Name: 모스키토 리어링 (A. gambiae)에 대한 프로토콜 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-04T01:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 3 s
Description: 배우세요 Anopheles gambiae 모기 사육 방법을 실험실 환경에서. 온도와 습도를 조절하여 모든 생활사 단계를 성공적으로 관리하고 말라리아 연구에 필요한 건강한 모기를 얻습니다.

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모기 음식 : <ol><li> 음식 : 접지된 물고기 음식 (Aquaricare). 작은 핀치가 추가되어야합니다. </li><li> 식품 B : CAT 식품 (Purina)을 접지. 작은 핀치가 추가되어야합니다. </li><li> 식품 C : 고양이 음식 (Purina). 두 정제가 추가되어야합니다. </li></ol> 블러드 : 동물이나 인간의 혈액은 뒷면 모기하는 데 사용할 수 있습니다. 신선한 피가 주사기로 수집하여 혈액의 각 10 ML에 대한 CPD (항응고제)의 1ml를 포함하는 멸균 15 ML 팔콘 튜브에 넣어 부드럽게 섞어 5 분 2000 rpm으로 실온에서 centrifuged입니다. 뜨는 다른 혈액 세포 (예 : WBC)을 구성되어 버피 코트를 제거를 돌보는 삭제됩니다. RBC 펠렛은 다음 pipetting하여 RPMI 매체의 동일한 볼륨에 정지하고, 추가로이 중간에 세 번 씻어입니다. 최종 세척 후 pelleted RBCs가 RPMI 매체의 동일한 볼륨에 resuspended 아르 4에 저장된 ° C (80~10일 보존 수 있습니다.) 먹이를하기 전에, RBC는 (RPMI)를 셀 아래로 펠렛을 (5 분 2000 RPM) centrifuged이며, 포장 RBC는 40 % 혈소판을 얻기 위해 혈청 (O + 인간 혈청)에 resuspended 있습니다. 피를 ° C 항상 먹이를 위해 37 보관해야합니다. DAY 1 : <ol><li> 3-5일 오래된 성인 여성 모기는 알을 낳기 위해 혈액을 공급하고 있습니다. </li><li> 혈액 먹이를 들어, 인공 막 (parafilm) 수유 방법은 다음과 같이 사용됩니다 : <ol><li> 적혈구는 (혈액 준비 위 참조) ~ 40 %의 혈소판을 (RBC 40 % 혈청 60 %를 포장)을 구하는 열 inactivated 혈청과 혼합됩니다. 이것은 유리 피더에 추가됩니다. </li><li> 피더는 (37 ° C) 물 재킷 따뜻한 연결하고, 멤브레인 표면에 모기의 액세스를 허용하기 위해 새장에 배치됩니다. </li><li> 모기는 ~ 30 분 동안 피드를 사용할 수 있습니다. </li></ol></li></ol> 3 일 : <ol><li> 그들은 피를 먹이 후 암컷 이틀 알을 낳습니다. 원뿔 모양에 싼 작은 종이 필터는 필터 종이 촉촉한도록하고, 증류수가 들어있는 작은 비커에 들어가게된다. 비커는 알을 낳기 위해 모기에 대한 밤새 케이지 내부에 보관됩니다. </li></ol> DAY 4 : <ol><li> 모기 계란을 포함 여과지는 ~ 300 ML 증류수와 플라스틱 트레이에 배치됩니다. 음식의 핀치는 트레이에 추가하고 달걀은 다음 일 동안 애벌레로 부화 수 있습니다. </li></ol> 일 5-8 : <ol><li> 성장하는 애벌레가 음식을 C의 두 돌판과 함께 매일 공급하고, 밀도와 인구에 대한 모니터링입니다. 여덟째 날 (오일 된 애벌레)에서 애벌레 인구는 각 트레이에 식품 식품 C의 두 정제를 한 스푼과 함께 1 트레이에서 ~ 10 트레이로 희석합니다. (~ 30 분) </li></ol> 일 9-12 : <ol><li> 애벌레는 12 일 (구일 된 애벌레)에서 식품 C. 매일 같이 먹이 있으며, 물을 신선한 물로 변화이며, 음식 (식품 및 식품 B C의 두 정제의 핀치) 추가됩니다. pupae이 단계에서 개발 시작합니다. 쟁반은 성인의 탈출을 방지하기 위해 그물로 덮여있다. (~ 80-10 분) </li></ol> DAY 13-15 : 삼일 - pupae는 다음 2 성인에 등장할 수 있습니다. 식품은 신중하게 성인의 탈출 방지하기 위해 그물을 제거하여 애벌레 / pupae 매일 주어집니다. DAY 16 : <ol><li> 성인은 진공에 연결된 흡인기를 통해 케이지로 수집하고 있습니다. 케이지는 10 %의 자당 (autoclaved) 및 케이지 처리하는 동안 발생할 수있는 잠재적인 설탕 유출 소크하기 위해 바닥에 종이 타월 라이닝과 함께 배어있는 목화 심지와 작은 100 ML 병으로 구성되어 있습니다. (~ 30-40 분) </li></ol> DAY 17-21 : <ol><li> 성인 (남성과 여성 모두) 다음 4~5일에 대한 insectary 방에 보관들은 다음주기를 시작하기 위해 다시 혈액 공급되기 전에 10 %의 자당에 공급하고 있습니다. 동일한 모기는 한 번 이상 알을 낳기 위해 사용할 수 있습니다. </li><li> 실험이나 양육을 위해 필요하지 않은 모기는 냉동실에 새장을 배치에 의해 사망​​ 수 있습니다. 사용 트레이와 케이지 그들이 다시 사용하기 전에 청소하고 건조해야합니다. </li></ol> 참고 :이 모기 양육 방식에서 일부 차이를 보일 수 있으며, 다른 연구소 서로 다른 기술을 가지고 있습니다.

