Name: 샙터 셀 카운터를 사용하여 세포 배양 동안 휴대폰 번호를 결정 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-11-26T18:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 33 s
Description: 배우세요 Scepter Cell Counter를 사용한 세포 계수법으로 정확한 세포 농도 측정 및 건강 상태 분석 방법을 익히세요. 이 기술은 세포 배양 실험의 재현성과 정확성을 높여줍니다.

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1. 셀 카운팅의 중요성 <ol><li> 카운팅 세포는 체외 세포 문화에 대한 필요하지만 지루한 단계입니다. </li><li> 일관된 세포 농도는 실험 재현성과 정확성을 보장합니다. </li><li> 셀 카운트는 후속 실험, transfection 또는 감염 세포를 심는 불멸화 또는 변환을 평가, 세포 건강과 확산 속도를 모니터링하고, 셀 기반의 assays를위한 준비 중요합니다. </li><li> 에도 불구하고 셀 카운팅의 속도 및 정확도의 필요성, hemocytometer를 사용하여 카운트 세포를 조사 400 연구자의 71 %. hemocytometry 저렴한지만, 그것은 힘드는과 부정 확한 계산 결과를 사용자의 바이어스 및 남용에 적용됩니다. </li><li> hemocytometry에서 오류 소스는 다음과 같습니다 : 예제에서 고르지 세포 배포 예제에서 너무 많은 혹은 너무 적은 세포, 특정 세포가 정의된 계산 영역에 속하는 것인 지에 대한 주관적인 의사 결정, hemocytometer의 오염, 사용자에게 사용자의 변화를 hemocytometer 충전 속도, 그리고 변화. </li><li> 수동 계산과 관련된 지겨움을 완화하기 위해, 연구자의 29 %가 자동으로 세포 계수 장치를 사용하여 셀을 계산합니다. 그러나 대부분의 연구원이 큰 벤치 - 최고의 악기와 관련된 가격은 그들이 사용하는 장벽이다. </li><li> 샙터 전지 카운터는 상대적으로 낮은 비용으로 자동화 및 쿨터 계산의 정확도를 제공하는 자동화된 휴대용 장치입니다. </li><li> 이 시스템은 감지, 신호 처리, 데이터 스토리지 및 그래픽 디스플레이를위한 아날로그 및 디지털 하드웨어의 조합을 사용하여 소형 형식으로 임피던스 기반의 입자 검출의 쿨터 원칙을 고용합니다. </li><li> 일회용 센서 셀 크기와 서브 마이크론과 하위 picoliter 해상도에서 셀 볼륨에 의해 차별을 가능하게 microfabricated, 셀 감지 영역에 설계되었습니다. </li><li> 정밀 액체 처리 채널과 전자와 향상된, 샙터 전지 카운터 그래픽 히스토그램으로 세포 인구 통계를 표시합니다. </li></ol> 2. 카운팅을위한 단일 셀 서스펜션의 준비 <ol><li> 샙터 셀 카운터를 사용하려면, 세포의 단일 세포 현탁액을 diluting로 시작, 인산의 생리 버퍼. ML 당 10,000-500,000 세포의 농도가 최적입니다. </li><li> 1.5 ML의 microfuge 관에 희석 세포 100 μL을 전송합니다. </li></ol> 3. 샙터를 사용하여 셀 카운트 공연 <ol><li> 악기의 뒷면에있는 토글 키를 누른 후 누른 샙터 셀 카운터 켜고 나타나는 화면의 지시에 나올 때까지 기다리는 것이 좋습니다. </li><li> 메시지가 나타나면 악기의 앞쪽으로 향하게 전극 감지 패널로 샙터 단위의 끝에 센서를 부착합니다. </li><li> 샙터 센서 전자 감지 영역 및 통합 셀 감지 전극과 정밀 성형 샘플링 챔버로 구성되어 있습니다. 센서는 가능한 서브 마이크론 해상도 셀 크기를 구별하고, 하위 picoliter 해상도 휴대폰 볼륨을합니다. </li><li> 일관된 센서 공학, 동일한 샘플 볼륨이 계산되며 정확한 크기 측정이 만들어진 것을 보장합니다. </li><li> 일단 센서는 다음과 같이 화면의 지시에 따라 계산 프로세스의 각 단계는 수행 첨부 : </li><li> 화면이 읽을 때 "시작 플런저를 잡아,"플런저를 우울. 화면은 다음 "잠수함 센서를."읽습니다 세포 현탁액 솔루션으로 센서 및 센서에 세포 현탁액을 대기음하는 플런저를 풀어 잠수함. </li><li> 플런저는 전기 신호로 작동하며 센서에 샘플 플러스 죽은 볼륨을 이끌어낼 수 있습니다. 그것이 pipetting과 마찬가지로 폭락의 속도 또는 정확도가 중요하지 않습니다. 이 과정은 몇 초 정도 걸립니다. 준비가되면 악기가 삐 것이며, "로드 샘플"이 화면에 표시됩니다. </li><li> 일단 샘플이가 microchannels를 통해 다음, 세포 크기와 세포 볼륨을 평가하기 위해 감지 영역을 통해 그림이 그려진 센서에로드됩니다. 샘플 50 μL가 계산되면 센서가 카운팅 막을 수있는 계기를 알려줍니다. </li><li> 계산이 완료되면, 악기의 화면은 "완료 세어보세요. 센서를 제거하고 삭제하십시오."읽습니다 프롬프트를 따라하고, 센서를 제거하고 폐기. </li><li> 악기는 다음의 화면에서 셀 크기 또는 직경의 히스토그램뿐만 아니라 ML 당 세포 농도를 표시합니다. </li></ol> 4. 