Name: 크레이 레그 신근 근육에 높은 및 낮은 출력 NMJs의 생리 레코딩 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-11-17T17:00:00.000+00:00
Duration: 10 min
Description: 학습하세요 가재 신근 근육에서 고출력과 저출력 운동신경말단의 형태학적 염색 및 전기생리학적 기록 방법. 이 기법은 시냅스 생리학 및 근육 피로 연구에 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

우리는 사설 도움 씨 크레이그 D. 슬레 이븐 (영어학과, 켄터키 대학) 감사합니다. 켄터키 대학, 생물 학부, 학부 연구과 예술 &amp; 과학 대학 사무실에서 지원됩니다.

1) 소개 모터 뉴런은 집합 신경근육학 교차로 (NMJ)이라고합니다 시냅스에서 근육 섬유와 통신합니다. NMJs 대부분의 크레이 근육 준비에 쉽게 액세스할 수 있습니다. 크레이 피쉬 NMJs의 대부분은 척추의 NMJs에 명시된 포유 동물 CNS 또는 subthreshold 응답 시간 postsynaptic dendrites에서 생성된 등급 전기적 신호와 유사한 비 급상승 흥분성의 postsynaptic 잠재력 (EPSP)를 입증 (Wiersma &amp; 반 Harreveld, 1938; 캐츠 &amp; Kuffler, 1946) . 크레이 피쉬 NMJs는 시냅스 시냅스 전달과 분화에 일반적인 통찰력을 제공하는 기본적인 시냅스 모델로 검색할 수 있습니다. 일반적으로, 모터 단위는 근육의 NMJs 및 특성에 시냅스 커뮤니케이 션의 유형을 통해 동물의 행동의 측면을 통제. 게하고 크레이 피쉬 가까이 근육 (루카스 1907 1917)에서 "빠른"와 "느린"근육의 수축의 첫 번째 관찰 이래, 유사한 근육 수축성 차별은 같은 복부 박혀 (케네디 &amp; 다케다, 1965a와 같은 다른 크레이 근육 유형에 설명되어있다 , B)와 사지 extensors (반 Harreveld &amp; Wiersma, 1936). "빠른"수축이 빠른 응답을 시작합니다. 예를 들어, 크레이 피쉬 꼬리 플립은 빠른 동작입니다. "느린"수축 속도가 느린 움직임을 유지하고 자세를 (Bradacs 외., 1997) 유지할 수 있도록 도와주십시오. "빠른"와 "느린"근육의 수축에 대응하는 "하이 / phasic 출력"과 "토닉 / 낮은 출력은"널리 모터 뉴런을 설명하는 데 사용됩니다. 근육 수축의 속도와 타이밍의 차이는 시냅스 구조와 시냅스 강도 presynaptic 차이 (킹 외., 1996)와 관련된 부분이다. Myofibrillar 단백질 이소형 표현은 수축성의 차이도 중요하지만 특정 섬유 모터 뉴런의 두 가지 유형에 의해 innervated되는 다리의 신근 근육의 그런 준비에 초점이 터미널의 시냅스 차이에있는 단말기가 공유 이후 동일한 대상 셀 (Mykles 외., 2002). 이전 연구는 다리 신근의 두 흥분성의 모터 axons 검사를하고 phasic와 토닉 phenotypes을 (Bradacs 외., 1997) 설명했다. 이 보고서에서는, 우리는 다른 사람들이 더 신경이 터미널의 시냅스 분화의 속성을 조사할 수 있도록 절개를 수행하고 녹음을 얻는 방법을 보여줍니다. 보입니다 전송 전자 현미경, 크레이 피쉬 다리 신근 근육에있는 토닉과 phasic 터미널에서 얻은 섹션의 다양한 시리즈 토닉 단말기가 phasic 터미널보다 RRP의 vesicles를 포함하는 것으로 나타났습니다, mitochondria는 토닉 뉴런에 더 유행하고 있으며, phasic 터미널에있는 시냅스 있습니다 더 낮은 출력 시냅스에서보다 복잡한, 그들은 다양한 간격 (밀러 외, 2002; 존스톤 외, 2008;. 킹 외, 1996;.. Bradacs 외, 1997) 여러 활성 영역을 포함하고 있기 때문입니다. 낮은 출력 토닉 단자도 phasic 터미널 (쿠퍼 외., 2003)보다 neuromodulator의 세로토닌과 시냅스 강화 전송 (5 - HT)에 더 취약합니다. 토닉과 phasic NMJ 같은 근육 섬유에 존재하는 사실은 쉽게 특정 근육 섬유에 presynaptic 차이를 평가하고 근육 피로, 신경 우울증과 시냅스 크로스 토크의 질문을 해결하기 위해 수 있습니다. 각종 질문은 토닉과 phasic 터미널 postsynaptic 대상에서 postsynaptic 수용체의 밀도와 글루 탐 산염 수용체 subtypes의 차이가 있는지 여부,이 준비에서 해결될 수 남아 있지만, 이들의 해부 및 생리학의 근본적인 차이에 대한 이해 이 모터 단위보다 깊은 지식 기반을 구축에 도움이됩니다. 희망이 시냅스 준비에서 배운 기본 원리는 다양한 준비의 다른 시냅스 적용되며 왕새우이 시냅스 모델의 향후 조사를 강화 것입니다. 2) 방법 <ol><li> 모든 실험은 중견 왕새우 (Procambarus clarkii)의 첫 번째 또는 두 번째 도보 다리에 실시하고 있습니다. 동물 개별적으로 oxygenized 물로 플라스틱 용기에 보관되어 있습니다. 동물 실의 온도는 13 ° C - 16 ° C.의 범위에 동물은 주간 단위로 변경 건조 물고기 음식과 물을 공급하고 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1 : 왕새우 걸을 수있는 다리와 여섯 말초 세그먼트의 도식. </li><li> 크레이 피쉬에서 걸을 수있는 다리의 말초 측면은 해부학적인 몸의 구조 여섯 세그먼트 (그림 1)으로 나뉘어져 있습니다. 다리 신근는 meropodite에 위치하고 있으며, 격리 될 신경 번들 meropodite ischiopodite 공동 가까운입니다. 토닉이나 phasic 축삭은 선택 N으로 자극될 수그들이 노출된 후 생리 목적 eeded. </li><li> 일이 그렇게되면서, 쿠퍼와 쿠퍼 (2009) meropodite 지역 내에서 따개 모터 신경 세포의 excitor를 노출위한 메소드를 포함하여 초기 절개의 일부 측면을 설명하지만, 그들의 설명은 손상에서 신근 근육을 보호하는 데 필요한 치료를 제공하지 않습니다 따개 근육 준비를 해결하기 위해 필요하지 않습니다. 신근를 보호하기 위해, 첫 번째 또는 두 번째 도보로 다리를 강제 곤란으로 다리를 automize하는 동물을 유도하여 신체 길이 6-10센티미터 (아차 팔 라야 생물학 공급 주식 레이스 랜드, LA)를 측정, 왕새우에서 제거 ischiopodite 세그먼트의 파괴 비행기로 말초. 