Name: 꿀벌의 코 확장 응답 클래식 컨디셔닝에 Behavioural 약리학 ( 아피스 mellifera) (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-01-24T17:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 36 s
Description: 배우세요 꿀벌의 고전적 조건화를 이용한 행동약리학 방법으로 학습 및 기억 형성의 분자 메커니즘을 연구하는 기법입니다. 이 방법은 Apis mellifera를 사용하여 신경과학 연구에 활용됩니다.

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DE 배우기 (BFNL)의의 연결을 기초 우리는 원고의 이전 버전에 대한 귀중한 의견을 란돌프 멘젤 감사합니다 :이 작품은 교육 및 번스타인 초점 내에서 연구 (BMBF)의 독일 연방 교육부에서 교부금에 의해 지원되었다.

1. 하이브에서 밀린 꿀벌 <ol><li> 실험 2 4시 사이, 시작 하루 전에 하이브를 떠나 꿀벌 체포됩니다. 이렇게하려면, UV 빛을 투과 플렉시 글라스 피라미드 (높이 = 30cm, 아펙스 3,5가 X 3, 5cm,베이스 18 X 18cm) 꼭대기와 바닥에서 closable는, 20에서 열립니다 - 기본 열고 꼭대기로 벌집 입구 앞 30cm의 거리는 벌집을 떠나는 꿀벌은 피라미드의 기초를 입력되도록 마감했다. 기본은 다음 닫히고 캡처한 꿀벌은 추가 처리를 위해 실험실로 이동됩니다. </li></ol> 2. 유리 튜브 속으로 피라미드에서 꿀벌을 전송 <ol><li> 연구실에서 피라미드가 그 기지에 배치됩니다. 피라미드의 벽은 어두운 아르 (수건 등)하지만, 꼭대기가 밝혀낸 남아 있습니다. 열었을 때 때문에 그들의 긍정적인 phototaxis의 꿀벌은 꼭대기를 통해 피라미드를 벗어나게됩니다. 하나 하나는, 꿀벌은 열 꼭대기 위에 튜브를 개최하여 유리 튜브로 피라미드에서 전송됩니다. 한 병에은 꿀벌마다 사용됩니다. 따라서, 꼭대기 한 벌이 그 병을를 입력하면 닫힙니다. </li></ol> 3. 튜브의 Harnessing 비즈 <ol><li> 꿀벌은 2.5-3.5 분 얼음 유리 튜브에 냉각에 의해 움직일 수 있습니다. 비보고 즉시 움직 정류장으로 얼음을 제거하는 것이 좋습니다입니다. </li><li> 단일 고정 꿀벌은 그것이 자유롭게 아니지만 머리, 흉부 또는 다리의 코를 이동할 수 있습니다 이러한 끈적끈적한 테이프로 작은 플라스틱 튜브에 무력화됩니다. 목이 압축되지 않습니다 것이 중요합니다. </li><li> 플라스틱 튜브에서 수정된 모든 꿀벌들은 더 나은 핸들링과 식별을위한 선반에 정리 시추공 안으로 들어가게된다. 그것이 컨디셔닝 또는 메모리 검색을 위해 제거된 후 튜브는 항상 동일한 시추공에 반환됩니다. </li></ol> 4. 수유 비즈 <ol><li> 첫 번째 저녁 (4-6시)에, 잡은 후, 꿀벌은 자당 솔루션 (0,88 M, 수돗물에 녹아있는 흰색 정제 가정용 설탕)과 포만에 공급하고 있습니다. 꿀벌 먹이를 위해서는 PER은 자당 솔루션의 안테나를 감동 동물 자당 솔루션 중 하나 소적 (4 μL)를 소비 허용 의해 elicited 수 있습니다. 자신의 안테나가 자당 솔루션으로 만져 때 그들은 더 이상 빠르고 안정적​​인 PER를 표시하지 않을 때까지 반복 비즈 연이어 공급하고 있습니다. </li><li> 실험 꿀벌의 각 후속 저녁 (4-6시)에 자당 솔루션 1 소적 (4 μL, 0,88 M, 수돗물에서 해결 흰색 정제 설탕) 다른 네 번 이후를 공급하고 있습니다. 자당 솔루션 수유 동안 꿀벌의 안테나 또는 코와 튜브가 자당 솔루션으로 오염되지 않습니다 발랐습 없다는 것이 중요합니다. 꿀벌은 자당의 자극과 훈련 컨텍스트와 연결의 가능성을 제외하기 위해 에어컨의 사이트에서 또는 근처에 공급되지 않습니다. </li></ol> 5. 무력화 꿀벌이 숙박 유지 <ol><li> 꿀벌은 상온에서 플라스틱 그릇에 하룻밤 보관됩니다. 수돗물은 그릇 (약 0,5-1 cm 높이)로 가득 차 있습니다. 무력화 꿀벌과 랙은 플랫폼으로 엘리사 플레이트를 사용하여 워터 위의 그릇에 배치됩니다. 마지막으로, 그릇은 종이로 덮여 있습니다. </li></ol> 6. 후각 컨디셔닝 실험의 첫 아침 (오전 10시)에서 후각 시설이 수행됩니다. 