데이터 분석 <ol><li> 계산이 완료되고 히스토그램이 악기에 표시되면, 토글 버튼을 눌러서 게이트를 적용합니다. "자동 게이팅"또는 자동으로 히스토그램 프로파일을 기반으로 게이트를 집합으로 "마지막 사용"또는 이전 계산의 성문을 사용을 선택합니다. </li><li> 에 관계없이 선택의 문을 수동으로 미세 조정 데이터를 이동할 수 있습니다. 왼쪽 문을 선택하고 스크롤 다시 전환 버튼을 눌러원하는대로 게이트를 이동 ggle. </li><li> 그런 다음 오른쪽 게이트를 활성화하고 올바른 게이트를 배치 전환을 스크롤 다시 전환을 누르십시오. 다시 클릭하여, 새로운 세포 농도, 평균 세포 부피와 직경이 표시됩니다. </li><li> 토글도 날짜 사이의 디스플레이를 전환 양쪽으로 이동할 수, 시간, 셀 크기를 의미하고, 세포 볼륨을 의미합니다. </li><li> 최대 72 histograms에는 악기 자체에 저장할 수 있습니다. 개인 컴퓨터에 데이터를 업로드하려면 디스플레이 화면의 USB 케이블 포트를 통해 악기를 연결합니다. </li><li> PC에 두 번 "연결"을 누른 다음 소프트웨어를 실행하려면 샙터 소프트웨어 응용 프로그램을 클릭합니다. 모든 계산이 자동으로 소프트웨어에 포트를합니다. </li><li> 샙터 어플 리케이션 소프트웨어는 볼륨이나 직경 중 하나의 문화의 인구 분포를 상세하게 히스토그램을 표시합니다. 다운로드한 파일은 원시 데이터가 지정된 셀 또는 셀 지름 볼륨의 용기에 표시됩니다 Microsoft Excel을로 내보낼 수 있습니다. </li></ol> 5. 대표 결과 <ol><li> 나인틴 다른 세포 라인 카운트 위해 준비되었고 이론적 시작 농도는 쿨터 카운터를 사용하여 결정됩니다. 이러한 세포 suspensions 그러면 더욱 이론적 세포 농도에서 세포 suspensions를 얻을 희석되었다. </li><li> 샙터 세포 카운터는 다음 세포 농도를 결정하는 데 사용되었다. 그림 1은 이론적으로 세포 농도와 함께 오 대표 세포 라인에 대한 측정되었다 5 dilutions를 보여줍니다. </li><li> 로 R2의 값을로 표시 선형의 높은 정도, 그 샙터 카운트가 넓은 선형 작동 범위에 걸쳐, 테스트 세포 라인에 대한 안정적인 방법입니다 보여줍니다. </li><li> 샙터 계수의 전반적인 상대 정확도는 샙터 계산에서 얻은 데이터가 쿨터 계산에서 얻은 계산과 비교하는 그림 2에서 증명됩니다. </li><li> 샙터 셀 카운트의 로그 쿨터 카운트의 로그 역모를 꾸몄다하고, 테스트를 모든 세포 라인에 걸쳐, 샙터 카운트가 쿨터 카운트와 일치하는, 표시합니다. </li><li> 19 셀 라인 카운트는 Z2 쿨터 카운터, 샙터 셀 카운터와 같은 바이올렛 - 셀 또는 셀 시스템과 같은 자동화된 비전 기반의 카운터, 그리고 hemocytemeter를 사용하여 수행되었습니다. </li><li> 카운트는 정지와 동일한 dilutions를 시작하는 동일한 세포를 사용하여 제조 업체의 지시에 따라 수행되었다. 그림 3에 표시된 결과는 긴밀하게 높은 선형성과 함께 이론적으로 세포 농도와 일치 샙터는 계산에 의해 측정되는 세포 농도를 보여줍니다. </li><li> 퍼센트 편차 계수, 또는 CV는 각각 집계 시스템에 대한 각 세포주의 각 희석 계산되었다. 그림 4는 세포 농도 및 계산 방법에 관한 19 셀 라인을 통해 평균 %의 CVS를 보여줍니다. </li><li> 작동 범위 내에서 샙터 전지 카운터 작은 표준 편차와 변동 작은 평균 계수를 표시 비전을 기반으로 hemocytometer의 계산보다 더 정확합니다. </li><li> 샙터 계산 열 배 hemocytometry보다 너무 다른 자동 카운터보다 빠릅니다. 그림 5, SF9, MCF7, 그리고 HEK293 세포의이 동영상에서 설명한 방법을 사용하여 계산되었다. </li><li> 세포 농도를 측정하는 데 필요한 평균 시간이 기록되었다. hemocytometry은 샘플 당 한 번만 수행이라고합니다. </li><li> 샙터는 셀 크기에 따라 측정합니다. 따라서 세포 형태의 변화는 히스토그램에서 캡처 수 있습니다. 건강하지 못한 세포는 lyse, 그리고 왼쪽에있는 히스토그램의 변화 (그림 6, 왼쪽 패널)을 일으킬 동안 건강한 문화는 좋은 종 모양의 가우스 분포를 표시합니다. </li><li> 마찬가지로 50 %의 죽은 세포 인구가 50% 라이브 세포와 혼합되었을 때, 히스토그램 교대도 (그림 6, 오른쪽 패널) 관찰되었다. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig1.jpg" alt="그림 1"><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig2.jpg" alt="그림 2"><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig3.jpg" alt="그림 3"><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig4.jpg" alt="그림 4"><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig5.jpg" alt="그림 5"><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig6.jpg" alt="그림 6"><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig7.jpg" alt="그림 7">

