Name: 모기와 감염 표현형 결정에서 Plasmodium falciparum 감염에 대한 프로토콜 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-04T00:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 10 s
Description: 배우세요 모기 감염 표현형 결정 방법을 Plasmodium falciparum과 Anopheles gambiae를 사용하여. 이 프로토콜은 말라리아 전파 연구와 유전자 기능 분석에 필수적인 기술을 제공합니다.

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gametocyte 문화의 A. 준비 : <ol><li> 신선한 인간의 혈액과 물 목욕 37 O C에 혈청을 가져와. </li><li> 무균 조건, pipet eppendorf 튜브에 따뜻한 혈액 1 ML 아래 퓸 후드에. 2,200 rpm으로 5 분간 원심 분리기에서 혈액을 돌려. 적혈구는 pelleted되어야하며 맑은 혈청을 제거하고 폐기. gametocytes에 대한 전체 혈액을 얻기 위해 새로운 혈청 3 회 중 동일한 볼륨 erythocytes 씻으십시오. </li><li> CO 2 배양기 또는 캔들 병에서 gametocyte 문화를 검색할 수 있습니다. 이 문화는 문화 일 16 일 모기에 RPMI 미디어 및 방송에서 유지 관리해야합니다. gametocytemia %를 (문화의 날 16 일)를 확인하려면 한방울의 피가있는 유리 슬라이드에 얇게 얼룩을 만들고 Geimsa 얼룩도 수행합니다. 기생충 문화의 분야에서 gametes의 수를 결정합니다. 그것은 2의 범위에서 일반적으로있다 - 4 %. 당신이 원하는 마지막 %의 gametocytemia (0.3 -1 %)를 달성해야합니다 전체 혈액의 볼륨을 계산합니다. </li><li> , pipet을 사용하여 gametocyte 문화 미디어의 대부분을 제거 방해하거나 기생충을 빨아 (미디어가 빨강 / 분홍 빛이 될 동안 기생충과 같이 검정색 나타납니다)하지 돌보는. 15 ML 팔콘 튜브에 미디어와 기생충의 나머지 Pipet. 2,200 rpm으로 5 분간 원심 분리기에 돌려. 기생충과 적혈구는 펠렛은, 제거 및 방해 기생충없이 뜨는 미디어 삭제됩니다. </li><li> 당신에게 이전 계산에 따르면 원하는 최종 gametocytemia 줄 준비가 전체 혈액의 볼륨 (단계 A2에서)와 기생충을 결합합니다. 철저하게 섞어 Pipet. (~ 1 분) </li></ol> 이것은 지금 당신이 모기에 피드됩니다 예제입니다. 물이 욕조에서 37 O C에서 보관. B. 먹이 모기 : <ol><li> 메쉬가 고무 밴드 또는 컵와 함께 제공된 판지 뚜껑을 확보할 수 그물로 덮여 왁스 늘어선 종이 컵에 아노 펠 레스 모기 (~ 30-50) 넣어. 우리는이 단계의 배터리로 작동하는 흡인기를 사용합니다. </li><li> 고무 튜브에 유리 모이통의 양쪽에 노즐을 삽입하여 순환 물 목욕을 준비합니다. 당신이 일련의 필요로 많은 모이통으로 연결하며 일련의 한쪽 끝을은 물 목욕 (피더를 통해 물들을 못살게 굴지되는 부분)의 유통자에 튜브로 연결되어 있어야합니다,이 시리즈의 다른 쪽 끝을는 고무 튜브로 구성해야 순환 물을 욕조에 다시 빈 수 있도록 욕조에 빠져들. 물 37에 대해 O C와 물을 욕조에 다시 피더를 통해 순환하고있다 때까지 목욕을 켭니다. 이것은 혈액 따뜻하게 유지하고 기생충이 살아있게하는 것이 필수적입니다. </li><li> 피더 오프닝에 단단히 밀봉 압력을 사용하여 유리 막 피더 주변 스트레칭하여 세포막을 (우리가 늘어 parafilm 작은 사각형을 사용하는) 준비. 이 막이 피부 역할을하게 될 것입니다. </li><li> 플레이스 각 모기 컵 및 클램프 또는 테이프를 사용하여 보안 모이통에 한 피더 막 측 다운. 모기는 컵 내부에서 액세스할 수 있도록 막이 그물을 잔뜩 앉아해야합니다. </li><li> 피더의 목에 조심스럽게 피펫 기생충 - 혈액 식사 (단계 A5에서), 혈액이 모기가 피를에 액세스할 수 있도록 멤브레인 문의, 저수지에 목을 처음부터 끝까지 간다 확실히 하려구요. 우리는 피더 당 혈액 200 μl에 대해 사용할 수 있지만이 다를 수 있습니다. </li><li> 모기가 먹이를 허용합니다. 