<ol><li>Bangs, M. J., Soelarto, T., Barodji,, Wicaksana, B. P., Boewono, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colonization+of+Anopheles+maculatus+from+Central+Java%2C+Indonesia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Mosq+Control+Assoc%22%5BJournal%5D)">Colonization of Anopheles maculatus from Central Java, Indonesia.</a> J Am Mosq Control Assoc. 18, 359-363 (2002).</li>
<li>Beier, M. S., Beier, J. C., Merdan, A. A., el Sawaf, B. M., Kadder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+rearing+techniques+and+adult+life+table+parameters+for+Anopheles+sergentii+from+Egypt%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Mosq+Control+Assoc%22%5BJournal%5D)">Laboratory rearing techniques and adult life table parameters for Anopheles sergentii from Egypt.</a> J Am Mosq Control Assoc. 266, 266-270 (1987).</li>
<li>Benedict, M. Q. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBenedict%2C+MQ+%22Care+and+maintenance+of+anopheline+mosquitoes%2C+The+molecular+biology+of+disease+vectors%3A+A+methods+manual%22">Care and maintenance of anopheline mosquitoes, The molecular biology of disease vectors: A methods manual</a>. Crampton, J. M., Beard, C. B., Louis, C. , Champman & Hall. London. 3-12 (1997).</li>
<li>Casanges, A. H., Mcgovran, E. R., Chiles, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rearing+of+Anopheles+quadrimaculatus+Say+and+Aedes+aegypti+%28L.%29+in+the+laboratory%5BTitle%5D)+AND+%22Mosq+News%22%5BJournal%5D)">Rearing of Anopheles quadrimaculatus Say and Aedes aegypti (L.) in the laboratory.</a> Mosq News. 9, 112-117 (1949).</li>
<li>Merritt, R. W., Dadd, R. H., Walker, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feeding+behavior%2C+natural+food+and+nutritional+relation+ships+of+larval+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Rev.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Feeding behavior, natural food and nutritional relation ships of larval mosquitoes.</a> Annual Rev. Entomol. 37, 349-376 (1992).</li>
<li>Nasirian, H., Ladonni, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Artificial+bloodfeeding+of+Anopheles+stephensi+on+a+membrane+apparatus+with+human+whole+blood%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Mosq+Control+Assoc%22%5BJournal%5D)">Artificial bloodfeeding of Anopheles stephensi on a membrane apparatus with human whole blood.</a> J Am Mosq Control Assoc. 22, 54-56 (2006).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>먹이 A</td><td></td><td>Aquaricare</td><td></td><td>분쇄된 물고기 먹이. 소량을 첨가해야 함.</td></tr><tr><td>먹이 B</td><td></td><td>Purina</td><td></td><td>분쇄된 고양이 먹이. 소량을 첨가해야 함.</td></tr><tr><td>먹이 C</td><td></td><td>Purina</td><td></td><td>고양이 먹이. 정제 2개를 첨가해야 함</td></tr><tr><td>RBC</td><td></td><td></td><td></td><td>준비된 적혈구: 인간 혈청 내 40% hematocrit</td></tr><tr><td>RPMI</td><td>배지</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CPD</td><td></td><td></td><td></td><td>항응고제</td></tr><tr><td>serum</td><td></td><td></td><td></td><td>O+ 인간 혈청</td></tr><tr><td>모기 피더</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>파라필름</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anopheles gambiae</td><td></td><td></td><td></td><td>모기</td></tr><tr><td>10% sucrose</td><td></td><td></td><td></td><td>모기 먹이</td></tr><tr><td>곤충 사육장</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

