원을 그림 4B 씨와 D. 베일리 부인과 S. Alarcon에 표시된 RT - PCR을 수행하기위한 하나의 미뢰 세포 박사 Tauf Huque를 캡처 박사 프리츠 Lischka 감사합니다. M. 야니나 Pepino는 의학의 NIDAT32 DA07313 워싱턴 대학 학교, 세인트 루이스, MO (Cottler, LB PI)에 의해 지원하는 사람입니다.

1. 소개 및 일반 고려 사항 일반적인 절차는 곡선 봄 마이크로를 사용하는 것을 anesthetized 지역에서 fungiform (미각) 용의자의 숫자 (6-8)의 제거 다음에 앞쪽에 혀 등의 표면의 작은 (1cm 2) 영역의 국소 마취를 포함 - 가위 (맥퍼슨 - Vannas 타입 SR # 5603, Roboz, 락빌, MD). 삭제 fungiform 용의자는 약 0.25 mm 3 각 수 있습니다. 각각의 유두와 함께 제거는 거의하지 않는 용의자 (맛) 상피 조직이 있습니다. 새로운 용의자의 3~5주 이후이 지역에 서식하고 (스필맨과 브랜드, 관찰되지 않은) 입맛 기능 회복. 미각 물질이​​ 소량의 제거 후 음식의 맛 또는 풍미에는 눈에 띄는 효과가 없습니다. 성인 인간의 혀를에서 개별 입맛 계산이 연구에서, 그것은 인간 혀 약 5,000 입맛을 포함 것으로 추산하실 수 있습니다. 우리의 절차는 제거이 입맛의 대부분에서 20-25 (평균 ~ 인간 fungiform 유두 당 3.5-4 입맛) 2, 또는 전체의 0.4 % 정도. 또한이 조직의 손실 수술과 관련된 통증은 없습니다. 바늘이 혀를 입력으로 하나, 사출 사이트에서만 약간의 통증 물론, 느낀다. 마취가 없어진 후, 그곳에서 하루도 안되었 가끔 온화한 불편은 있지만 불편함은 할 일이 경험하는 것은 실수로 사람의 혀를 "을 물고"다음보다 훨씬 적습니다. 지난 몇 년간 우리는 마취를 포함하지 않는 대체 절차를 개발했습니다. 조직 제거에 대한 기술은 모두 동일합니다. 프로 시저의 유일한 차이점은 의사가 더 이상 마취가 해결되었습니다 1cm 직경이 영역에 국한되지 않습니다 것입니다. 오히려 S / 그는 유수의 용의자가 나타납니다 혀 등의 표면에 어떤 사이트를 선택할 수 있습니다. 의식과 관련된 통증과 비교하면 제거 용의자의 총수가 제대로 수행하는 경우 또는 마취없이 두 기술에 6-8로 제한됩니다, 6-8 fungiform의 맛을의 용의자를 제거하는 불편이 적은 문제로 간주됩니다 국소 마취를 모두 절차를 받았습니다 개인의 일반적인 조사, 즉,과 마취없이 과목의 압도적 앞으로 모든 biopsies에 국소 마취를하지 않고 분배 것이라고했다. 이 기법 (AIS) 및 마취없이 biopsies을 수행 작성자 가르쳐 여러 동료를 개발 외과 의사들은 자신에 시도하고 불편이 일시적이고 물고 혀를의보다 간주됩니다 증언했습니다. 그들은 마취없이 한 유두의 제거를 시도 기꺼이면 마지막으로, biopsied 수 동의한 개인 수십 묻는 메시지가되었으며 그들이 그들이 마취를 받아야 것이 너무 힘들어하는 판단하는 경우, 모든 않고 용의자의 제거를 계속 동의 마취. 전체 생검 5-10 분 이상 안 걸릴 것입니다. 마취가 고용하는 경우 다른 2~3분이 추가됩니다. 생검은 일반적으로 아침 시간에 수행됩니다. 생검 전에, 자원 봉사자 2 시간 예정 시작 시간 전에 가벼운 식사를 지시하고 있습니다. 생검에서 작성된 정보를 동의가 얻어진다. 생검시 제외 기준 (예를 들어, 모든 위장병 질환, neurodegenerative 질병, 암, 혈액 dyscrasias, 지역 anesthetics에 알레르기 등)보다 큰 심장 박동과 함께들을 약물에 의해 통제 여부와 상관없이 심각한 만성 질환있는 사람을 포함 60 100 이하, 145보다 크거나 100보다 수축기 혈압, 피사체가 연구에 참여할 수있는 90보다 크거나 60보다, 그리고 외과 의사의 의견 diastolic 혈압. 마지막으로, 생검 절차는 우리가 자주 mRNA의 감소 품질의 언급이 같은 조직의 무결성이 빠르게 손실되어 있기 때문에 조직 검사에 대한 처리됩니다 같은 시설에서 수행되어야한다는 것을 고려하는 것이 중요합니다. 이러한 문제를 최소화하려면 혀 조직은 가능한 빨리 처리되어야합니다. 2. 제목 준비 <ol><li> 주제는 치과 의자 또는 머리 받침이있는 자리에 앉아있다. </li><li> 생검 당시의 심장 박동과 혈압을 확인합니다. 혈압, 심장 박동이나 구두 능력의 범위 밖의 주제 가을 경우, 의사는 그 / 그녀가 의사를 볼 즉각적인 약속을 그 주제로하는 것이 좋습니다. </li><li> xerostomia, 지리적 혀 또는 혀 병변의 지표에 관심을 가진 일반적인 조직의 건강을 위해 구강 검사. 혀를 병변 또는 xerostomia 포함한 구강 질환의 징후를 보여주는 모든 과목은 연구에서 제외됩니다. 