우리는 그들이 ≈ 30 분 동안 먹을 수있게 (theexperiment에 따라 변수를, 대부분의 실험을 위해, 때로는 얼마나 많은가 이미 복부에있는 혈액의 콘텐츠를보고 식사를 데리고 모니터링.) </li><li> 수유 후, 모기 컵에서 피더를 제거합니다. 물 목욕을 끄고 튜브에서 모이통 연결을 끊습니다. </li><li> 멤브레인를 제거하고 오염을 제거하다와 물로 씻어 10 %의 표백제에 모이통 만끽해보세요. 이곳은 많은 생물 학적 소켓에있는 작은 생물 학적 가방 보증금으로 (세포막, 종이 수건, 장갑, 등) 자료를 오염. </li><li> 냉장고 또는 차가운 방에서 컵을 배치하여 모기를 마취. 일단 모기가 완전히 anesthetized 있으며, 얼음 양동이에 포함된 배양 접시에서 그들을 전송합니다. 정렬 모기는 혈액 식사의 기호에 대한 abdomens에서 신중하게보고하고, 피드 않았들을 폐기. 다른 사람들이 섭취 혈액의 좁은 밴드를 표시합니다 반면 어떤 모기가 완전히 부풀어 오른 것입니다, 모두는 &quot;먹이&quot;로 가능합니다. 종이 컵에 다시 먹은 모기 놔. </li><li> 모기에 설탕 식사 (10 % 자당에 배어 목화의 조각)를 제공하고, 7 일 동안 정상 insectary 조건에서 알을 품다. 매일 모기가 사망률에 대한 모니터링해야합니다. 또한, 면화는 그들이 음식을 박탈하지 않도록, 자당와 젖은하여야한다. 그것은 모기가 습한 상태로 유지하려면 증류수에 담가 종이 타월을 추가하려면 아직 더 있습니다. 이러한 모기 피 아르 falcipraum 감염된 모든 관리가 더 모기가 escap 수 없을 정도로 이동해야하므로컵에서 전자. 작은 cagefor 이중 보호에 얹어하는 것이 좋습니다. </li></ol> C. 모기가 midguts 분석 해 봅시다하고 oocyst의 하중을 추정 : <ol style="margin-top: 0in"><li style="tab-stops: list .5in"> 배터리로 작동하는 흡인기를 사용하여 종이 컵에서 대기음 모기 (단계 B에서). 이동식 흡인기 저수지 안에 마취 모기, 차가운 방에 이동하거나 적어도 5 분 또는 모기 중단 이동까지 얼음에있는 저수지를 압도하여. </li><li style="tab-stops: list .5in"> 저수지에서 얼음에 포함된 유리 페트리 접시에 anesthetized 모기를 전송합니다. 단일 레이어로 모기를 확산 플라스틱 페트리 접시의 뚜껑이있는 표지. 접시에 숙박하실 수 없습니다 모기 추운 방 또는 얼음에 반환되는 저수지에 남아 있습니다. </li><li style="tab-stops: list .5in"> 세부적으로 밀고 집게를 사용하여 해부 현미경 아래에 탑재 유리 슬라이드에 포함된 100 UL PBS로 요리에서 단일 모기를 전송합니다. 냉장 페트리 접시에 나와 다른 둡니다. </li><li style="tab-stops: list .5in"> 세부적으로 밀고 집게를 사용하여, 흉부 및 복부 뒷부분에서 모기를 개최. midgut 노출 때까지 분리 시체를 당겨. gut.The 뱃속에서 초과 조직을 제거하는 집게를 사용하여이 흰색처럼 몸 색처럼 보인다. 0.2 %가 mercurochrome의 5-10 μl의 12 잘 유리 슬라이드 및 담가 잘 하나 gut.Mount 창자에서 여분의 조직을 제거합니다. 호박은 12 자 슬라이드 때까지 다른 모기를 위해 젖은 종이 towel.Continue에 시체와 폐기가 가득 찼습니다. 유리 coverslip으로 탑재 용기를 커버. </li><li style="tab-stops: list .5in"> 희미한 / 맑은 분홍색 굿 조직에 대한 밝은 분홍색 얼룩 원형 oocysts를 찾고, 가벼운 현미경으로 배짱을 검사합니다. , oocysts 백작 기록하고 다음 예제를 계속합니다. 모든 실험 치료에서 모기 모든 계속합니다. </li><li style="tab-stops: list .5in"> 완료되면, 종이 타월로 깨끗이 닦아 슬라이드. 작은 생물 학적 가방으로, 용기와 종이 타월, 그리고 시체와 함께 종이 타월을 놓고 쓰레기통에 폐기합니다. 장갑이 절차 전반에 걸쳐 착용합니다. 치료는 감염된 모기 탈출하게하지 않도록합니다. </li></ol>