<ol><li>Barghshoon, S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBarghshoon%2C+S+%22Cell+Counting+Survey%22">Cell Counting Survey</a>. , Millipore. (2009).</li>
<li>Tucker, K. G., Chalder, S., al-Rubeai, M., Thomas, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+hybridoma+cell+number%2C+viability%2C+and+morphology+using+fully+automated+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Enzyme+Microb+Technol%22%5BJournal%5D)">Measurement of hybridoma cell number, viability, and morphology using fully automated image analysis.</a> Enzyme Microb Technol. 16 (1), 29-35 (1994).</li>
<li>Houwen, B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHouwen%2C+B+%22Fifty+years+of+hematology+innovation%3A+the+Coulter+principle%22">Fifty years of hematology innovation: the Coulter principle</a>. , Medical Laboratory Observer. (2003).</li>
</ol>

캐슬린 Ongena, Chandreyee 다스, 재닛 L. 스미스, 소니아 길, 그리고 그레이스 존스톤이 문서에서 사용되는 악기를 생산 Millipore에 의해 고용됩니다.

다른 계산 방법의 결과에 샙터 셀 카운터의 성능을 비교, 우리는이 새로운 휴대용, 자동 셀 카운터가 다양한 작동 범위에서 정확, 신속하고, 안정적인 셀 카운트를 제공 결론. 샙터 계수의 기능은 센서 팁 및 쿨터 원칙에 따라 정교한 계산 장비에 내장된 정밀 설계 기술의 결과입니다. 성능 품질은 속도를 증가시키고 세포 기반 assays의 재현성을 향상시키는 방법으로 계산 샙터을 제안합니다. 핸드헬드 형식은 세포 배양 후드에서 빠른 지겨움 무료로 집계 권리를 허용합니다.

<table border="1"><tbody><tr><td> 재료 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 논평 </td></tr><tr><td> 40 μm의의 샙터 센서와 샙터 2.0 휴대용 자동 전지 카운터 </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCC20040 </td><td></td></tr><tr><td> 60 μm의 샙터 센서와 샙터 2.0 휴대용 자동 전지 카운터 </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCC20060 </td><td></td></tr><tr><td> 샙터 센서, 60 μm의 </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCC60050 </td><td> 센서 50 팩 </td></tr><tr><td> 샙터 센서, 40 μm의 </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCC40050 </td><td> 센서 50 팩 </td></tr><tr><td> 범용 전원 어댑터 </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCCPOWER </td><td> </td></tr><tr><td> 샙터 O - 링 키트 </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCCOCLIP </td><td> 이 O - 링과 하나의 필터 커버 </td></tr></tbody></table>

샙터 셀 카운터를 사용하여 세포 배양 동안 휴대폰 번호를 결정

Determining Cell Number During Cell Culture using the Scepter Cell Counter

세포를 계산하는 것은 자주 체외 세포 문화에 대한 필요하지만 지루한 단계입니다. 일관된 세포 농도는 실험 재현성과 정확성을 보장합니다. 셀 카운트는 후속 실험, transfection 또는 감염 세포를 심는 불멸화 또는 변환을 평가, 세포 건강과 확산 속도를 모니터링하고, 셀 기반의 assays를위한 준비 중요합니다. 셀 카운트 특히 세포 반응의 양적 측정, 정확한 일관성 및 빠른 것이 중요합니다. 셀 카운팅의 속도와 정확성이 필요에도 불구하고, 400 연구자의 ​​71 %는 hemocytometer를 사용하여 세포를 카운트 1 조사. hemocytometry 저렴한지만, 그것은 힘드는과 부정 확한 계산 결과를 사용자의 바이어스 및 남용에 적용됩니다. Hemocytometers는 셀 suspensions가 지정된 볼륨에로드하고 현미경으로 집계하고있는 특수 광학 유리로 만들어진 있습니다. hemocytometry에서 오류의 소스는 다음과 같습니다 : 예제에서 고르지 세포 배포 예제에서 너무 많은 혹은 너무 적은 세포, 특정 세포가 정의된 계산 영역에 속하는 것인 지에 대한 주관적인 의사 결정, hemocytometer의 오염, 사용자에게 사용자의 변화를 그리고 hemocytometer의 변형 속도 2 작성. 수동 계산과 관련된 지겨움을 완화하기 위해, 연구자의 ​​29 %가 장치를 계산 자동 세포를 사용하여 세포를 포함, 이들은 비전 기반 카운터, 쿨터 원리를 사용하여 세포를 감지 시스템, 또는 유동세포계측법 1 포함됩니다. 대부분의 연구자 들어, 자동화된 시스템을 사용하는 주요 장벽이 큰 benchtop 악기 하나와 관련된 가격입니다. 샙터 전지 카운터는 상대적으로 낮은 비용으로 자동화 및 쿨터 계산의 정확도를 제공하는 자동화된 휴대용 장치입니다. 시스템은 쿨터 감지를위한 아날로그 및 디지털 하드웨어의 조합을 사용하여 소형 형식으로 임피던스 기반의 입자 검출 3 원칙, 신호 처리, 데이터 스토리지 및 그래픽 디스플레이를 고용합니다. 일회용 팁은 세포의 크기와 서브 마이크론과 하위 picoliter 해상도에서 셀 볼륨에 의해 차별을 가능하게 microfabricated, 셀 감지 영역에 설계되었습니다. 정밀 액체 처리 채널과 전자와 향상된, 샙터 전지 카운터 그래픽 히스토그램으로 표시 셀 인구 통계를보고합니다.