구두 cavit에서 모든 파편을 제거하기 위해 물로 입을 헹굴 수있는 주제를 지시Y. 필요한 경우 혀가 마취 주사를하는 동안 혓바닥으로 진행 될 수 플라크이나 먼지를 제거하는 일회용 혀 scrapper와 세척합니다. 외과 의사는 구강에서 확장으로 혀 앞쪽에 ¼ 잡아 장갑 낀 손에 멸균 거즈 패드를 사용합니다. </li><li> 마취를 사용하는 경우, 28 게이지와 1cc 투베르쿨린 주사기 X 에피네프린 (1:100,000)와 0.25 ML lidocaine (2 %)를 포함하는 ½ '주사 바늘을 천천히 그저 혀 앞쪽에 부분의 지느러미 표면 아래에 하나의 사이트에 주입 . 마취의이 사이트는 이후의 연구와 lidocaine에 의해 간섭을 피하기 위해 수집 사이트에 말초입니다. 비교, 주입 lidocaine의 크기 (0.25 ML)는 일반적으로 치과 절차에 신경 블록 (0.8 ML 1 ML)에 주어진 금액에 대해 분기입니다. 바늘의 삽입 후 있지만 마취의 주입 전에 열망은 혈관이 명중되지 않도록 보장합니다. 그것이 큰 선박이 가까이 등의 표면에 빠진 것으로 해부학적인 몸의 구조 가능성에도 불구하고이주의은 이미 사용 중입니다. 등의 표면에 유일한 동맥은 등의 언어를 구사하는 동맥은 주로 조직의 수확이 발생 앞쪽에 셋째, 더 후부에있는 작은 혈관이있다. 혀의 복부 표면에서 실행되는 큰 언어 동맥과 정맥 언어 훨씬 마취 3 수신 등의 지역에서 삭제되었습니다. 1cm anesthetized 지역은 주변 조직에 비해 약간 옅은 것 같습니다. 이것은 작은 혈관을 압축으로 조직의 붓기 때문이다. 또한 에피네프린의 vasoconstrictive 효과에 의한 것입니다. 1 분 후, 프로브 마비에 대한 영역을 테스트하는 데 사용됩니다. 이 지역은 마비되지 않은 경우, 두 번째 주사 (0.1-0.2 ML)가 주어질 수 있습니다. </li></ol> 3. 텅 용의자를 제거 기술 <ol><li> 피사체의 혀가의 앞쪽에 분기는 (오른손으로 생검을 수행하는 경우) 멸균 거즈로 싸서 (그림 1)과 외과 의사의 왼쪽에서 개최됩니다. 거즈 중 하나 모서리는 외과 의사가 타액 무료로 혀를 닦으 수 있도록 열려 남아 있습니다. 혀는 불필요한 불편을 원인으로하지, 그래서 단단히 개최,하지만 물론해야합니다. 왼손의 검지 손가락의 끝에 직접 생검이 수행되는 사이트 아래에있는 혀 아래에 위치합니다. 상승 검지 손가락을 추진함으로써, 혀 용의자를 쉽게 생검을 위해 스틱 만들기 손가락의 끝에 끌었됩니다. </li><li> 생검에 대한 용의자를 선택하는 기준 : 맛 용의자들은 모양과 크기에 의해 주변 filliform 용의자에서 쉽게 구별할 수 있습니다. Fungiform 용의자는 주변의 원형과 다소 고립됩니다. 그들의 바로 근처에 filliform 용의자 (그림 2A, 파란색 화살표)의 찾아볼 수없는이 원형의 공간이 있습니다. 이 공간은 직경 1mm에 관한 것입니다. fungiform 용의자의 또 다른 특징은 젊은 과목의 대부분 fungiform 용의자 위에 보이는 확장된 모세 arborization입니다. arborization이 위치 fungiform의 용의자는 쉽게하지만, 그들은 유두의 입맛의 존재의 좋은 predictors 반드시 없습니다. 규칙 하나는 프런트 엔드 향해 수확 시작하고 다음 조직 컬렉션의 사이트를 왜곡로부터 모세관 출혈을 피하기 위해 멀리 혀끝에서 움직이면서. </li><li> 일단 좋은 유두는 봄, 마이크로 가위 (맥퍼슨 - Vannas, 곡선, 날카로운 커팅 에지 5mm, 빗, 팁 폭 0.2 mm 전체 길이 3 "(RS - 5603, Roboz) 그것을 클립하는 데 사용됩니다이 확인되었습니다. 효과적으로 마이크로 외과 가위를 사용하려면 하나는 절단을위한 블레이드의 팁을 사용하면 안됩니다; 아니라, 지금까지의 블레이드 내부 (그림 1, 확대 이미지와 그림 3) 가능한 한 가까이 교차 지점에 반대 블레이드와 함께. 유두의 제거는 가위 중 하나가 절단 이동 (그림 1)로 이루어진다. 대상 유두가 나타나는 오픈 블레이드 내부의 추가, 더 효과가 커팅되어 있습니다. 가위의 전반적인 위치가 평행해야한다는 케어 이동해야합니다 혀 등의 표면. </li><li> 때로는 혀가 외과 의사가 제거 유두를 파악하려고으로 건조된다. 일단 건조, 명확하게 fungiform의 유두되는 확인하기 위해 운영자의 능력보다 도전되고 매우 어려운 유두를 통해 날개의 슬라이딩 있습니다. 지나치게 마른 혀는 일반적으로 섬세한 수술 이동이 적은 제어하는​​ 혀에 금속 블레이드 스틱을합니다. 피사체가 그 / 그녀의 입을 닫고 타액은 혀의 표면과 접촉 온시키는 것은 과정을 도와줍니다. 지나치게 서부 유럽 표준시 혀도 좋지 않다. 