<ol><li>Avila, S. L., Ferreira, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malaria+diagnosis%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Braz+J+Med+Biol+Res%22%5BJournal%5D)">Malaria diagnosis: a review.</a> Braz J Med Biol Res. 29 (4), 431-443 (1996).</li>
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</ol>

이 Plasmodium 감염 및 감염 표현형 결정에서 일부 차이를 보일 수 있으며, 다른 연구소는 다른 기술을 따라 수 있습니다.

모기와 감염 표현형 결정에서 plasmodium falciparum 감염에 대한 프로토콜

Protocol for Plasmodium falciparum Infections in Mosquitoes and Infection Phenotype Determination

유전자가 말라리아에 대한 잠재적 내화물로 식별되면, 그것은 모기 이내 Plasmodium 감염을 예방의 역할에 대해 평가해야합니다. 이 프로토콜은 모기의 plasmodium 감염의 범위가 assayed 수있는 방법을 보여줍니다. gametocyte 문화, 멤브레인 수유 모기 인간의 혈액을 준비하고 모기 midgut에서 바이러스 titers을 시금에 대한 기술은 증명됩니다.

모기와 감염 표현형 결정에서 Plasmodium falciparum 감염에 대한 프로토콜

특정 유전자가 말라리아에 잠재적으로 저항성을 가진 것으로 확인되면, ... 내에서 Plasmodium 감염을 예방하는 해당 유전자의 역할을 평가해야 합니다.