샙터 셀 카운터, 세포를 카운트 세포 직경과 볼륨을 모니터링 한 문화에서 다음 세포 인구의 건강과 품질을 검사하는 데 사용하는 데 사용할 수있는 휴대용 자동 장치입니다.

세포 계수는 인비트로(in vitro) 세포 배양에서 필수적이지만 번거로운 단계인 경우가 많습니다. 일관된 세포 농도는 실험의 재현성을 보장하며...

scepter 세포 계수기는 세포의 직경과 부피를 모니터링하고 세포 집단의 건강 및 품질을 확인하기 위해 세포 수를 측정하는 휴대용 자동 장치입니다. 이 장치는 향상된 정확도, 사용 편의성, 그리고 낮은 세포 계수 비용 등 다른 계수 방법에 비해 상당한 장점을 제공합니다. scepter를 사용하여 그래픽 디스플레이의 안내에 따라 일회용 센서로 세포를 흡입하십시오.그 후 세포 수를 측정하며, 장치는 컴퓨터로 업로드하여 분석할 수 있는 세포 농도와 통계 수치를 보고합니다. 안녕하세요, 저는 Millport의 연구원 Sonya입니다. 오늘은 scepter의 사용 방법을 보여드리겠습니다.세포 계수기 세포 계수는 인비트로(in vitro) 세포 배양에 있어 필수적이지만 번거로운 단계입니다. 일관된 세포 농도는 실험의 재현성과 정확성을 보장합니다. 속도와 정확성이 요구되는 상황임에도 불구하고, 세포 계수는 세포의 상태와 증식률 모니터링, 불멸화 또는 형질전환 세포의 평가, 후속 실험을 위한 세포 접종, 형질전환 또는 감염, 그리고 세포 기반 분석 준비를 위해 매우 중요합니다.세포 계수와 관련하여, 설문 조사에 참여한 400명의 연구자 중 71%가 헤모사이토미터를 사용하여 세포를 계수합니다. 헤모사이토미터법은 비용이 저렴하지만, 노동 집약적이며 사용자의 편향이나 오용으로 인해 부정확한 계수 결과가 나올 수 있습니다. 헤모사이토미터법의 오차 원인으로는 시료 내 세포의 불균일한 분포, 시료 내 세포 수가 너무 많거나 적은 경우 등이 있습니다.특정 세포가 정의된 계수 영역 내에 포함되는지 여부에 대한 주관적인 결정. 수동 계수와 관련된 지루함을 덜기 위한 혈구계의 오염, 사용자 간의 편차 및 혈구계 충전 속도의 변동. 연구자의 29%가 자동 세포 계수 장치를 사용하여 세포를 계수합니다.하지만 대부분의 연구자들에게 이러한 대형 벤치탑 기기의 가격은 사용에 큰 진입 장벽이 됩니다. scepter cell counter는 상대적으로 저렴한 비용으로 Coulter counting의 자동화와 정확도를 제공하는, 사용하기 편리한 핸드헬드 형태의 자동화 장치입니다. 이 시스템은 센싱 신호 처리, 데이터 저장 및 그래픽 표시를 위해 아날로그와 디지털 하드웨어를 결합하여, 임피던스 기반 입자 검출이라는 Coulter 원리를 소형화된 형태로 구현하였습니다.일회용 센서는 정밀 액체 핸들링 채널과 전자 장치가 보완되어 서브마이크론 및 서브피코리터 해상도로 세포 크기와 세포 부피에 따른 구분이 가능한 미세 가공 세포 감지 구역으로 설계되었습니다. scepter 세포 계수기는 세포 집단 통계를 히스토그램 형태로 시각화하여 표시합니다. scepter 세포 계수기를 사용하려면 먼저 인산염 완충 식염수(PBS)로 단일 세포 현탁액을 희석하는 것부터 시작하십시오.