하나가 혀를 보유하는 데 사용하는 거즈의 모서리를 사용하면이 과정에서 도움이됩니다. </li><li> 발생하는 모든 모세관 출혈은 멸균 거즈로 모래 바닥에 의해 처리됩니다. 보통 출혈하면 몇 분 이내에 중지 백인 군대가 및 추가 조직 수확을 방해하지 않습니다. 용의자는 혀가의 상피 표면 위 확장 및 fungiform 유두만을 상단 4분의 3가 (그림 2B) 제거되기 때문에 입맛을 나타내는 fungiform의 일부는 약간의 출혈이 예상된다. </li><li> 작은 더몬트 포셉을 (패턴 타입)를 사용하여 제거 용의자는 (130 MM NaCl, 5 MM KCl, 1 MM CaCl 2, 1 MM MgCl 2, 1 ㎜ 나 - Pyruvate, 20 MM HEPES - 나 차게 기본 링어 버퍼에 배치됩니다 , 산도 7.2; ~ 305 밀리의 osmols의 osmolality) 이후 조작하십시오. 포셉의 날개 사이에 유두를 꼬집어 절대로 필수적인 그것을 것입니다. 조직은 매우 불안정하고 극단주의해서 다루어 져야합니다. </li><li> 용의자를 제거 후, ​​주제 십년은 15 분 동안 의자에 남아 있습니다. 각 과목들은 anesthetized 혀에 물려하지만, 나머지에 그들의 혀를 유지 말라고합니다. 과목은 시각적으로 참가 외과 의사에 의해 모니터링해야합니다. 마취는 약 30-60분에서 깨어나기 예정입니다. 용의자를 제거 사이트에서 생검 후 약간 아플 수도 있기 때문에, 그들은 매운 곳이나 (온도) 음식, 탄산 음료 또는 중 매우 추운 곳이나 아르 음료 인식하도록 지시하고 있습니다. 추가 표시는 타액의 약간의 붉은 착색 정상이고 응고의 해산시 중단됩니다 과목에 주어집니다. </li><li> 과목은 용의자가 제거되었습니다 사이트의 평가 용의자를 제거 다음 30-40일 볼 수 있습니다. 이 시간 맛이 용의자에 의해 완전히 다시 생성해야한다. </li></ol> 5. 대표 결과 수집 조직은 현장 하이브리드화, 칼슘 이미징, 패치 클램핑 및 조직 문화에 immunohistochemistry, RT - PCR, 사용할 수 있습니다. 제대로 수행하면 용의자의 외관은 직경 0.5-1 mm (그림 2B)에 관한, 흰색을 찾고 건강을하고 있습니다. immunohistochemistry에 대한 수집 용의자는 기존 출판 프로토콜 4에 따라 처리됩니다. paraformaldehide - 고정 맛을 유두에서 전형적인 미뢰은 그림 4A에 표시됩니다. Biopsied의 용의자는 또한 효소 미뢰 세포의 분리를 달성하기위한 5 대우 수 있습니다. 효소 분리 후, 세포는 4C에서 humidified 페트리 접시에 4 시간에 유지하실 수 있습니다. 이 상태에서는 그들은 단세포 PCR (그림 4B), CA - 영상 등을 사용할 수 있습니다 세포 모양의 다양한 사람이 미뢰 세포의 기대처럼 많은 사람들이 슬림 및 바이폴라 (그림 5A 및 5B)되고 표시됩니다. 세포를 수집 또는 CA - 이미징을 수행하면, 현미경으로 약 20 분 후에 세포가 apoptotic blebs (그림 6A 및 6B, 화살표)과 그들의 많은 라운드가 개발을 시작합니다. 그림 5A 및 5B와 같이 우리가 실험실에서 개발한 기술을 사용하여, 세포는 패치 - 피펫을 사용하여 개별적으로 포착했다. 위에서 언급한 바와 같이 용의자는 5~8주 후에 regrow 시작합니다. 그림 7A는 마취를 사용하지 8 fungiform의 용의자가 왼쪽에서 자원 봉사의 혀를 제거되었습니다 혀의 모양을 보여줍니다. 용의자가 해제 냈다되었습니다 여덟 약간의 붉은 반점을 확인할 수 있습니다. 출혈은 수술 후 관찰되지 않습니다. 현재 이미지는 생검 후 10 분 정도 촬영했다. 그림 7B 40 일 생검 후 본 같은 제목의 혀가의 이미지입니다. 모든 용의자를 통지 regrown 있습니다. 재생 용의자가 작동하는지 확인하기 위해 우리는 동일한 용의자와 관련된 두 번째 생검에 동의하는 것으로 간주됩니다 우리의 자원을 물었다. 정확하게 우리가 다시 수확을 계획하고 있던 해당 용의자를 식별하기 위해, 우리는 처음부터 제거 40 일 초기 생검을 게시 후 같은 자원 봉사의 혀를 통해 그것을 겹쳐 있었다 8 용의자에 맞는 그리드를 (7C 그림) 생성 . 혀의 윤곽과 여백에서 격자의 거리로 주었 한번 확인, 우리는 똑같은 용의자를 몇 가지를 제거하고 immunohistochemistry 그들을 처리합니다. 그림 4A이 용의자 중 하나입니다. 미뢰 (노란색)과 제 2 형 맛을 전달 세포 - 관련된 효소 포스 포 라이 페이스 Cβ2 (PLCβ2)에 대한 immunopositive 얼룩의 개요를 확인할 수 있습니다. 이러한 데이터는 여기에 설명된대로 생검 절차를 사용하여 즉, fungiform의 용의자는 장소 가능성이 기능 입맛도가 40 일까지 재생 충분히 보여줍니다. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. 피사체의 혀가의 앞쪽에 분기는 멸균 거즈로 싸서와 외과 의사의 왼쪽에서 개최됩니다. 텅는 단단히 실시해야합니다. 오른쪽에 확대된 이미지는 가위와 블레이드 관련하여 유두의 위치의 적절한 위치를 보여줍니다. 201/2201fig2.jpg "고도 ="그림 2 "/&gt; 그림 2. (A) Fungiform 용의자는 파란색 화살표로 표시됩니다. 이들은 다소 그 주변과 인근에 filliform 용의자를 찾아볼 수없는이 원형 공간이있다으로부터 격리 원형 구조입니다. 그것이 제거된 마이크로 가위 초 후에 봄의 끝 (B) Fungiform의 미각 유두. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig3.jpg" alt="그림 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 3"> 그림 3. 자체 거울없이 마취를 사용하여 fungiform의 유두의 생검. 삽입된 페이지는 혀 등의 표면과 평행해야하는 가위의 전반적인 위치를 보여줍니다. 제대로하고 atraumatically 완료하면, 마취가 거의 모든 자원 봉사자에 의해 forgone 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig4a.jpg" alt="그림 4a" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 4A"> 그림 4 A. 미뢰의 Immunohistochemistry. fungiform 유두는 포스 포 라이 페이스 β2에 항체를 사용하여 Nomarski 광학에 의해 시각과 레드 형광 단백질 태그. 미뢰 및 몇 가지 표시 맛을 세포의 개요는 노란색으로 표시됩니다. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig4b.jpg" alt="그림 4b" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 4B"> 후보 신맛 수용체의 RT - PCR B., 산성 감지 이온 채널 1 (ASIC1). M = 마커. 4 레인스 1 네 가지 자원 봉사자의 ASIC1에 대한 단세포 RT - PCR되었습니다. 수집 후, fungiform 용의자는 효소 dissociated 있었다 전지는 개별적으로 데리러와 ASIC1 표현 다되었습니다. 레인스 2 4 ASIC1 정상 표현했다. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig5.jpg" alt="그림 5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 5"> 그림 5. 되는 하나의 미각 세포의 A. 이미지 패치 피펫을 사용하여 왔어요. 대형 상피 세포는 왼쪽 하단 모서리 (5A)에서 볼 수 있습니다. 두 개의 적혈구가 또한 패치 피펫 위에 유리 통 뒤에 볼 수 있습니다. 미각 세포는 약 30-50 마이크론 길이 약 6 미크론 넓습니다. 참고로, 적혈구 세포는 직경 7-8 미크론에 관한 것입니다. B. 네 개의 상피 세포로 둘러싸인 다른 맛 수용체 세포를 보여줍니다. 미각 세포는 상쾌한 보입니다. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig6.jpg" alt="그림 6" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 6"> 그림 6. apoptotic blebs를 (맛 세포, 화살표에 부착된 둥근 blebs 같은 귀신) 개발을 시작 세포의 A. 이미지. 여기에 같이 자신의 외관이 변화하면 B. 전지는 더 이상 수확되지 않습니다. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig7.jpg" alt="그림 7" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 7"> 그림 7. 어떤 마취를 사용하지 여덟 맛을 용의자를 제거 후 10 분 A.. 외과 사이트는 약간 붉은 반점으로 볼 수 있습니다. 출혈은이 발견되지 않습니다. 사십일 생검 후 같은 혀를 B.. 모든 용의자가 생성납니다. regrown로 제거 용의자를 식별하기 위해, 그리드는 오른쪽 그림에있는 사이트 만들고 왼쪽 이미지에있는 재생 용의자를 통해 이동했다. C.이 생성 용의자는 동일한 장소에 나타났습니다. 재생 용의자는 (그림 4A 참조) 기능 미각 세포를 포함 것을 보여준 immunohistochemistry 다음이 그룹에서 다시 용의자를 수확.