저는 존스 홉킨스 공중보건대학원 말라리아 연구소의 George Dimopoulos이며, 지금부터 Anopheles gambiae 모기에 Plasmodium falciparum 기생충을 감염시키는 방법과 모기 중장(midgut)에서 감염 표현형을 결정하는 절차를 보여드리겠습니다. 이 절차를 위해 필요한 기본 장비는 기생충 배양을 위한 CO2 배양기입니다. 만약 CO2 배양기가 없다면 캔들 자(candle jar)를 사용할 수 있습니다.물론 곤충 사육장과 해부 현미경, 광학 현미경 같은 표준 분자 생물학 및 세포 생물학 장비도 필요합니다. 항온수조와 모기 막 공급 장치 및 원심분리기 또한 필요합니다.안녕하세요, 저는 George Depos 박사님 연구실의 박사후 연구원 ISH입니다. 저는 박사 과정생인 Lindsay Garver라고 합니다.플라스마 감염의 첫 번째 단계는 플라스마 배양액을 준비하는 것입니다. 이산화탄소 배양기가 없는 경우, 캔들 자(candle jar)를 사용하여 6-웰 플레이트에 가토 세트(gato set) 배양액을 넣은 후, 양초에 불을 붙이고 용기를 밀봉하여 사용할 수 있습니다. 첫 번째 단계는 신선한 사람의 혈액과 혈청을 준비하여, 먼저 37°C 워터배스에서 해동하고 따뜻하게 유지하는 것입니다. 혈액과 혈청이 충분히 따뜻한 상태여야 하기 때문입니다.혈액을 준비하려면 신선한 인간 혈액 한 단위를 별도로 분리해야 합니다. 신선한 혈액을 2000 RPM에서 5분 동안 원심분리하여 적혈구를 침전시킵니다. 원심분리가 끝나면 상층액을 제거하고, 적혈구(RBC)인 적색 펠렛을 인간 혈청으로 3회 세척해야 합니다.펠렛에 동일한 부피의 인간 혈청을 첨가하고, 이를 혼합한 후 2000 RPM에서 5분 동안 다시 원심분리합니다. 이 단계를 세 번 반복합니다. 최종적으로, ganote 배양액에 첨가할 준비가 된 적혈구 펠렛을 얻습니다.CO2 배양기에 보관된 말라리아 원충(Plasmodium) 배양물은 RPMA 배지에서 16일 동안 유지해야 하며, 16일째 되는 날에 감염 준비가 완료됩니다. 말라리아 원충 배양물을 다루고 있으므로 모든 단계에서 각별한 주의가 필요합니다. 첫 번째 단계로, 기생충은 BSL-2 실험실에서 배양해야 하며 모든 과정은 후드 내에서 수행되어야 합니다.모든 피펫 팁과 어펜도프 튜브 등 모든 소모품은 생물학적 위험물 폐기함에 버려야 하며, 피펫맨과 같은 기타 용액 접촉 기구들은 10% 표백제로 세척해야 합니다. 이때 반드시 장갑과 실험복을 착용하십시오. 16일 차 배양액에서는 혈액 한 방울을 슬라이드 글라스에 떨어뜨려 도말 표본을 만든 후, 기은 스테이닝(Giemsa stain)을 실시하고 광학 현미경으로 관찰합니다.16일 된 생식모세포 배양물에서 GAMMAT 백분율을 측정할 수 있습니다. 기생충이 웰 바닥에 가라앉아 있으므로, 기생충을 건드리거나 흡입하지 않도록 주의하며 배지의 대부분을 제거하고, 나머지 배지와 기생충을 파이펫으로 옮깁니다. 적혈구 내의 기생충을 혼합하여 분리한 후, 원심분리기에 넣고 2000 RPM에서 5분 동안 회전시킵니다.원심분리 후, 기생충은 적혈구와 함께 펠릿(pellet) 형태로 가라앉습니다. 상층액은 RPMI 배지이며, 바닥의 펠릿에 기생충이 포함되어 있습니다. RPMI인 상층액을 제거하여 적혈구와 함께 펠릿만 남깁니다.기생충과 적혈구가 교란되지 않도록 배지 관리에 주의해야 합니다. GIMs 10에 의해 결정되는 GATOT 백분율은 보통 2~4% 범위입니다. 원심분리 후 적혈구와 기생충이 준비되면 이를 함께 혼합하며, 첨가해야 할 혈액의 양은 최종 GATOT 백분율에 의해 결정됩니다. 이는 정밀해야 하며, 보통 0.3~1% 범위이며, 이것이 phys 모기 흡혈에 사용됩니다.Presidium S 감염을 위해, 이것은 모기의 막 공급(membrane feeding)에 사용하는 유리 피더입니다. 보이는 작은 구멍을 통해 내부에 혈액을 넣으면 그 안에 담기게 됩니다. 하단 측면에는 두 개의 노즐이 있으며, 이는 37 °C로 유지되는 항온수조에 연결되어 있습니다.급이를 위한 피더를 준비하기 위해, 소량의 affil 조각을 준비합니다. 양 끝과 네 면을 모두 잡아당긴 다음, 이를 유리 피더의 개방된 쪽에 부착하여 피부를 모사한 얇은 막 형태의 시트를 만듭니다. 이것을 막 급이(membrane feeding)라고 합니다.이것은 순환식 항온수조로, 수온을 37°C로 유지하며 유리에 된 피더를 통해 물을 순환시켜 혈액이 37°C의 온도로 유지되도록 합니다. 따라서 작은 모세관을 통해 유리 피더를 순환식 항온수조에 연결한 후 항온수조의 전원을 켜서 물이 순환하도록 합니다. 이때 물과 혈액은 서로 다른 두 개의 챔버에 들어 있으므로 절대 섞이지 않습니다. 이것은 phis Gambi 모기가 들어 있는 작은 컵입니다.우선, 유리 피더를 케이지 위에 올리고 유리 피더 위에 무게추를 놓아 필름 형태의 막이 메쉬망과 수평이 되도록 합니다. 