모스키토 리어링 (a. gambiae)에 대한 프로토콜

Protocol for Mosquito Rearing (A. gambiae)

이 프로토콜은 insectary에 모기 양육에 대해 설명합니다. insectary 객실은 28 유지 ° C와 12 시간 함께 ~ 80 %의 습도. 주 / 야주기. 이 절차를 들어, 모기 연습장 10 % 살균 자당 솔루션, 종이 수건, 비커, 왓먼 필터 종이, 유리 모이통, 인간 혈액 및 혈청, 물 목욕, parafilm, 증류수, 깨끗한 플라스틱 쟁반, 모기 음식 (설명 필요 아래), 어른을 수집하기 위해 트레이, 진공 및 수집 챔버를 충당하기 위해 그물 모기.

이 동영상은 실험실에서 뒤쪽 아노 펠 레스 gambiae하는 데 사용되는 일반적인 기법을 보여줍니다. 실험실 모기를 돌보는위한 방법은 혈액 먹이 어른 pupae에 애벌레에서 유기체의 생명주기의 모든 단계를 통해 증명하고 있습니다.

모스키토 리어링 (A. gambiae)에 대한 프로토콜

본 프로토콜은 곤충 사육실에서의 모기 사육 방법을 설명합니다. 곤충 사육실은 28°C의 온도와 약 80%의 습도로 유지되며, 12시간의 명/암 주기...

안녕하세요, 저는 존스 홉킨스 보건대학원 George OU 박사님 연구실의 박사후 연구원 Shish입니다. 분자 미생물학 및 면역학과에서 모기 종인 phis Gambi를 사육하는 방법을 보여드리겠습니다. 연구실 내 곤충 사육실에서 이들을 관리하며, 사육실은 보통 27 °C의 온도와 80% 습도로 유지됩니다.곤충 사육실은 자연 상태의 환경을 모방하기 위해 12시간 주기 낮밤 사이클로 유지됩니다. 이곳은 저희가 보유한 곤충 사육실로, 이곳의 핵심 시설이며 곤충들을 관리하는 곳입니다. 보시는 바와 같이, 알, 다양한 단계의 유충 및 번데기 등 모든 성장 단계의 모기가 담긴 다양한 트레이들이 준비되어 있습니다.이 트레이들에는 11일 또는 12일 된 유충들이 들어 있으며, 이곳은 성체 모기를 수집하여 10% sucrose 용액과 함께 유지하는 케이지입니다. 모기 사육을 시작하려면 모기에게 혈액을 먹여야 하는데, 모기가 알을 낳기 위해서는 혈액 속의 단백질이 필요하기 때문입니다. 따라서 1일 차는 성체 모기를 케이지에 수집하여 10% sucrose 상태로 유지한 후부터 시작됩니다.첫째 날에는 모기에게 혈액을 공급해야 하며, 이것이 인공 막 혈액 공급법을 사용하는 이유입니다. 이것은 모기의 막 공급에 사용하는 유리 피더입니다. 보이는 작은 구멍을 통해 내부에 혈액을 넣으면 그 안에 담기게 됩니다.하단 측면에는 두 개의 노즐이 있으며, 이는 37°C로 유지되는 온수조에 연결되어 있습니다. 혈액을 37°C의 온도로 유지하고 급이 장치를 준비하기 위해, 소량의 페릴(peril) 조각을 준비합니다. 양 끝과 네 면을 모두 잡아당겨 늘린 다음, 유리 급이 장치의 열린 쪽에 부착하여 피부와 유사한 얇은 막 형태의 층을 만듭니다.이것은 막 공급법(membrane feeding)이라고 불리는 방식입니다. 이것은 순환식 항온수조로, 수온을 37°C로 유지하며 유리 피더(glass feeder)를 통해 물을 순환시켜 혈액이 37°C의 따뜻한 상태로 유지되도록 합니다. 작은 모세관을 통해 유리 피더를 순환식 항온수조에 연결하고 항온수조를 켜면 물이 순환하게 되며, 물과 혈액은 서로 다른 두 개의 챔버에 들어 있기 때문에 절대 섞이지 않습니다.이것은 성체 Phis Gambi 모기가 들어있는 케이지입니다. 여기 유리 피더가 있으며, 이는 순환 수조에 연결되어 있습니다. 케이지 상단에 클램프를 고정하고 200 µL의 혈액을 추가합니다. 케이지에는

Research

연구

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Biology

생물학

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