<ol><li>Breslin, P. A., Spector, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammalian+taste+perception%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Mammalian taste perception.</a> Curr Biol. 26 (4), R148-R155 (2008).</li>
<li>Miller, I. Anatomy of the peripheral taste system. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMiller%2C+I+%22Handbook+of+Olfaction+and+Gustation%22">Handbook of Olfaction and Gustation</a>. Doty, R. I., Dekker, M. , Marcel Dekker. New York. 521-547 (1995).</li>
<li>Figure 12.67. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Gray%27s+Anatomy%3A+The+Anatomical+Basis+of+Medicine+and+Surgery%22">Gray's Anatomy: The Anatomical Basis of Medicine and Surgery</a>. , 38th Edition, Churchill Livingstone. New York. (1995).</li>
<li>Huque, T., Cowart, B. J., Dankulich-Nagrudny, L., Pribitkin, E. A., Bayley, D. L., Spielman, A., Feldman, I., S, R., Mackler, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sour+ageusia+in+two+individuals+implicates+ion+channels+of+the+ASIC+and+PKD+families+in+human+sour+taste+perception+at+the+anterior+tongue%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Sour ageusia in two individuals implicates ion channels of the ASIC and PKD families in human sour taste perception at the anterior tongue.</a> PLoS One. 4 (10), e7347-e7347 (2009).</li>
<li>MacDonald, J. F., Mody, I., Salter, M. W., Spielman, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patch-clamping+of+taste+cells+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Cell+Biology+of+Taste+and+Olfaction%22%5BJournal%5D)">Patch-clamping of taste cells in mouse.</a> Experimental Cell Biology of Taste and Olfaction. Spielman, A. I., Brand, J. G. , CRC Press. Boca Raton, FL. 329-332 (1995).</li>
</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