기생충이 포함된 혈액 약 200 µL를 필요한 감염률에 맞추어 피더에 첨가하며, 이때 혈액이 바닥까지 완전히 내려가 모기가 혈액에 접근할 수 있도록 합니다.흡혈 과정은 약 30분 동안 계속됩니다. 흡혈이 완료되면 유리 피더를 10% 표백제로 철저히 세척하고, 나머지 막과 테이프 등 모든 부속품을 제거하여 생물학적 위험물 폐기함에 버립니다. 흡혈 후에는 흡혈하지 못한 모기를 흡혈한 모기로부터 분리해야 합니다.이를 위해, 흡혈한 모기가 들어 있는 작은 컵들을 저온실에 5~10분 동안 두어 모기를 마취시켰습니다. 보시는 바와 같이, 모기들은 저온 상태에서 이미 활동성이 저하되었습니다. 뚜껑을 열고 모기들을 작은 페트리 접시로 옮기는데, 이때 모기들이 계속 차가운 상태를 유지하여 탈출하지 못하도록 페트리 접시를 아이스 버킷 위에 올려둡니다.이 모기들은 말라리아 원충(plasmodium)에 감염되었으므로, 탈출하지 않도록 각별히 주의해야 함을 기억하십시오. 모기들을 저온실로 옮긴 후에는 실온으로 유지되는 일반 곤충 사육장으로 이동시키지만, 모기들이 항상 비활성 상태를 유지하도록 얼음 버킷 안에 둔 페트리 접시에 모기들을 담아 보관합니다. 이를 통해 흡혈한 모기를 흡혈하지 않은 모기들로부터 어떻게 분리할 수 있는지 확인할 수 있습니다.흡혈한 개체들은 혈액을 머금고 있습니다. 이들은 완전히 팽창된 상태입니다. 일부는 혈액을 부분적으로만 섭취하여 완전히 팽창되지 않았습니다.일부 개체는 복부에 소량의 혈액이 들어 있지만, 다른 개체들은 복부에 많은 양의 혈액이 들어 있습니다. UNFI 개체들은 복부에 혈액이 전혀 없으므로, 흡혈한 개체와 흡혈하지 않은 개체를 매우 쉽게 구별할 수 있습니다. 여기 혈액을 섭취한 성체 암컷 모기들이 있으며, 이 모기들을 페트리 접시에서 파라핀 왁스가 칠해진 판지 컵으로 옮기겠습니다.흡혈한 모기들을 컵에 넣은 후, 이후 7일간의 배양 기간 동안 모기들이 섭취할 수 있도록 10% sucrose에 적신 작은 면 조각을 넣어줍니다. 또한 컵 내부의 습도를 유지하기 위해 작게 접은 습지(wet paper towel)를 함께 넣고 페트리 접시로 덮어줍니다. plasmodium에 감염된 모기들은 또 다른 작은 케이지에 넣어야 하므로 이중 보호 조치가 필요하며, 이 케이지를 27 °C, 습도 80%로 유지되는 B3 실험실에 둡니다. 흡혈 7일 후, 곤충 사육실의 이중 케이지 상자에 보관되었던 모기들을 사육실에서 꺼내어 마취(knock down)시키기 위해 저온실로 옮깁니다.모기들이 제압되면, 얼음 버킷 위에 놓인 페트리 접시로 옮깁니다. 이제 모기를 해부할 준비를 하겠습니다. 중장(mid gut)을 해부하여 시스트(cyst)를 찾을 것입니다.첫 번째 단계는 해부 현미경에 거치된 유리 슬라이드 위에 PBS 100 µL를 첨가하는 것입니다. 다음 단계로 핀셋을 사용합니다. 페트리 접시에 있는 모기 한 마리를 해부 현미경에 거치된 유리 슬라이드 위의 PBS로 옮깁니다.나머지는 냉장된 페트리 접시에 그대로 둡니다. 모기를 해부하려면, 한쪽 핀셋(fp)으로 흉부를 잡고 다른 핀셋으로 복부 후단을 잡습니다. 그런 다음 중장이 노출될 때까지 신체 부위를 천천히 당깁니다.흰색 자루 모양의 구조물처럼 보입니다. 포셉을 사용하여 과잉 조직과 다른 신체 부위들을 제거하십시오. 네, 이것이 흰색 자루 모양의 구조물처럼 보이며 os를 포함하고 있는 중장(midgut)입니다. 이제 이 중장을 12웰 유리 슬라이드로 옮겨 5~10 µL의 0.2% micro pro에 담그면 중장이 고정됩니다. 슬라이드를 회수하십시오.커버 슬립을 이용하여 감염된 모든 모기에 대해 이 단계를 수행합니다. 중장이 밝은 분홍색으로 보이며, 이 슬라이드를 광학 현미경으로 옮겨 오오시아라(oocyst) 수를 측정합니다. 현재 감염된 모기에서 적출한 중장을 관찰하고 있습니다.중장(midgut)은 매끄러운 신체 조직처럼 보이며, rom 염색 시 매우 옅은 분홍색을 띱니다. O SST는 옅은 분홍색의 장 조직과 대비되어 밝은 분홍색으로 나타나야 합니다. 여기 있는 중장들은 감염된 모기에서 추출한 것이지만 SST가 전혀 관찰되지 않으므로, 감염되지 않았을 가능성이 있습니다. 만약 중장이 감염되었다면 S는 작고 밝은 분홍색 원형으로 나타났을 것이며, 때로는 단일 중장 내에 22 500개 사이의 수많은 lag가 존재할 수 있습니다.본 절차는 사람의 혈액을 plasmodium rum 기생충으로 감염시킨 후, 이 감염된 혈액을 ly 감비아 모기에게 섭취시키고, 해당 모기에서 중장을 적출하여 감염된 중장 내의 OSIS 수를 측정하는 과정을 포함합니다. 이 기술은 실험실에서 재현할 수 있는 인간 말라리아 전파의 가장 근접한 근사치라는 점에서 중요합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