에어컨 자극 (CS)가 냄새이며, 무조건 자극 (미국)는 자당 솔루션입니다. <ol><li> 냄새 (예 : 클로브 오일) 4 μL 그 다음 20 ML의 주사기에 삽입되는 원형 여과지 (1,3 cm 직경)에 pipetted 있습니다. 냄새는 후드 아래에 pipetted하고 필터 팁는 피펫의 오염을 방지하는 데 사용됩니다. </li><li> 무력화 꿀벌과 랙은 에어컨 절차가 시작되기 전에 에어컨 사이트 30 분 근처에 위치하지만, 거리에서 하나의 꿀벌이 에어컨 아르 배기 파이프 앞에있는 곳으로. 것입니다 </li><li> 에어컨은 10 분 간 재판 간격 (ITI) 세 냄새의 pairings (에어컨 자극, CS)과 자당 솔루션 (무조건 자극, 미국, 1,25 M)으로 구성되어 있습니다. 오디오 플레이어를 통해 실험자에게 전달 음향 신호는 자극 발병, 자극 오프셋, 자극 기간 및 배치의 정확한 타이밍을 보장합니다. 인수 재판은 배기 앞에서 동물의 10 초 배치와 함께 시작합니다. 곧 10 초이 끝나기 전에 그 냄새를 포함하는 주사기는 꿀벌의 안테나를 대상으로 꿀벌 앞에 3cm를 배치됩니다. 이후, 그 냄새는 주사기는 20 ML 공기를 추진하여 5 초를 위해 제공됩니다. 처음 3 초 후 두 안테나의 말초 flagella는 이쑤시개, 동물은 4 초에 대한 moistend 이쑤시개 핥아 허용하는 솔루션 - moistened 자당과 함께 감동하고 있습니다. 13 초 CS의 자극 종료, 꿀벌 후 훈련 컨텍스트 밖으로 촬영하고 있으며 랙에 다시 배치. 모두 한 교육 시범 28 초 지속. 꿀벌의 안테나이나 코도이 컨디셔닝 후 자당 덮여 것이 중요합니다. 따라서 그것은 이쑤시개에만 자당 솔루션과 이쑤시개에 대한 자당 솔루션 양식의 방울없이 그 moistened 것을 보장되어야한다. </li><li> 에어컨 후 랙에은 그릇에 다시 배치됩니다. </li><li> 실험 기간 동안 동물의 행동은, 배치 및 CS와 미국의 프레 젠 테이션 도중 PER의 발생 즉, 감시 및 실험자에 의해 아래로 지적했다. </li></ol> 7. 메모리 유지 <ol><li> 보존 시험은 어떤 간격 (일 분)에서 수행할 수 있습니다. 메모리 테스트가 시작되기 전에 꿀벌과 랙은 에어컨 사이트 30 분 근처에 배치됩니다. </li><li> 메모리 테스트는 미국의 프레 젠 테이션없이 5 초 CS 프레 젠 테이션으로 구성되어 있습니다. 테스트 배기 앞에서 동물의 10 초 배치와 함께 시작합니다. 위에서 설명한 후, 그 냄새는 5 초를 위해 제공됩니다. 동물의 행동은, 배치 중에 PER의 발생을 IE와 CS 프레 젠 테이션은 실험 기간 동안 아래 기록됩니다. </li><li> 실험의 끝에 코 엑스텐션 응답이 다시 동물이 여전히 코를 확장할 수 있는지 확인하기 위해 자당 솔루션 안테나를 만져 elicited 수 있습니다. </li></ol> 8. 체계적 사출 체계 분사의 시점은 실험 설계에 따라 달라집니다. <ol><li> 작은 구멍은 일회용 피하 바늘 (21 G)를 사용하여 비행 근육 17 위 scutal 터지게 옆에있는 순판의 후부 부분 cuticula에서 이루어집니다. </li><li> 유리 모세관을 사용, 1 μL 솔루션은 비행 근육에 cuticula에있는 구멍을 통해 주입합니다. 숙련된 경험은 분사와 컨디셔닝의 정확한 타이밍을 수 있도록, 매 30 초 벌 한 삽입할 수 있습니다. </li></ol> 9. 실험을 진행하는 동안 수유 꿀벌 <ol><li> 에어컨 후 저녁 (4-6시)에, 꿀벌은 자당 솔루션 1 소적 (4 μL, 0,88 M, 수돗물에 녹아있는 흰색 정제 설탕) 다른 네 번 이후를 공급하고 있습니다. 자당 솔루션 수유 동안 꿀벌의 안테나 또는 코와 튜브가 자당 솔루션으로 오염되지 않습니다 발랐습 없다는 것이 중요합니다. 꿀벌은 자당의 자극과 훈련 컨텍스트와 연결의 가능성을 제외하기 위해 에어컨의 사이트에서 또는 근처에 공급되지 않습니다. </li></ol> 10. 데이터 수집 및 데이터 분석 <ol><li> 실험 중에 코 확장 반응의 발생이 모니터링됩니다. 