다리는 측면 (바깥 쪽) 뷰어 직면하고있는 해부 접시에 배치됩니다. 뷰어 밖에 (측면 사이드) (그림 2) 일반적으로 아치형 측면과 함께, 해부 접시에까지 직면하고 있는지 수있을 때까지 다리를 주위에 켜집니다. 조직 종이에 다리를 놓는 것은 이러한 상처를 제작하면서 쉽게 준비를 돌려 수 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2 : 일반적으로 meropodite의 측면쪽으로 아치되는 측면은 해부 접시에 직면하고있다. </li><li> 메스 블레이드 차단기 및 홀더로 날카로운 면도날 방금 meropodite 세그먼트에 대한 그림 3에 표시된 패턴을 통해 절단까지 에칭 표피하는 데 사용됩니다. 케어는 meropodite - carpopodite 공동으로 복부 잘라 지느러미에 너무 멀리 말초를 잘라하지 않도록합니다. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig3.jpg" alt="그림 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 3"> 그림 3 : 표피의 창 밖으로 에칭을위한 제안 패턴으로 라인 meropodite 세그먼트. 준비는 호수에 배치됩니다. 해부 접시는 바닥에 Sylgard (다우 코닝) 코팅 (1cm 두께)가됩니다. Sylgard는 곤충 핀이 아직 준비를 쥐고 그 안에 갇혀 수 있도록하는 데 사용됩니다. 이 시점에서, 핀은 carpopodite 세그먼트의 중간과 ischiopodite 부문 (그림 4)의 지느러미 부분에 붙어있다. 해부 준비는 표준 크레이 피쉬 호수에서 목욕을 205 NaCl로 만든 반 Harreveld의 솔루션 (1936)에서 수정, 5.3KCl, 13.5 CaCl 2; 2 시간 2 O, 2.45 MgCl 2; 6H 2 O, 5 HEPES 및 조정 산도 7.4 (MM)입니다. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig4.jpg" alt="그림 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 4"> 그림 4 : 컷 창문 meropodite 세그먼트에서 해제되고. 해부 핀의 위치를​​ 적어 둡니다. </li><li> 표피는 부드럽게 말초 지역에서 해제되고 근육 섬유는 다리의 기본 방향으로 스트로크를하여 표피부터 버려야합니다. 표피는 떠낸 수 있습니다. </li><li> apodeme (힘줄)은 meropodite - carpopodite 관절을 절단합니다. PIN은 상처가 (그림 5) 만들 수있는 곳을 표시하기 위해 flexor의 힘줄의 내부 표면에 위치합니다. 그것이 핀셋과 flexor 근육, 꼬리 방향으로 (그림 6)에 올려서 주요 다리 신경 및 신근 근육을 노출하여 뽑아가 얽혀있는 어디에 있었 힘줄 다음 슬쩍입니다. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig5.jpg" alt="그림 5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 5"> 그림 5 : flexor 근육의 apodeme가 핀과 flexor에서 생기죠으로 강조 표시됩니다. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig6.jpg" alt="그림 6" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 6"> 그림 6 : 기본 다리 신경을 손상하지로 flexor 근육의 apodeme는 절단 신경을 써서 제거됩니다. </li><li> 주요 다리 신경은 meropodite - carpopodite 관절을 잘라 조심스럽게 신근 근육을 통해 다시 가져온 것입니다. 근육의 내측 표면은 본 연구 전반에 걸쳐 사용됩니다. 주요 다리 신경에서 신근 근육에 신경의 분리는 부드럽게 준비의 측면으로 기본 다리 신경의 말초 그루터기를 당겨 강화 수 있습니다. 신근 근육을 통해 다시 기본 다리 신경을 필링 때, 축삭의 작은 가지는 절단해야 할 수도 있습니다. 이들은 억제 모터 신경 세포에서 신근 근육에 지점이 있습니다. meropodite의 근위 끝 근처의 주요 다리 신경에서 출발 분기 큰 번들 관심의 작은 신경 다발이다. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig7.jpg" alt="그림 7" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 7"> 그림 7 : 주요 다리 신경이 절단 및 근위 방향으로 끌고 있습니다. 이 신경 다발은 메틸렌 블루 염색법 (그림 8) 또는 함께 볼 수있는 4 - 디 - 2 - ASP 형광 얼룩 (그림 9). <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig8.jpg" alt="그림 8" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 8"> 그림 8 : 메틸렌 블루있는 신근 근육 얼룩. 축삭 분기 및 신경 내에서 두 쉽게 볼 수 axons를 적어 둡니다. 빨간색 화살표 demark 신경 추적합니다. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig9.jpg" alt="그림 9" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 9"> 그림 9 : 4 - 디 - 2 - ASP와 모터 신경 자국의 axons. 토닉의 축삭 인해 증가 mitochondrial 콘텐츠를 더 밝게 볼 수 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig10a.jpg" alt="그림 10A" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 10A"> 그림 10A : 4 - 디 - 2 - ASP 물들일 phasic와 토닉 뉴런의 개인 단말기. 토닉 터미널 및 phasic 터미널의 얇은 성격에 varicosities을 확인합니다. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig10b.jpg" alt="그림 10B" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 10B"> 그림 10B - 토닉 지적 <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig10c.jpg" alt="그림 10C" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 10C"> 그림 10C - Phasic 지적 </li></ol> 3) 생리 프로필 <ol><li> 근육의 세포 잠재력을 모니터링하는 동안 토닉이나 phasic 뉴런의 흥분성의 postsynaptic 잠재력 (EPSPs)를 관찰, 신경 번들의 고립 axons 중 하나 (존스톤 그라스 자극기에 연결된 흡입 전극 (그림 11)에 의해 자극됩니다 외., 2008). 70 Hz에서에서 자극이 낮은 출력 NMJs에 대한 촉진 응답을 촉진하기 위해 토닉의 축삭에 적용하거나, 하나의 펄스가 (1 Hz에서) 높은 출력의 큰 EPSPs을 얻기 위해 phasic 축삭에 적용으로 표시 NMJs 그림 12인치 EPSPs는 PowerLab/4s 인터페이스를 통해 컴퓨터에 기록됩니다. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig11.jpg" alt="그림 11" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 11"> 그림 11 : 신경 번들 내에서 하나의 축삭을 통해 배치 자극 전극. 2 주 axons을 요약 녹색 라인을합니다. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig12.jpg" alt="그림 12" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 12"> 그림 12 : 레코딩 얻은 세포로 토닉이나 phasic 뉴런의 Postsynaptic 가능성 (EPSPs). </li><li> 시냅스 촉진과 시냅스 우울증의 성격에 조사가 낮은 높은 출력 NMJs 다양한 실험 패러다임으로 접근하실 수 있습니다. 낮은 출력 NMJs의 촉진은 약 20 자극 (그림 13)의 20, 40 및 60 Hz에서 펄스에 대한 표시, 주파수에 따라 달라집니다. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig13.jpg" alt="그림 13" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 13"> 그림 13 : 세 가지 주파수 20, 40 일반 크레이 피쉬 호수에서 60 Hz에서에서 주어진 자극 펄스의 기차에 대응 EPSPs. </li><li> 자극의 주파수로 시냅스 우울증의 비율도 높은 출력 NMJs 관련되어 있습니다. 그림 14은 30 분 이상 NMJ을 누르 자극의 연속 5 Hz에서를 보여줍니다. 높은 자극 주파수로 준비 (Bradacs 외., 1997)보다 신속하게 우울하게합니다. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig14.jpg" alt="그림 14" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 14"> 그림 14 : 우울증 유발하는 5 Hz에서 자극 동안 phasic 응답의 EPSP 진폭. </li></ol> 4) Quantal 응답 <ol><li> 크레이 피쉬 (쿠퍼와 쿠퍼, 2009)의 따개 근육에 대해 설명한 것과 유사한 절차는이 준비하는 데 사용됩니다. 직접 신경 단말기의 식별 지역 이상 quantal EPSPs은 중요한 염료 4 디 - 2 - ASP (5 μm의, 5 분 치료, 쿠퍼 동부 표준시와 시각 신경 varicosities에 매크로 패치 기록 전극의 루멘을 배치하여 기록됩니다 알, 1995;. Magrassi 외, 1987).. 자연뿐만 아니라 evoked quantal 반응은 신경 단말기 함께 기록할 수 있습니다. evoked과 자발적인 시냅스 잠재력은 매크로 패치 전극 (Dudel, 1981; Wojtowicz 외, 1991;. Mallart, 1993)로 기록됩니다. Kimax 유리 (외경 : 1.5 mm)이 가져온 10에서 20 μm의 (그림 15)에 이르기까지 내부 직경과 패치 조언을 생산하는 화재 - 연마했다. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig15.jpg" alt="그림 15" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 15"> 그림 15 : 매크로 패치 기록 전극의 루멘. 전극의 루멘은 목욕 매체로 가득 차 있습니다. 앰프는 위에서 언급한 세포 레코딩에 사용되는 것과 동일합니다. 전극과 인감 저항은 전극을 통해 시험 전류 펄스를 전달하여 결정하실 수 있습니다. 우리의 실험에서, 씰 resistances는 0.3에서 1.0 MOhm로 원거리 및 전극 저항은 0.5에서 1.0 MOhm로 원거리. 시일 저항은 녹화 내내 모니터링할 수 있습니다. </li><li> quantal 사건의 직접 계산이 낮은 자극 주파수 가능합니다. 각 evoked 회신을 원하시면 quantal 이벤트의 수를 쉽게 낮은 출력 단자 (그림 16)에 대한 결정하실 수 있습니다. 이러한 직접적인 계산은 의미 quantal 콘텐츠 (.; 쿠퍼 외, 1995 델 카스 틸로 &amp; 캐츠 1954)을 예측할 수 있습니다. evoked 높은 출력 NMJs 멀티 quantal evoked 행사 자발적인 사건의 평균 최대 진폭 또는 지역과 함께 deflections의 평균 진폭이나 지역, 생산 이후 appro하는 데 사용할 수 있습니다평균 quantal 콘텐츠 (쿠퍼 외., 1995) ximate. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig16.jpg" alt="그림 16" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 16"> 그림 16 초점 흔적이 phasic와 토닉 NMJ에서 기록했다. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig17.jpg" alt="그림 17" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 17"> 그림 17 </li></ol>