유전자가 뎅그열 바이러스에 대한 잠재적 내화물로 식별되면, 그것은 모기 내에서 바이러스 감염을 방지에의 역할에 대해 평가해야합니다. 이 프로토콜은 모기의 뎅그열 감염의 범위가 assayed 수있는 방법을 보여줍니다. 문화, 멤브레인 수유 모기 인간의 혈액에있는 바이러스를 성장하고, 모기 midgut에서 바이러스 titers을 시금에 대한 기술은 증명됩니다.

모기 (A. aegypti)와 감염 표현형 결정에 뎅그열 감염 프로토콜

쥐 말라리아 기생충의 유전자 십자가는 모기에 두 유전자 별개의 기생충을 먹이에 의해 수행됩니다. 재조합 자손은 모기가 감염된 쥐를 물어 수 있도록 후 마우스 혈액에서 복제됩니다. 이 비디오의 유전자 십자가를 생산하는 방법을...

쥐 말라리아 기생충의 유전자 크로스의 생산을위한 프로토콜

말라리아 전염 모기는 분자 기술을 통해서만 감지할 수 있는 역학적으로 중요한 여러 가지 특성을 가지고 있습니다. MALDI-TOF 기반 SNP 유전형 분석 플랫폼을 활용하여 말라리아 매개체의 여러 주요 특성(종, 살충제 내성, 기생충 감염 및 숙주 선택)을 동시에 검출할 수 있는 분석을 개발했습니다.