인간의 세포를 사용하는 한 가지 주목할만한 장점은 자신의 특이성이다. 상세 여기에서 설명한 절차는 인간의 미각 수용체 세포의 격리를 위해 혀 조직을 제공합니다. 이러한 미각 세포가 미각 정보 전달에 중요한 분자를 발견하려는, 분자 연구에 사용하고, 자극에 맛을 세포 활동을 모니터링 칼슘 이미징 연구. 수 있습니다 또한,이 절차에 의해 제공 혀 조직은 현장 하이브리드화 이러한 immunohistochemistry 등 다양한 기법과 분석, 그리고 실시간 정량 단세포 PCR을 포함하여 중합 효소의 연쇄 반응 (PCR) 등 분자 절차에 대한 개별 세포를 캡처 수 있습니다. 이 절차는 그의 감각의 맛을 psychophysically 생검 전에 평가할 수있는 개인에 수행할 수 있기 때문에, 그것은 취향의 이상 (예를 들어, Huque 외를 참조하십시오. 2009 년)을 담당하는 분자 세부 명확한 그림을 얻을 수 있습니다. 이 생검 절차는 입맛의 세포에 풍부한 가능한 및 metabolical...

<table><tbody><tr><td>McPherson-Vannas. 곡선형, 날카로운 절단면 5mm. 빗 모양, 팁 너비 0.2 mm 전체 길이 3&quot;</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5603, Roboz</td><td></td></tr><tr><td>소형 Dumont 핀셋</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-4915, Roboz</td><td></td></tr></tbody></table>