밀리리터당 10,000에서 500,000 cells의 농도가 최적입니다. 희석된 세포 100 µL를 1.5 mL 마이크로뷰 튜브에 옮깁니다. 기기 뒷면의 토글 스위치를 길게 눌러 scepter 세포 계수기를 켜고 화면에 지침이 나타날 때까지 기다립니다.안내 메시지가 표시되면, 전극 감지 패널이 기기 정면을 향하도록 하여 scepter 유닛 끝에 센서를 부착하십시오. Scepter 센서는 전자 감지 구역과 통합 세포 감지 전극이 포함된 정밀 성형 샘플링 챔버로 구성됩니다. 이 센서를 통해 서브마이크론 분해능으로 세포 크기를, 서브 피코리터 분해능으로 세포 부피를 구별할 수 있습니다.일관된 센서 엔지니어링을 통해 동일한 시료 부피가 계수되고 정확한 크기 측정이 이루어지도록 합니다. 센서를 부착한 후, 화면의 안내에 따라 계수 과정의 각 단계를 다음과 같이 수행하십시오. 화면에 'hold down the plunger to begin'이라는 문구가 나타나면 플런저를 누르고, 이어서 'submerge the sensor'라는 문구가 나타나면 센서를 세포 현탁액 속에 담근 뒤, 플런저를 놓아 세포 현탁액을 센서 내부로 흡입하십시오.플런저는 전기 신호 역할을 하며, 샘플과 데드 볼륨을 센서 안으로 끌어들입니다. 피펫팅과 달리 플런저를 누르는 속도나 정확도는 중요하지 않습니다. 준비가 되면 이 과정은 수 초 동안 진행됩니다.기기에서 비프음이 울리며 화면에 샘플 로드 완료(sample loaded) 메시지가 표시됩니다. 샘플이 센서로 로드되면, 세포 크기와 세포 부피를 측정하기 위해 감지 영역을 통과하며 흡입됩니다. 그 후 마이크로채널을 통해 50 µL의 샘플이 계수되면, 센서가 기기에 계수 중단을 지시합니다.계수가 완료되면 기기 화면에 'count complete'라고 표시됩니다. 센서를 제거하여 폐기하십시오. 안내 메시지에 따라 센서를 제거하고 폐기하십시오.그러면 기기 화면에 세포 크기 또는 직경의 히스토그램과 밀리리터당 세포 농도가 표시됩니다. 계수가 완료되고 기기에 히스토그램이 표시되면, 토글 버튼을 눌러 게이트를 적용하고, 히스토그램 프로필을 기반으로 게이트를 자동 설정하려면 'auto gating'을 선택하거나 이전 계수의 게이트를 사용하려면 'use last'를 선택하십시오. 어떤 선택을 하든, 게이트를 수동으로 이동하여 정밀하게 조정할 수 있습니다.데이터를 조정하고, 토글 버튼을 다시 눌러 왼쪽 게이트를 선택한 후 토글을 스크롤하여 게이트를 원하는 위치로 이동시키십시오. 그런 다음 토글을 다시 눌러 오른쪽 게이트를 활성화하고 토글을 스크롤하여 오른쪽 게이트를 배치하십시오. 다시 클릭하십시오.새로운 세포 농도, 평균 세포 부피 및 직경이 표시됩니다. 토글 스위치를 사용하여 표시 내용을 날짜 및 시간, 평균 세포 크기, 평균 세포 부피로 전환할 수 있으며, 기기 자체에 최대 72개의 히스토그램을 저장할 수 있습니다. 데이터를 개인용 컴퓨터로 업로드하려면 USB 케이블 포트를 통해 기기를 연결한 후 PC의 디스플레이 화면에서 확인하십시오.Scepter 소프트웨어 애플리케이션을 더블 클릭하여 소프트웨어를 실행합니다. 그런 다음 connect를 클릭합니다. 