<ol>
	<li>Atwood, H. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organization+and+synaptic+physiology+of+crustacean+neuromuscular+systems.">Organization and synaptic physiology of crustacean neuromuscular systems.</a> Prog. Neurobiol. 7, 291-391 (1976).</li><li>Atwood, H. L., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+diversity+and+differentiation:+Crustacean+neuromuscular+junctions.">Synaptic diversity and differentiation: Crustacean neuromuscular junctions.</a> Invertebrate Neuroscience. 1, 291-307 (1996).</li><li>Bradacs, H., Cooper, R. L., Msghina, M., Atwood, H. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+physiology+and+morphology+of+phasic+and+tonic+motor+axons+in+a+crayfish+limb+extensor+muscle.">Differential physiology and morphology of phasic and tonic motor axons in a crayfish limb extensor muscle.</a> J. Exp. Biol. 200, 677-691 (1997).</li><li>Cooper, R. L., Stewart, B. A., Wojtowicz, J. M., Wang, S., Atwood, H. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantal+measurement+and+analysis+methods+compared+for+crayfish+and+Drosophila+neuromuscular+junctions,+and+rat+hippocampus.">Quantal measurement and analysis methods compared for crayfish and Drosophila neuromuscular junctions, and rat hippocampus.</a> J. Neurosci Methods. 61, 67-78 (1995).</li><li>Cooper, R. L., Donmezer, A., Shearer, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrinsic+differences+in+sensitivity+to+5-HT+between+high-+and+low-output+terminals+innervating+the+same+target.">Intrinsic differences in sensitivity to 5-HT between high- and low-output terminals innervating the same target.</a> Neuroscience Research. 45, 163-172 (2003).</li><li>Cooper, A. S., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Historical+view+and+demonstration+of+physiology+at+the+NMJ+at+the+crayfish+opener+muscle.">Historical view and demonstration of physiology at the NMJ at the crayfish opener muscle.</a> J Vis Exp. , (2009).</li><li>Del Castillo, J., Katz, B. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantal+components+of+the+end-plate+potential.">Quantal components of the end-plate potential.</a> J. Physiol. 124, 560-573 (1954).</li><li>Desai-Shah, M., Viele, K., Sparks, G., Nadolski, J., Hayden, B., Srinivasan, V. K., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+synaptic+function+during+short-term+facilitation+in+motor+nerve+terminals+in+the+crayfish.">Assessment of synaptic function during short-term facilitation in motor nerve terminals in the crayfish.</a> The Open Neuroscience Journal. 2, 24-35 (2008).</li><li>Desai-Shah, M., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+mechanisms+of+Ca2++regulation+that+influence+synaptic+transmission:+Comparison+between+crayfish+and+Drosophila+neuromuscular+junctions.">Different mechanisms of Ca2+ regulation that influence synaptic transmission: Comparison between crayfish and Drosophila neuromuscular junctions.</a> SYNAPSE. 63, 1100-1121 (2009).