그것이 오픈 mandibles 사이에 가상 선을 넘어, CS의 발병과 미국의 프레 젠 테이션 (훈련 중에) 사이 또는 CS 프리젠 테이션 (시험 단계 동안) 동안의 코를 확장하면 벌은 긍정적인 점수입니다. </li><li> 분석 동물에 포함되는 것은이 기준을 충족해야합니다 : 그들은 모든 실험을 생존해야하며 그들은 실험 끝에 자당 솔루션에 무조건 코 확장 응답 (당) 표시해야합니다. 획득 및 유지 시험 동안 PER를 보여주는 꿀벌의 비율은 각 CS 프레 젠 테이션을위한 꾸몄다입니다. </li></ol> 11. 대표 결과 : 두 실험이 여기에 표시됩니다. 첫 번째 실험에서는 인산염 버퍼 호수 (PBS의 체계 주입의 영향을 봐;의 MM : 137 NaCl, KCl 2,7, 10,1 나 2 HPO 4, 1,8 KH 2 PO 4, 산도 7 2) 학습과 장기 기억 형성에. 꿀벌의 세 그룹이 10 분 간 재판 간격 세 CS - US pairings와 함께 훈련했다 : 비 대우 그룹, 훈련 전에 1 μL PBS 30 분 맞았 었소 그룹, 그리고 사기 - 주입 그룹 치료 PBS - 주입된 그룹으로하지만, PBS를 주입하지 않고 같은 방법으로. 훈련 메모리 후 24 H는 세 그룹으로 한 CS 프레 젠 테이션에서 테스트되었습니다. 에어컨 동안 에어컨 응답을 보여주는 동물의 비율은 세 가지 교육 실험에 걸쳐 크게 증가 (Fig.1, 팩터 시간 반복 측정 ANOVA F 2378 = 340456, P &lt;0,05). PER에 차이 (ANOVA는 요소 그룹 F2, 189 = 1,299, P&gt; 0,05에 대한 반복 측정을위한) 시설 중 세 그룹 사이에 관찰 수 없습니다. PBS - 주입 및 사기 - 주입 동물이 아닌 동물 취급을 비교할 때 24 H 보존 시험 (F2, 187 = 0,752, P&gt; 0,05)에 대한 진정한 보유하고 있습니다. 두 번째 실험에서 우리는 메모리 보존 세 억제하고 단백질 합성 억제제를 anisomycin (10 MM)가 systemically 세 CS - US pairings 후 30 분 주입했습니다 훈련 후 나흘의 시간을 보여줍니다. PBS - 주입된 그룹 anisomycin - 주입된 그룹의 비교는 보존 t 동안 그룹 사이에 상당한 차이를 보여동부 표준시 (Fig.2, 요소 그룹 F1, 94에 대한 반복 측정 ANOVA = 8,86, P &lt;0,05). 큰 차이는 일 3 일 4 메모리 테스트에서 볼 수 있습니다. 이것은 Wüstenberg 외의 결과 유사합니다. 18도 다른 프로토콜과 함께이라도 세 CS - US pairings와 꿀벌을 갖추 사람. <img src="/files/ftp_upload/2282/2282fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. Cuticula의 장애 또는 PBS의 분사가 수집 및 메모리 보존을 변경하지 않습니다. 동물 세 CS - US의 pairings (인수)와 함께 훈련했다. 24 H 후, 메모리 (메모리 유지) 테스트되었습니다. 훈련하기 전에 30 분은 구멍이 두 그룹의 cuticula에서 만들어진 (병변, PBS)와 이러한 그룹 중 하나는 1 μL PBS (PBS)에 주입했다. 세 번째 그룹은 (NO 치료) 그대로 유지했다. 발표는 각 그룹 당과 냄새 프레 젠 테이션에 대한 대처 방법에 대한 동물의 비율입니다. ANOVA는 수집 단계에서 그룹 사이에 큰 차이를 밝혀 (F2, 189 = 1.299, P&gt; 0.05) 또는 메모리에 보존 (F2, 187 = 0.752, P&gt; 0.05)하지 않습니다. <img src="/files/ftp_upload/2282/2282fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2. 마지막 CS - US의 페어링 후 anisomycin 40 분의 분사는 메모리 보존 사흘 사일 훈련 후을 줄일 수 있습니다. 동물은 세 CS - US의 pairings (인수)와 훈련 1 μL 10 MM anisomycin (Aniso) 또는 1 μL PBS로 주입되었다 첫 번째 훈련 시험 후 1 H. 메모리 (메모리 유지) 24 H 48 H 나중에, 72 H 및 96 H를 테스트했습니다. 제시하면 PER과 냄새 프레 젠 테이션에 응답 그룹당 동물의 비율입니다. anisomycin의 주입은 훈련 후에 메모리를 유지하고 72 H 96 H의 상당한 감소 (F1, 94 = 8.86, P는 &lt;0.05)로 ANOVA에 의해 공개로 연결됩니다.