모든 카운트 데이터가 소프트웨어로 자동 전송됩니다.scepter 애플리케이션 소프트웨어는 배양액의 개체군 분포를 부피 또는 직경으로 상세히 나타내는 히스토그램을 표시합니다. 다운로드한 파일은 Microsoft Excel로 내보낼 수 있으며, 여기서 원시 데이터는 지정된 세포 직경 또는 세포 부피 빈(bin)으로 표시됩니다. 19종의 서로 다른 세포주가 계수를 위해 준비되었으며, 세포 계수기를 사용하여 이론적 초기 농도를 결정하였습니다.이후 이 세포 현탁액들을 추가로 희석하여 이론적인 세포 농도의 세포 현탁액을 얻었습니다. 그런 다음 scepter 세포 계수기를 사용하여 세포 농도를 측정하였습니다. 이 그림은 5개의 대표 세포주에 대해 측정된 5가지 희석 단계와 이론적 세포 농도를 보여줍니다.r-제곱 값으로 나타난 높은 선형성은 scepter 계수가 광범위한 선형 작동 범위에서 테스트된 세포주에 대해 신뢰할 수 있는 방법임을 입증합니다. scepter 계수의 전반적인 상대 정확도는 scepter 계수로 얻은 데이터와 coter 계수로 얻은 수치를 비교하여 여기서 입증됩니다. scepter 세포 수의 로그 값을 coter 수치의 로그 값에 대해 도식화하면, 테스트된 모든 세포주에서 scepter 계수가 coter 계수와 일치함을 보여줍니다.Z two coulter counter를 사용하여 19개 세포주의 계수를 수행하였습니다. scepter 세포 계수기, V cell 또는 count test system과 같은 자동 비전 기반 계수기 및 hemo TER 계수는 동일한 세포 초기 현탁액과 동일한 희석 배수를 사용하여 제조사의 지침에 따라 수행되었습니다. 본 그림에 표시된 결과는 scepter 계수법으로 측정된 세포 농도가 높은 선형성을 보이며 이론적 세포 농도와 밀접하게 일치함을 보여줍니다.각 세포주의 각 희석 배수에 대해 변동 계수(CV, coefficient of variation) 백분율을 계산하였습니다. 여기에 제시된 각 계수 시스템은 작동 범위 내의 세포 농도 및 계수 방법에 따른 19개 세포주의 평균 CV 백분율을 나타냅니다. Scepter 세포 계수기는 헤모사이토미터(hemo cytometer) 계수보다 더 정밀하며, 더 작은 표준 편차와 더 작은 평균 변동 계수를 보여줍니다.Scepter 계수법은 혈구 계수법보다 10배 더 빠르며, 다른 자동 계수기보다도 빠릅니다. 여기서는 이 비디오에 설명된 방법을 사용하여 SF9, MCF7 및 HC293 세포를 계수하였습니다. 세포 농도를 측정하는 데 소요되는 평균 시간을 기록하였습니다.혈구 계수는 샘플당 한 번만 수행되었음에 유의하십시오. Scepter는 세포 크기를 기반으로 측정합니다. 따라서 세포 형태의 모든 변화는 히스토그램에 포착될 수 있습니다.건강한 배양물은 전형적인 종 모양의 가우시안 분포를 보이는 반면, 건강하지 않은 세포는 사멸하여 히스토그램이 왼쪽으로 이동하게 됩니다. 마찬가지로, 50%의 사멸 세포와 50%의 살아있는 세포 집단을 혼합했을 때도 히스토그램의 이동이 관찰되었습니다. 지금까지 연구자들의 세포 계수 방식을 혁신적으로 변화시키고 있는 Millipore의 새로운 Scepter 세포 계수기 사용법을 보여드렸습니다.