</li><li>Dudel, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+reduced+calcium+on+quantal+unit+at+the+crayfish+neuromuscular+junction.">The effect of reduced calcium on quantal unit at the crayfish neuromuscular junction.</a> Pfl gers Arch. 391, 35-40 (1981).</li><li>Griffis, B., Moffett, S., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+phenotype+remains+unaltered+after+limb+autotomy+and+unloading.">Muscle phenotype remains unaltered after limb autotomy and unloading.</a> J. Exp. Zool. 289, 10-22 (2001).</li><li>Harata, N., Pyle, J. L., Aravanis, A. M., Mozhayeva, M., Kavalai, E. T., Tsien, R. W. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limited+numbers+of+recycling+vesicles+in+small+CNS+nerve+terminals:+implications+for+neural+signaling+and+vesicular+cycling.">Limited numbers of recycling vesicles in small CNS nerve terminals: implications for neural signaling and vesicular cycling.</a> Trends in Neurosci. 24, 637-643 (2001).</li><li>Jeromin, A., Shayan, A. J., Msghina, M., Roder, J., Atwood, H. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crustacean+frequenins:+molecular+cloning+and+differential+localization+at+neuromuscular+junctions.">Crustacean frequenins: molecular cloning and differential localization at neuromuscular junctions.</a> J. Neurobiol. 41 (2), 165-175 (1999).</li><li>Johnstone, A. F. M., Kellie, S., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presynaptic+depression+in+phasic+motor+nerve+terminals+and+influence+of+5-HT+on+docked+vesicles.">Presynaptic depression in phasic motor nerve terminals and influence of 5-HT on docked vesicles.</a> The Open Neuroscience Journal. 2, 16-23 (2008).</li><li>Katz, B., Kuffler, S. W. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Excitation+of+the+nerve-muscle+system+in+Crustacea.">Excitation of the nerve-muscle system in Crustacea.</a> Proc. Roy. Soc. B. 133, 374-389 (1946).</li><li>Kennedy, D., Takeda, K. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reflex+control+of+abdominal+flexor+muscles+in+crayfish.+I.+The+twitch+system.">Reflex control of abdominal flexor muscles in crayfish. I. The twitch system.</a> J. Exp. Biol. 43, 211-227 (1965).</li><li>Kennedy, D., Takeda, K. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reflex+control+of+abdominal+flexor+muscles+in+crayfish.+II.+The+tonic+system.">Reflex control of abdominal flexor muscles in crayfish. II. The tonic system.</a> J. Exp. Biol. 43, 229-246 (1965).</li><li>King, M. J. R., Atwood, H. L., Govind, C. K. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+features+of+crayfish+phasic+and+tonic+neuromuscular+junctions.">Structural features of crayfish phasic and tonic neuromuscular junctions.</a> J. Comp. Neurol. 372, 618-626 (1996).</li><li>LaFramboise, W., Griffis, B., Bonner, P., Warren, W., Scalise, D., Guthrie, R. D., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+type+specific+myosin+isoforms+in+crustacean+muscles.">Muscle type specific myosin isoforms in crustacean muscles.</a> J. Exp. Zool. 286, 36-48 (2000).