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관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

<ol><li> 꿀벌 잡기 : 경험이 풍부한 식량 약탈을 배워 꿀벌을 수집하려면, 꿀벌은 젊은 꿀벌은 오리 엔테이션 항공편 19에있는 시간을 피하기 위해, 아침이나 오후에 들키지 수 있습니다. Foragers는 화분이나 꿀을 중 하나를 수집합니다. 꽃가루와 꿀은의 foragers 차이들은 설탕 응답과 학습 능력에 따라 20 관찰되었습니다. 단 넥타 foragers을 잡기 위해서, 자당 솔루션으로 가득 인공 음식 소스가 벌통과 동물 근처에 설치할 수있는 거기 수집하실 수 있습니다. 하이브로 돌아가고 꽃가루 foragers들은 뒷다리로 20 꽃가루 바구니에서 확인할 수 있습니다. </li><li> 고정 및 처리 : 그것은 실험이 끝날 때까지 배우와 생존 능력에 영향을 미칠 수 있기 때문에 얼음에 꿀벌의 확장 냉각은 피해야한다. Tarsi은 자당 솔루션 실수로 자극을 피하기 위해 튜브 내에서 신중하게 고정해야합니다. 꿀벌이 succrose 솔루션 3,21와 tarsal 자극에 의해 배울 표시 되었기 때문에 이것은 중요합니다. </li><li> 후각 에어컨 : 에어컨 재판의 번호가, 남북 재판 간격 및 테스트 시점이 연구 3,22의 초점에 따라 다양한하실 수 있습니다. </li><li> 먹이 : 꿀벌의 포만 수준이 학습 성능과 메모리 ​​보존 3,23 영향을 미치는 것으로 알려져 있습니다. 이것은 실험을 계획 할 때 고려되어야한다. </li><li> 사출 : 에어 주머 니나는 꿀벌의 흉부의 17에 위치하고 있습니다. 호흡 시스템의 이러한 중요한 부분은 생존을 위해 필요합니다. 그러므로주의를 주입하는 동안 공기 주머 니나을 손상하지 않도록해야합니다. 기포의 릴리스는 공기 주머 니나에 손상을 나타냅니다. </li></ol>

<table><tbody><tr><td>Omnifix 주사기 20 ml</td><td>B. Braun Medical</td><td>4616200 V</td><td></td></tr><tr><td>정제 백설탕</td><td>Kaisers Supermarket, Berlin, Germany</td><td></td><td></td></tr><tr><td>정향 오일</td><td>Bombastus, Freital, Germany</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Multipette plus</td><td>Eppendorf</td><td>4981 000.019</td><td></td></tr><tr><td>꿀벌용 튜브 30개 랙</td><td>자체 제작</td><td></td><td></td></tr><tr><td>플라스틱 튜브</td><td>자체 제작</td><td></td><td></td></tr><tr><td>UV 투과성 플렉시글라스 피라미드</td><td>자체 제작</td><td></td><td>높이 = 30cm, 정점 3.5 x 3.5cm, 바닥면 18x18cm</td></tr><tr><td>점착 테이프</td><td>Tesa, Hamburg, Germany</td><td></td><td></td></tr><tr><td>모세관 스틱 1-5&amp;mu;l</td><td>Selzer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>모세관 팁 1-5&amp;mu;l</td><td>Selzer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>여과지 두께 0.16-0.2 mm</td><td>Macherey-Nagel</td><td>MN 616 또는 MN615</td><td>직경 1.3 cm의 원형 조각으로 조정됨</td></tr><tr><td>일회용 피하 주사 바늘</td><td>B. Braun Medical</td><td>4657683</td><td>직경 0.45 mm</td></tr></tbody></table>