determining-cell-number-during-cell-culture-using-scepter-cell

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

가능한 세포의 정확한 수를 지식은 많은 조직 문화 조작이 필요합니다. 이 프로토콜은 살고 죽은 세포 사이의 차별과 hemacytometer를 사용하여 세포를 계량하는 방법에 대해 설명합니다. 그것이 인간의 신경 줄기 / 전구체 세포 (hNSPCs)를 계산 설명하지만, 그것은 다른 세포 유형에 사용할 수 있습니다.

인간 신경 줄기 세포를 계산

문화 세포의 수를 결정하는 것은 문화 조건을 표준화하고 정확한 quantitation 실험을 수행 중요합니다. 이 비디오에서는, 우리는 세포가 hemacytometer를 사용하여 계산하는 방법을 보여줍니다.

카운팅 및 교양 세포의 생존을 결정

Moxi Z 초소형 자동 세포 계수기는 특허 박막 센서 기술과 사이징을 수행하는 독점적인 소프트웨어 알고리즘과 입자의 넓은 크기의 범위를 계산뿐만 아니라 monodisperse의 전반적인 건강을 결정하는 보습 바로 앞에 달린 풀베는 날 원리를 결합한 소설 악기 포유 동물 세포 배양. 이 프로토콜은 세포 배양의 건강을 계산하고 평가하는이 악기의 사용을 설명합니다.