</li><li>Logsdon, S., Johnstone, A. F. M., Viele, K., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+synaptic+vesicles+pools+within+motor+nerve+terminals+during+short-term+facilitation+and+neuromodulation.">Regulation of synaptic vesicles pools within motor nerve terminals during short-term facilitation and neuromodulation.</a> J. Applied Physiol. 100, 662-671 (2006).</li><li>Lucas, K. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+analysis+of+complex+excitable+tissues+by+their+response+to+electric+currents+of+short+duration.">The analysis of complex excitable tissues by their response to electric currents of short duration.</a> J. Physiol. 35, 310-331 (1907).</li><li>Lucas, K. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+summation+of+propagated+disturbances+in+the+claw+of+Astacus+and+on+the+double+neuromuscular+system+of+the+abductor.">On summation of propagated disturbances in the claw of Astacus and on the double neuromuscular system of the abductor.</a> J. Physiol. 51, 1-35 (1917).</li><li>Magrassi, L., Purves, D., Lichtman, J. W. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+probes+that+stain+living+nerve+terminals.">Fluorescent probes that stain living nerve terminals.</a> J. Neurosci. 7, 1207-1214 (1987).</li><li>Millar, A. G., Bradacs, H., Charlton, M. P., Atwood, H. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inverse+relationship+between+release+probability+and+readily+releasable+vesicles+in+depressing+and+facilitating+synapses.">Inverse relationship between release probability and readily releasable vesicles in depressing and facilitating synapses.</a> J. Neurosci. 22, 9661-9667 (2002).</li><li>Millar, A. G., Zucker, R. S., Ellis-Davies, C. G., Charlton, M. P., Atwood, H. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+sensitivity+of+neurotransmitter+release+differs+at+phasic+and+tonic+synapses.">Calcium sensitivity of neurotransmitter release differs at phasic and tonic synapses.</a> J. Neurosci. 25, 3113-3125 (2005).</li><li>Msghina, M., Govind, C. K., Atwood, H. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+structure+and+transmitter+release+in+crustacean+phasic+and+tonic+motor+neurons.">Synaptic structure and transmitter release in crustacean phasic and tonic motor neurons.</a> J. Neurosci. 18, 1374-1382 (1998).</li><li>Msghina, M., Millar, A. G., Charlton, M. P., Govind, C. K., Atwood, H. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+entry+related+to+active+zones+and+differences+in+transmitter+release+at+phasic+and+tonic+synapses.">Calcium entry related to active zones and differences in transmitter release at phasic and tonic synapses.</a> J. Neurosci. 19, 8419-8434 (1999).</li><li>Mykles, D. L., Medler, S. A., Koenders, A., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myofibrillar+protein+isoform+expression+is+correlated+with+synaptic+efficacy+in+slow+fibres+of+the+claw+and+leg+opener+muscles+of+crayfish+and.">Myofibrillar protein isoform expression is correlated with synaptic efficacy in slow fibres of the claw and leg opener muscles of crayfish and.</a> 205 (4), 513-522 (2002).