꿀벌의 코 확장 응답 클래식 컨디셔닝에 behavioural 약리학 ( 아피스 mellifera)

Behavioural Pharmacology in Classical Conditioning of the Proboscis Extension Response in Honeybees (Apis mellifera)

꿀벌 (아피스 mellifera)은 잘 그들의 의사 소통 및 오리 엔테이션 기술에 대한 그들의 인상적인 학습 능력 1,2 알려져 있습니다. 꿀벌 콜로니의 생존 식량 자원의 착취에 의존하기 때문에, 마초 징발 대원의 꿀벌 배우고 변수 꽃 사이트뿐만 아니라 수익성을 외워 두세요. 마초 징발 대원의 꿀벌은 쉽게 자연 설정에서 훈련을 될 수있는 그들이 먹이 사이트에서 마초와 같은 냄새 또는 색상으로 관련 신호를 배웁니다. Appetitive 연관 학습도 컨디셔닝 개별적으로 무력화 꿀벌 3,4의 코 확장 응답 (당)에 의해 실험실에서 제어 조건에서 공부하실 수 있습니다. 이 학습 패러다임은 간단하고 신뢰성이 높은 방법으로 5-12에서 학습과 기억 형성을 기초의 연결 및 분자 메커니즘 연구를 수 있습니다. 행동 약리학 접근은 분자 메커니즘을 연구하는 데 사용됩니다. 마약은 학습과 기억 형성 13-16 동안이나 이후에 특정 분자의 기능을 방해 systemically 주입하고 있습니다. 여기 PER 시설의 무력화 꿀벌을 훈련하는 방법과 비 비행 근육에 주사로 약물 systemically을 적용하는 방법을 보여줍니다.

우리는 마약 조직의 응용 프로그램에서 꿀벌의 후각 appetitive 에어컨 패러다임 (아피스 mellifera)의 행동 약리학 방법을 구현하는 방법을 보여줍니다. 이 방법은 메커니즘 기본 학습과 간단하고 안정적​​인 방식으로 메모리 형성의 조사를 허용합니다.

꿀벌의 코 확장 응답 클래식 컨디셔닝에 Behavioural 약리학 ( 아피스 mellifera)