인간 혀에서 fungiform (맛) 용의자를 수집하는 기술

Technique to Collect Fungiform (Taste) Papillae from Human Tongue

맛의 감각은 인간 생활에 중요합니다. 그것은 잠재적으로 섭취한다 음식의 품질에 대한 본문을 알리고 소화에 대한 영양의 운하를 준비 신진 대사 과정을 자극. 꾸준한 진행 맛을 전달을 (검토를 위해, 브레슬린과 스펙터 2008 1) 기본 초기 생화학 및 분자 이벤트를 이해하는 방향으로 만들어지고있다. 그러나, 현재까지 진행 주로 동물 모델에서 발생했습니다. 수용체의 특이성과 수용체 밀도에 표시된 차이가 종 가운데 다르므 그러나, 인간의 맛을 전달은 인간의 미각 조직을 사용하여 이해합니다. 여기 우리는 입맛을 포함 직경 0.5 mm에 대한 반올림 핑크 앞쪽에 구조로 보이는 인간 fungiform 용의자를 수집하는 생검 방법을 설명합니다. 이러한 biopsied 용의자는 현장 하이브리드화, immunohistochemistry에서 가능한 미뢰 세포의 분리, 그리고 분자 생물학의 기술을 통해 맛을 특정 소설 단백질의 식별을 포함하여 여러 목적으로 사용됩니다.

gustatory 전달을 기본 분자 메커니즘의 지식은 최근에 크게 인해 동물 모델을 사용하는, 상당한 발전을 즐기고있다. 그러나, 인간의 조직에있는 포유류 영장 연구 중에서 맛이 감도 및 특이성의 넓은 다양성. 우리는 인간의 혀 용의자의 생활 미각 세포를 수집하는 생검 방법을 설명합니다.

인간 혀에서 Fungiform (맛) 용의자를 수집하는 기술

미각은 인간의 삶에 매우 중요합니다. 미각은 섭취 가능성이 있는 음식의 품질에 대한 정보를 신체에 전달하며 대사를 자극합니다...

이 절차의 전반적인 목표는 설유두에서 인간 진균을 제거하는 것입니다. 먼저 멸균된 거즈 패드로 혀의 앞쪽 4분의 1 지점을 감싸고 왼손으로 단단히 잡습니다. 그 상태에서 혀 아래쪽에서 왼쪽 검지 손가락을 부드럽게 밀어 올려 혀가 손가락 위로 펴지게 함으로써, 대상이 되는 설유두 진균을 노출시킵니다.절차의 두 번째 단계는 채취 부위에서 원위부의 혀 등쪽 영역에 2% lidocaine 마취제 0.25 milliliters를 주입하는 것입니다. 마취 효과가 나타날 때까지 3분 동안 기다립니다. 절차의 세 번째 단계는 유두 제거이며, 포크에 가까운 블레이드의 가장 안쪽 세그먼트를 사용하여 절단합니다.가위 날을 벌려 대상 per pillar 위에 위치시키고 주변 조직을 아래로 눌러 대상 유두(papilla)가 날 사이에 돌출되게 한 다음, 단 한 번의 신속한 동작으로 절단합니다. 절단 시 가위 끝부분을 사용하지 않도록 주의하십시오. 절차의 마지막 단계는 가위 날과 일자 핀셋을 사용하여 절단된 per pillar를 들어 올리는 것입니다.절단된 per pillar를 적절한 완충액으로 조심스럽게 옮깁니다. 이때 per pillar가 집히지 않도록 주의하십시오. 이렇게 준비된 시료는 in situ hybridization, 면역조직화학염색, 중합효소 연쇄 반응 등에 사용할 수 있습니다.또한 이는 단일 분리 미뢰 세포를 얻을 수 있는 기질이기도 합니다. 이 절차의 주요 장점은 현재로서는 신선한 인간의 버섯유두(fungiform papillae)를 수집할 수 있는 유일한 방법이라는 점입니다.먼저 피험자를 치과용 의자나 머리 받침대가 있는 좌석에 앉힙니다. 다음으로 구강 내 전반적인 조직 건강 상태를 점검합니다. 구강 건조증이나 설부 병변의 징후가 있는지 확인하며, 설부 병변 또는 구강 건조증을 포함하여 구강 질환의 징후가 나타나는 피험자는 연구 대상에서 제외합니다.피험자에게 물로 입안을 헹구어 구강 내의 모든 이물질을 제거하도록 안내하고, 장갑을 낀 손을 사용하십시오. 멸균 거즈 패드를 사용하여 구강 밖으로 뻗어 나온 혀의 앞쪽 4분의 1 부분을 고정합니다. 마취를 시행하는 경우, 28 gauge, 1/2 inch 바늘이 장착된 1 cc 투베르쿨린 주사기와 2% lidocaine을 사용하십시오.1:100,000으로 희석한 epinephrine을 사용하여 바늘을 등쪽 표면 바로 아래에 삽입하십시오. 마취 부위는 채취 부위보다 원위쪽

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

우리는 인간의 fungiform의 맛을 용의자 전지의 장기 문화를 분리하고 관리하기위한 재현성 프로토콜을 개발하기위한. 생검에 의해 얻은 인간 fungiform 용의자의 세포가 성공적으로 생존 능력의 손실없이 더보다 여덟 구절 (12 개월) 동안 문화를 유지했다.