</li><li>Sparks, G., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=5-HT+offsets+homeostasis+of+synaptic+transmission+during+short-term+facilitation.">5-HT offsets homeostasis of synaptic transmission during short-term facilitation.</a> J. Applied Physiol. 96, 1681-1690 (2004).</li><li>Sohn, J., Mykles, D. L., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+anatomical,+physiological+and+biochemical+characterization+of+muscles+associated+with+the+articulating+membrane+in+the+dorsal+surface+of+the+crayfish+abdomen.">The anatomical, physiological and biochemical characterization of muscles associated with the articulating membrane in the dorsal surface of the crayfish abdomen.</a> J. Exp. Zool. 287, 353-377 (2004).</li><li>Tsien, R. W., Harata, N. C., Choi, S. W. P. y. l. e., Aravanis, A. M., AM, G. C. h. e. n. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vesicles,+quanta+and+synaptic+plasticity.+Molecular+Mechanisms+of+synaptic+function.">Vesicles, quanta and synaptic plasticity. Molecular Mechanisms of synaptic function.</a> , (2001).</li><li>Van Harreveld, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+physiological+solution+for+freshwater+crustaceans.">A physiological solution for freshwater crustaceans.</a> Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 34, 428-432 (1936).</li><li>Van Harreveld, A., Wiersma, C. A. G. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+triple+innervation+of+the+crayfish+muscle.">The triple innervation of the crayfish muscle.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 22, 667-667 (1936).</li><li>Wiersma, C. A. G., Van Harreveld, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+the+frequency+of+stimulation+on+the+slow+and+fast+contraction+in+crustacean+muscle.">The influence of the frequency of stimulation on the slow and fast contraction in crustacean muscle.</a> Physiol. Zool. 11, 75-81 (1938).</li><li>Wojtowicz, J. M., Smith, B. R., Atwood, H. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-dependent+recruitment+of+silent+synapses.">Activity-dependent recruitment of silent synapses.</a> Ann. N.Y. Acad. Sci. 627, 169-179 (1991).</li></ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

우리는 해부하다하는 방법, 기록 및 모두 높은 낮은 출력 단자가 동일한 근육 섬유를 신경을 분포시키다있는 독특한 왕새우 신경근육학 준비 신경 반응을 계량이 보고서에서 증명하고있다. 크레이 피쉬의 신경근육학 준비는 몇 흥분성의 모​​터 뉴런은 근육 신경을 분포시키다하는 데 필요한 있기 때문에, 척추 신경근육학의 분기점 이상의 많은 장점을 제공하고, 뉴런은 준비에서 준비 (앳우드, 1976)로 식별되기 때문입니다. 또한, 흥분성의 신경 전달 물질이 글루 탐 산염이고, 흥분성의 postsynaptic 잠재력 (EPSP)이 등급되며 따라서 등급 사건의 biophysical 특성은 척추 동물의 CNS 내의 뉴런의 dendrites 유사합니다. quantal 조류 그러나, postsynaptic 사이트 (쿠퍼 외., 1995)에 직접 모니터링할 수 있습니다. phasic 신경의 반복 5 Hz에서 자극은 크게 몇 분 후에 우울이 될 큰 EPSPs에 상승을 제공합니다. 우울증의이 유형은 arthropod phasic 신경근육학 분기점 (라이언과 쿠퍼, 1996)에 일반적입니다. phasic 단말기와 함께 토닉 단말기의 존재는 하나가 postsynaptic 대상이 크게 phasic 모터 신경 세포의 대공황 도중 및 이후 수정 여부를 평가할 수 있습니다. (; 데자 - 샤와 쿠퍼, 2009. 데자 - 샤 외, 2008) 또한, 낮은 출력 단자는 시냅스 촉진을 기초 메커니즘을 조사하기 좋은 준비를 제공합니다 높은 출력 단자는 시냅스 우울증과 복구 프로세스의 속도에 변조를 조사하기 위해 플레이 그라운드를 제공합니다. 접근 및 가능한 준비가 시냅스 우울증 뒤에 메커니즘을 해독에 도움이 될 것입니다. 이 크레이 피쉬 다리 신근 준비에서 세로토닌의 외인성 응용 프로그램이 시냅스 시냅스 소포 우울증과 풀의 동원에 대한 조사를 발전시키는 잠재적인 수단의 복구를 조사하는 또 다른 도구입니다. 