꿀벌(Apis mellifera)은 의사소통 및 방향 설정 능력과 인상적인 학습 능력으로 잘 알려져 있습니다1,2. ... 때문에

이 절차의 전반적인 목표는 학습 및 기억 형성의 기저에 있는 분자 메커니즘을 연구하는 것입니다. 꿀벌의 경우, 첫 번째 단계는 벌통에서 자유롭게 비행하는 벌들을 수집하는 것입니다. 그다음으로, 벌들을 플라스틱 튜브에 고정합니다.절차의 세 번째 단계는 고전적 조건화를 수행하는 것입니다. 학습 및 기억 형성에 미치는 영향을 연구하기 위해 조건화 전후의 특정 시점에 약물을 투여할 수 있습니다. 절차의 마지막 단계는 기억 유지 능력을 테스트하는 것입니다.결과적으로, 약물 처리 후의 행동 변화는 꿀벌의 학습 및 기억 형성에 기여하는 분자적 기전을 밝혀낼 수 있습니다. 이 방법은 기억 형성의 분자적 기전을 규명함으로써 학습 및 기억 분야의 핵심 질문들에 답하는 데 도움을 줄 수 있습니다.일반적으로 이 방법에 익숙하지 않은 연구자들은 조건 형성 및 기억 회상 과정 중 자극 제시 타이밍이 매우 정확해야 하므로 어려움을 겪을 수 있습니다. 또한, 급이 체계가 매우 중요합니다. 이 절차는 내 실험실의 대학원생인 cutting gearing과 Johannes faberg가 시연할 것입니다. 실험 전날 오후 2시에서 4시 사이에 UV 광투과성 플렉시글라스 피라미드를 사용하여 벌을 채집하십시오.실험실로 돌아오면 피라미드를 바닥면에 놓고, 꼭대기 부분만 제외한 벽면을 수건으로 가려 어둡게 만듭니다. 꼭대기를 열고 입구 위에 유리 바이알을 대고 기다려 벌 한 마리가 바이알 안으로 들어가게 한 뒤 다시 닫습니다. 가을과 겨울철에 모든 벌이 유리 바이알로 옮겨질 때까지 이 과정을 반복합니다.벌들이 야외로 비행하지 않을 때, 벌집을 온실 내 그물망 안에 보관하며, 그물망에서 개별 벌들을 직접 포획합니다. 벌 한 마리당 유리 바이알 하나를 사용하여, 바이알을 얼음 위에서 2.5분에서 3.5분 동안 냉각시켜 벌을 고정합니다. 벌의 상태를 주의 깊게 관찰하고, 움직임이 멈추는 즉시 얼음에서 꺼냅니다.고정된 벌을 점착 테이프를 사용하여 작은 플라스틱 튜브에 고정합니다. 벌의 머리, 가슴, 다리는 움직일 수 없어야 하지만, 배는 자유롭게 움직일 수 있도록 해야 합니다. 또한 목 부분이 압박되지 않도록 주의하는 것이 중요합니다.벌의 준비가 완료되면, 취급과 식별을 용이하게 하기 위해 번호가 매겨진 랙의 구멍에 튜브를 넣습니다.튜브는 항상 동일한 굴속으로 다시 되돌려 놓습니다. 핸들링 후, 조건화 장소와 분리된 곳에서 오후 4시에서 6시 사이에 벌에게 먹이를 줍니다. 벌과 촉각을 자극하여 Proboscis extension response 또는 PER를 유도합니다.자당 용액을 이용하여 벌이 약 4 µL의 SRA 용액 한 방울을 섭취하게 합니다. 벌의 안테나, 입틀 또는 플라스틱 튜브에 용액이 묻지 않도록 주의하십시오. 벌이 더 이상 섭취하지 않을 때까지 각각 급여합니다.안테나가 용액에 닿았을 때 빠르고 신뢰할 수 있는 PER(확장 반응)을 보이는지 확인하십시오. 실험의 다음 날 저녁부터는 각 벌에게 자당 용액 한 방울을 네 번 급여하십시오. 높이가 약 0.5에서 1cm인 플라스틱 그릇에 수돗물을 채우십시오.고정된 벌들이 담긴 랙을 라이사 플레이트(lysa plates)를 플랫폼으로 사용하여 볼에 넣습니다. 볼을 카드보드로 덮고 실온에서 하룻밤 동안 보관합니다. 벌들은 수집 다음 날 오전 10시경에 후각 조건화를 거칩니다.실험 시작 30분 전입니다. 벌집 랙을 조건화 장소 근처에 두되, 벌들이 훈련받게 될 배기 파이프 입구에서는 떨어진 곳에 배치하십시오. 그다음, 후드 내에서 조건 자극제를 준비하십시오.필터 팁을 사용하여 정향유 4 µL를 원형 필터 페이퍼 위에 피펫팅합니다. 향이 밴 필터 페이퍼를 20 mL 주사기에 넣고 플런저를 삽입합니다. 실험자에게 음향 신호를 전달할 오디오 플레이어를 설정합니다.이를 통해 자극의 정확한 타이밍, 자극의 시작과 종료, 지속 시간 및 배치를 보장할 수 있습니다. 조건 형성 전 과정 동안 벌의 행동을 기록할 준비를 하십시오. 조건 자극의 시작과 무조건 자극의 제시 사이에 벌이 SSIS를 확장하면 양수 점수를 부여합니다.