인간 Fungiform의 맛 용의자 전지의 분리 및 문화

이 비디오에서는 쥐 혀에서 CVP(circumvallate papillae) 상피를 분리하는 방법을 설명합니다.

마우스 모델에서 CVP(Circumvallate Papillae) 상피의 분리: 마우스 혀에서 CVP 상피를 분리하는 효소 절차

지방산과식이 요법과 지방 식품 환경 설정과 협회의 구강 chemoreception는 비만의 개발 및 이유식이 변화는 많은 사람들을위한 어려울 수 있습니다와 관련된 메커니즘의 식별을 가능하게 할 수있다.

구강 지방산 임계 값, 지방 지각, 지방 음식을 좋아하고, 인간의 용의자 밀도 측정

여기에서 우리는 디지털 사진에서 fungiform 유두 밀도를 측정하기위한 프로토콜을 제시한다. 이 방법은 밀러 &amp; 리디 (1990)에 의해 fungiform 용의자의 원래 설명 작업에 우선 순위 및 목표 특성 통계를 작성합니다.

Fungiform 용의자 객관적인 분석을위한 덴버 유두 프로토콜

이 프로토콜 인간 맛 응답을 측정 하 고 간단한 해 부 평가, 짧은 맛 테스트 및 유효성 검사 방법의 보고 된 감각과 맛 수용 체 유전자를 사용 하 여 포함.

맛 시험: 짧고 검증 테스트

이 논문은 전체 및 그대로 미각 (내면의 신경 섬유 포함)을 일관되게 산출하고 미각과 주변 유두 내의 구조 사이의 관계를 유지하는 전체 곰팡이, 둘레 및 미각 미각의 조직 준비, 염색 및 분석을위한 방법을 설명합니다.

곰팡이, 둘레 및 미각 미각의 전체 마운트 염색, 시각화 및 분석

이 기사는 미세 유체를 혀의 인포탈 이미징 창에 통합하여 생체 내 기능적인 맛 세포 이미징을 위한 μTongue(미세 유체액액)을 도입합니다.

μTongue: Vivo의 혀를 위한 미세 유체 기반 기능 이미징 플랫폼

연구 2 형 당뇨병 아일 레츠의 공급 부족이다. 여기 부분 pancreatectomy를 겪고 환자에서 아일 레츠를 분리를위한 프로토콜을 공유할 수 있습니다. 이 방법은 제 2 형 당뇨병 환자에서 아일 레츠을 얻기위한 독특한 장소를 나타내며 임상 기초 및 임상 연구에 적합한 숫자가 아닌 당뇨병 과목과 일치.

부분 Pancreatectomized 환자에서 인간 아일 레츠의 분리

신문은 인간의 시체 같은 기증자의 안구 세계에서 망막 조직을 내장을 들어낸하는 간단한 소비세 각막에 대한 기술과 설명합니다. 기술은 안구 세계의 다른 조직을 손상시키지 않고 이식, 수술이나 연구 목적을 위해 사용되는 소비세 양질의 조직에 도움이됩니다 여기서 설명했다.

위한 간편한 기법<em&gt; 현장에서</em인간 안구 글로브에서 각막 및 망막 조직의 내장 적출의&gt; 절단

이 비디오의 목적은 인간 피험자에 대한 수정된 Bergström 골격근 생검 기술을 제시  하는 것입니다.

수정 된 버그 스트롬 기술을 이용하여 인간의 골격 근육 생검 절차

학습하세요 인간 혀의 fungiform 유두를 최소 침습적으로 생검하는 기술을 통해 미각 조직을 수집하는 방법을. 이 기법은 분자 및 세포 수준의 미각 연구에 필수적인 생체 샘플을 제공하여 동물 모델의 한계를 극복합니다.

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