Moxi Z 미니 자동 셀 카운터를 사용하여 포유류 세포 계산, 세포 크기와 세포 건강의 결정

이 프로토콜은 유방암 세포주에서 세포 증식을 분석하기 위한 세 가지 다른 방법의 사용을 설명합니다. 여기에는 기존 세포 계수, 발광 기반 세포 생존율 및 세포 이미저 사용을 통한 세포 계수의 사용이 포함됩니다. 각각은 세포 증식의 재현 가능한 측정에 이점을 제공합니다.

유방암 세포주에서 세포 증식을 결정하기위한 세 가지 방법 비교

이 논문은 두 개의 새로운 오픈 소스 ImageJ 플러그인인 Cell Concentration Calculator 및 Migration Assay Counter를 통해 혈구계 및 이동/침입 현미경 사진의 정량화에 대해 설명합니다.  또한 이미지 획득 및 보정 프로토콜에 대해 설명하고 플러그인의 입력 요구 사항에 대해 자세히 설명합니다.

ImageJ에 플러그인을 사용하여 셀 카운팅 절차의 자동화 된 정량 및 분석

배양 된 세포에 화합물 세트의 잠재적 인 세포 독성을 평가하는 것이 종종 필요합니다. 여기서, 우리는 96 웰 형식으로 독성 화합물을 안정적으로 선별하는 전략을 설명합니다.

낮은 중간 처리량에서 배양 포유류 세포에서 세포 성장 및 생존에 영향을 미치는 화합물을 식별하는 전략

유방 상피 세포와 내피 세포 사이 교차 토크는 중요한 유방암 진행에 기여, 종양 성장, 및 전이. 이 연구에서는, 스페로이드는 혈관 및/또는 림프 성 내피 세포와 함께 유방암 세포에서 만들어졌으며 유방암 연구를위한 체외 시스템으로서 자신의 적용성을 입증했습니다.

유방암 연구를 위한 잠재적인 기능적인 시험관 내 모형으로 유방 상피 및 내피 세포 스페로이드

이 프로토콜은 광독립영양 설탕 분비 시아노박테리아 및 종속영양 효모를 포함한 공동 배양의 설정 및 정량적 모니터링을 위한 포괄적인 지침을 제공합니다.

Assembly and Quantification of Co-Cultures Combining Heterotrophic Yeast with Phototrophic Sugar-Secreting Cyanobacteria(종속영양 효모와 광영양성 설탕 분비 시아노박테리아를 결합한 공동 배양의 조립 및 정량화)

이 글은 브릴루앵 미세 분광법을 이용한 3D 매트릭스 내 살아있는 구형체의 기계적 특성 규격 프로토콜을 설명합니다. 이 전광학 방법은 미시적 해상도와 정량적 기계적 특성을 가진 구형 시각화를 가능하게 합니다. 이 접근법은 기계적 표현형 분석에 영향을 미칩니다; 예를 들어, 3D 미세환경 내에서 종양 구상체의 병리학적 상태를 결정하는 일이 있습니다.

브릴루앵 분광법을 이용한 구체의 기계적 매핑

암 전이를 연구하기 위해 이세포성 누화를 캡처하는 3D 암 모델이 매우 필요합니다. 우리의 연구는 침입 및 세포 공간 분포를 연구하는 데 사용할 수 있는 골격 및 골격이 없는 환경에서 이종 다세포 기질-상피의 생성을 제시합니다.

상피암 세포의 스캐폴드가 없는 3D 배양에서 이종다세포 기질 세포(Heteromulticellular Stromal Cells in Scaffold-free 3D Cultures of Epithelial Cancer Cells to Drive Invasion)

배우세요 Scepter Cell Counter를 사용한 세포 계수법으로 정확한 세포 농도 측정 및 건강 상태 분석 방법을 익히세요. 이 기술은 세포 배양 실험의 재현성과 정확성을 높여줍니다.

샙터 셀 카운터를 사용하여 세포 배양 동안 휴대폰 번호를 결정

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