벌의 벌어진 하악 사이의 가상선을 가로지르게 합니다. 습득 훈련을 시작하려면, 훈련시킬 벌을 선택하여 배기구 앞에 10초 동안 위치시킵니다. 이 10초 간격이 끝나기 직전에, 냄새가 포함된 시린지를 벌의 촉각으로부터 3cm 거리에 배치합니다. 시린지를 통해 공기 20mL를 밀어내어 5초 동안 냄새를 제시합니다.3초 후, 젖은 이쑤시개에 설탕물을 묻혀 양쪽 촉각의 원위 편모 복측 부위에 접촉시켜 무조건 자극을 줍니다. 벌과 촉각 위에 용액이 묻지 않도록 주의하며, 벌이 이쑤시개를 핥게 합니다. 이러한 복합 자극은 4초 동안 지속되며, 이후 벌을 훈련 환경에서 제거하여 랙에 다시 배치합니다.조건 자극 제시 후 13초가 지나면 한 번의 훈련 시행은 28초 동안 지속됩니다. 시행 간 간격 10분 후에 벌을 훈련 장소로 되돌려 보냅니다. 앞서 설명한 대로 세 번의 시행 중 두 번째 시행을 수행하고, 마지막 짝짓기를 수행하기 전 10분을 추가로 기다립니다.그날의 훈련이 완료되면 랙을 다시 보울에 넣으십시오. 오후 4시에서 6시 사이에 각 벌에게 4 µL의 설탕 용액 한 방울을 네 번 급여해야 함을 기억하십시오. 앞서 시연한 바와 같이, 유지 테스트는 훈련 후 수 분에서 수 일 사이의 어떤 간격으로든 수행할 수 있습니다. 벌 랙을 조건 형성 지점 근처에 30분 동안 두어 기억력 테스트를 준비하십시오.벌을 배기구 앞에 10초 동안 두어 테스트를 시작합니다. 조건 자극을 5초 동안 제시하고 PER의 발생 여부를 기록합니다. 해당 날의 테스트가 완료되면 랙을 다시 용기에 넣습니다.앞서 시연한 대로, 오후 4시에서 6시 사이에 각 벌에게 4 µL의 자당 용액 한 방울을 네 번 공급해야 함을 기억하십시오. 전체 실험이 끝난 후, 분석에 포함될 벌의 안테나에 SRA 용액을 접촉시켜 벌이 여전히 구기를 뻗을 수 있는지 확인하십시오. 벌은 전체 실험 과정 동안 생존해야 하며 온전한 PER을 유지해야 합니다. 일부 연구에서는 약리학적 개입이 후각 기억에 미치는 영향을 연구하기 위해 전신 주입법을 사용합니다. 이러한 주입은 실험 설계에 따라 서로 다른 시점에 수행될 수 있습니다.먼저, 일회용 피하 주사 바늘을 사용하여 비행근 상단의 S scootle fissure 근처 S scootin 후방 부위의 큐티클에 작은 구멍을 냅니다. 다음으로, 유리 모세관에 테스트할 용액 1 µL를 채웁니다. 모세관을 큐티클의 구멍에 삽입하고 비행근에 용액을 주입합니다.숙련된 실험자는 30초마다 한 번씩 B를 주입할 수 있어, 주입 및 조건 형성의 타이밍을 정밀하게 조절할 수 있습니다. 여기에서는 두 가지 실험을 제시합니다. 첫 번째 실험에서는 훈련 전 생리식염수를 전신 주입하는 것이 기억 학습에 미치는 영향을 조사합니다.본 연구에는 치료를 받지 않은 A 그룹, 1 µL의 인산염 완충 식염수를 전신 투여한 그룹, 또는 가짜 처치(sham) 그룹의 세 그룹이 있습니다. 이러한 처치는 왼쪽의 그림에 표시된 훈련 시작 30분 전에 수행되었습니다. 습득 단계 동안 조건 반응을 보인 동물의 비율은 3회의 훈련 시행에 걸쳐 증가하였으며, 그룹 간의 유의미한 차이는 없었습니다.우측의 막대 그래프는 PBS 주입과 가짜 병변(sham lesion) 모두 기억 유지에 영향을 미치지 않았음을 보여줍니다. 두 번째 실험에서 훈련 24시간 후, 훈련 종료 40분 뒤에 주입을 실시하였습니다. 벌들을 식염수를 투여받는 그룹과 단백질 합성 억제제인 anisomycin 1 µL를 투여받는 그룹으로 나누었습니다. 우측의 막대 그래프는 anisomycin을 투여받은 벌들에게서 기억 유지가 뚜렷하게 감소했음을 보여줍니다. 이러한 결과는 후각 기억 형성에 있어 단백질 합성의 중요성을 강조합니다.이 절차에 따라, 발달 이후 학습 및 기억 형성의 신경생리학적 기초는 무엇인가와 같은 추가적인 질문에 답하기 위해 전기생리학적 기록을 수행할 수 있습니다. 이 기술은 학습 및 기억 연구 분야의 연구자들이 꿀벌의 기억 형성 과정에서 분자 및 신경생리학적 메커니즘을 탐구할 수 있는 길을 열어주었습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