말라리아 모기 전송하기위한 다중 탐지 분석

인간 microRNA는 숙주 적혈구에서 Plasmodium falciparum 기생충으로 전위합니다. 여기에서는 합성 microRNA를 숙주 적혈구로 transfection하고 P. falciparum에서 모든 RNA를 분리하는 데 사용되는 기술에 대해 설명합니다.  또한 이 논문에서는 기생충 전사체의 리보솜 점유 및 번역 가능성을 결정하기 위해 P. falciparum에서 폴리솜 분리 방법을 자세히 설명합니다.

방법은 작은 RNA를과의 리보솜 점유 규제 역할을 조사하기 위해<em&gt; 말라리아 원충</em

인간 말라리아 기생충에 설치류 말라리아 기생충의 생활 주기 그리고 생물학의 눈에 띄는 유사성 때문에, 설치류 말라리아 모형은 말라리아 연구를 위해 필수불가결하게 되었습니다. 본 명세서에서, 우리는 야생형 및 형질전환 설치류 말라리아 종의 표현형 분석에 사용되는 가장 중요한 기술중 일부를 표준화하였다.

설치류 말라리아 기생충 무성 및 성적 혈액 단계 및 모기 단계의 현상형 분석

말라리아 기생충의 모기 단계에 대한 상세한 조사는 효과적인 전송 차단 전략을 설계하는 데 중요합니다. 이 프로토콜은 전염성 있는 게임토세포를 효과적으로 배양한 다음 이러한 게임토세포에 먹이를 주어 P. falciparum의모기 단계를 생성하는 방법을 보여줍니다.

플라스모듐 팔시파룸 인공 막 수유를 통한 게임토세포 배양 및 모기 감염

이 프로토콜은 모기에서 타액선 포자석을 검출하기 위한 샌드위치 효소 결합 면역 흡착 분석을 설명합니다. 쉽게 구할 수 있는 단클론 항체를 사용하는 이 방법은 Plasmodium falciparum 또는 Plasmodium vivax를 운반하는 모기를 비용 효율적으로 고처리량으로 검출할 수 있습니다. 이 방법은 매개체 조사를 포함한 말라리아 전염 연구에 적합합니다.

효소 결합 면역 흡착 분석을 사용한 Anopheles 모기의 Plasmodium sporozoites 검출

표준 막 공급 분석(SMFA)은 잠재적인 항말라리아 화합물의 평가 및 식별을 위한 황금 표준으로 간주됩니다. 이 인공 먹이 시스템은 Plasmodium falciparum 기생충의 강도와 유병률에 대한 이러한 화합물의 영향을 추가로 평가하기 위해 모기를 감염시키는 데 사용됩니다.

Anopheles 모기 벡터에서 플라스모듐 팔시파룸 감염 검출을 위한 표준 막 공급 분석

말라리아는 감염된 모기에 의한 Plasmodium의 sporozoite 단계 접종을 통해 전염됩니다. 형질전환 플라스모디움 은 말라리아의 생물학을 더 잘 이해할 수 있게 해주었고 말라리아 백신 개발 노력에 직접적으로 기여했습니다. 여기에서는 형질전환 Plasmodium berghei sporozoites를 생성하는 간소화된 방법론을 설명합니다.

유전자 변형 Plasmodium berghei Sporozoites 생성

Plasmodium 성적 발달은 모기의 중장에서 발생합니다. 기생충의 성기를 표적으로 삼는 것은 전염을 차단하는 유망한 전략입니다. 당사는 접합자 형성 후 나노루시페라아제를 발현하는 형질전환 P. berghei인 Ookluc을 개발하여 투과 차단 화합물의 고처리량 스크리닝을 가능하게 했습니다. 이 기사에서는 Ookluc을 사용한 스크리닝 방법에 대해 자세히 설명합니다.

Ookluc: 투과 차단 화합물 식별을 위한 Plasmodium berghei 라인

배우세요 모기 감염 표현형 결정 방법을 Plasmodium falciparum과 Anopheles gambiae를 사용하여. 이 프로토콜은 말라리아 전파 연구와 유전자 기능 분석에 필수적인 기술을 제공합니다.

모기와 감염 표현형 결정에서 Plasmodium falciparum 감염에 대한 프로토콜

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