꿀벌은 appetitive 후각 학습 패러다임 (당 시설)에서 시설 수 있습니다. 자극과 같은 냄새를 사용하여, 우리는 동시에 칼슘 이미징이 버섯 신체 뉴런에서 냄새 evoked 활동을 측정하는 데 사용하는 동안 기록되는 행동 방식을...

생체내 칼슘 2 + - 허니 비에 강한 학습하는 동안 버섯 바디 뉴런의 영상

이 프로토콜에서 우리는 상태로 촉각 자극에 꿀벌을 밝혀와 고급 규모의 antennal 샘플링 패턴의 운동학을 분석하는 차원 모션 캡처 기술을 소개하는 방법을 보여줍니다.

촉각 시설과 꿀벌에 Antennal 샘플링 전략의 움직임 분석 (<em&gt; API를 mellifera</em&gt; L.)

꿀벌(Apis mellifera)을 위해 개발된 코확장반응(PER) 조절프로토콜은 많은 곤충 종에서 여러 가지 학습 메커니즘을 연구하기 위한 생태학적으로 관련성이 있고 쉽게 정량화할 수 있는 수단을 제공합니다.

코 확장 응답 곤충의 행동 소성을 조사하기위한 프로토콜 : 기본, 바이오 메디컬에 응용 프로그램, 및 농업 연구

용액의 영양분과 독소에 대해 자유롭게 움직이는 호박벌(Bombus terrestris)의 입 부분의 단기 미각 반응을 조사하기 위한 새로운 행동 분석법이 설명되어 있습니다.

소설 행동 분석은 (엉망으로 꿀벌을 자유롭게 이동 개인의 미각 응답을 조사하기<em&gt; 뒤의 terrestris</em&gt;)

이 원고는 자유 비행 꿀벌에 대한 간단한 비 침습적 방법뿐만 아니라 억제 꿀벌의 정확한 지역화 된 처리 수 있도록 더 많은 침략 변종을 포함, 꿀벌에 약리 에이전트를 관리하기위한 여러 프로토콜을 설명합니다.

절제된 자유 비행 꿀 꿀벌의 Neuropharmacological 조작,<em&gt; API를 mellifera이</em

이 프로토콜 기존의 컴퓨터를 사용 하 여 기존의 웹 카메라 비디오에서 곤충 안테나 및 코 위치의 프레임별으로 추적을 위한 새로운 소프트웨어, SwarmSight, 사용 하기 위한 단계를 설명 합니다. 무료, 오픈-소스 소프트웨어 프레임 약 120 배를 인간 보다 더 빨리 처리 하 고 이상의 인간의 정확도에서 수행 합니다.

SwarmSight: 곤충 안테나와 일반적인 준비와 기존 하드웨어를 사용 하 여 코 확장 반사의 실시간 추적

우리는 자유롭게 개인 이동 불가능 분석의 수준에서 시각적 학습 및 메모리 형성 연구에 연구를 이용한 개미 클래식 컨디셔닝에 대 한 프로토콜을 제시.

나무 개미에 비주얼 고전 컨디셔닝

anesthetized 쥐의 실리콘 프로브를 사용하는의 연결 활동의 세포외 녹음이 설명됩니다. 이 기법은 동시에 100 개 이상의 뉴런에서 여러 뇌 영역에 걸쳐 정보를 얻을 수 있습니다. 그것은 여러 지역의 회로에의 연결을 ensembles 역학에 대한 단세포 해상도 정보를 제공합니다.

Anesthetized 쥐의 실리콘 프로브와 함께 대규모의 연결 Ensembles 녹음하기

쥐에서 청각 보철 연구를위한 고전적인 공포 컨디셔닝 행동 패러다임의 응용 프로그램이 설명되어 있습니다. 이 패러다임은 모두 탐지 식별을위한 메커니즘 및 결과 조치로 심장 속도를 사용하여 서로 다른 음향 및 전기 자극 사이에 차별을 제공합니다.

고전 컨디셔닝 및 하트 속도 접근법을 사용 청각 음향과 전기 자극의 자극 페어 차별의 행동 결정

강제 수영 시험은 설치류 동물의 잠재적인 약은 효험을 평가하기위한 실험 방법으로 확인됩니다. 실험 동물은 물과 탈출 관련 이동성 행동의 탱크에 배치됩니다 계량입니다. 이 테스트의 마우스 버전에 대한 일반적인 절차가 설명되어 있습니다.

마우스 강제 수영 시험

배우세요 꿀벌의 고전적 조건화를 이용한 행동약리학 방법으로 학습 및 기억 형성의 분자 메커니즘을 연구하는 기법입니다. 이 방법은 Apis mellifera를 사용하여 신경과학 연구에 활용됩니다.

꿀벌의 코 확장 응답 클래식 컨디셔닝에 Behavioural 약리학 ( 아피스 mellifera)

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