각 근육 섬유 phasic와 토닉 모두 모터 뉴런에 의해 innervated되므로이 준비, 몇 가지 실험 이점을 제공합니다. 세로토닌은 evoked 자극과 함께 출시되는 vesicles의 수를 증가하고 우울증 동안 회복을 촉진 때문에, 그것은 세로토닌의 현재와 융합의 가능성을 향상을위한 소포의 수영장 중 일부 변조가있다는 것을 분명하기 때문에 (존스톤 외., 2008 ; 록스든 외, 2006;. 스파크 외, 2004).. 로 우울한 상태로 반대 저주파 자극, 동안 presynaptic 신경 터미널 내에있는 소포의 수영장의 역학을 설명할 것입니다 모델은 또한 준비 가능 다양한 실험 프로토콜 중 고려해야합니다. . Tsien 외, 그것은 재활용 vesicles의 나머지 endoplasmic reticulum (하라타 외, 2001을 통해 전통적인 느린 재활용 경로를 통해 이동 반면 소포 수영장의 약 30 %가, 빠른 재활용을 거쳐 다른 시스템에서 언급되었습니다. , 2001). 이러한 이중 경로 또한이 시스템에 나타날 수 있습니다. ATP는 다음 presynaptic 터미널의 우울 상태에서 부족한 도킹 및 undocking 경우가 발생되지 않을 수도 있습니다, 따라서, 더 많은 하역 vesicles은 시냅스 표면에 남아있는 것입니다. 터미널이 5 HT에 노출된 경우보다 vesicles이 빠르게 출시 이후, 그것은 더이 쉽게 releasable 수영장 (RRV) 내에 포함되는 가능합니다. 그러나, 우울 상태, 감소 ATP와 도킹 및 undocking가도 다시 시냅스 표면에서 언로 드 vesicles을 떠난 다섯 HT의 존재에 차단될 수 있습니다. 예비 데이터는 더 많은 vesicles이 연장 5 HT 노출과 자극, 다시 릴리스 능력 vesicles을 (존스톤 외에서 할 괴상한 수있는 빠르고 느린 재활용 경로에서 소포 수영장의 분포로 시간의 경과에 릴리스하는 것이 좋습니다 때문에. 2008;. 리뷰 - 데자 - 샤 외, 2008 참조; 데자 - 샤와 쿠퍼 2009) postsynaptic 전류와 모터 신경 단말기의 정의 지역에서 하나의 콴타 조치의 초점 macropatch 레코딩의 기술로, 하나는 시냅스 우울증이 출시되고 적게 vesicles의 결과 또는 때문에 기능의 변경의 발생 여부를 확인하는 질문을 할 수 postsynaptic 수용체의. 그것은 vesicles가 동등한 칼슘 노출이 준비 phasic NMJ에서 융합으로 더 민감한 것을 표시되었습니다 (밀러 외. 2005 년), 높은에 대한 가능성이 계정 phasic 터미널 (Msghina 외의 quantal 내용을 의미하는. , 1998, 1999). 또한, 칼슘 결합 단백질 frequenin의 차이 (Jeromin 외., 1999)와 ultrastructure (킹 외., 1996) 차동 시냅스 효능 (쿠퍼에 기여외., 2003). (.; 쿠퍼 외, 2003. Bradacs 외, 1997) 일부 이전 연구 신근 근육 섬유의 근육 표현형을 살펴 보았다. 혼합 섬유 종류에 왕새우의 순수 토닉 및 phasic 섬유 종류의 근육 분화의 규정을 비교, 듈리 innervated있는 다리 신근에 대한 같은 근육 표현형 발현 및 조절 (라프 램 보이즈 외, 2000 실마리를 제공할 수;. 손 동부 표준시 알, 2000;. 그리피스 외, 2001;. Mykles 외, 2002).. 많은 근본적인 질문 신경 생물학에서 해결될 수 남아이 준비 그들 중 일부를 태클에 도움이됩니다. 다리의 신근을 가지고 접근할 수도 분야에 관심이 오늘날의 몇 가지 주제는 다음과 같습니다 : 1) (우울증 Ca2의 감소로 인해 높은 출력 단자 사이 시냅스 우울증 기초 세포 메커니즘을 결정 + 항목, 유능한 부족 쉽게 releasable 소포 (RRV) 수영장, 및 / 또는 변경 postsynaptic 감수성?) 2) 빠른 복구, 3을 홍보하기 시냅스 우울증의 유도 후 적용하면 5 - HT의 기계론의 역할을 결정)은 결정 여부 quantal의 모양 자극 phasic 터미널에서 발생하는 전류는 시냅스 우울증의 사전 및 사후 시냅스 구성 요소를 해결하기 위해 우울증의 유도 기간 동안 변경되고 있습니다. 이 릴리스 사이트에서 직접 측정으로 시냅스의 성능 부하의 메커니즘을 주소 관련 정보를 얻기 위해 우리를 수 있기 때문에이 NMJ는 지속적인 연구와 미래를 수사하는 것이 중요합니다. 이 분야의 현재 연구는 5 - HT 및 소포의 수영장의 역학에 의해 시냅스 우울증 변조에 대한 정보를 제공하고 있습니다. 모든 신경 시스템에 관련된 시냅스 전달의 근본 기초와 관련이 그러한 주제.

<ol><li> 크레이 피쉬 (Procambarus clarkii). 아차 팔 라야 생물학 공급 주식 레이스 랜드, LA. 미국. </li><li> 표준 크레이 피쉬 살린 : <ul><li> 반 Harreveld의 ​​솔루션 (1936)에서 수정되었습니다. (MM)를 205 NaCl, 5.3 KCl, CaCl 2 13.5 2 시간 2 O, 2.45 MgCl 2 6H 2 O, 5 HEPES 및 산도 7.4 조정 </li></ul></li><li> 해부 도구 : 좋아요 # 5 핀셋, 고급 가위, 나이프 블레이드 홀더, # 26002-20 곤충 핀 (모든 파인 과학 도구 (미국), 주식 회사, 373 - G 빈티지 파크 드라이브, 포스터 시티, CA 94404-1139에서 얻은) </li><li> Sylgard 코팅 해부 요리, 녹음 요리 중 흡입 전극과 건설 또는 흡입 전극을 가질 흡입 전극과 꽃밥의 속이는 사람을 사용합니다. </li><li> 세포내 레코딩을위한 줌 기능과 함께 현미경을 해부. 시각 터미널에 초점 녹음 똑바로 목표 (4 x와 20X)와 복합 현미경이 사용됩니다. 하나는 HG 광원이 필요합니다. </li><li> 표준 세포 증폭기와 컴퓨터에 라인 녹음에 대해서도 A / D 보드. 전기 신호는 PowerLab/4s 인터페이스 (ADInstruments, 호주)에 온라인으로 기록됩니다. 우리는 차트 또는 범위 이름을 ADInstruments에서 표준 소프트웨어를 사용합니다. </li><li> 화학 물질 : <ul><li> . 쿠퍼 외, 1995a;. varicosities을 (Marigassi 외, 1987 시각화하는, (분자 프로브, 유진, 또는 4 디이 ASP), 우리는 중요한 형광 염료, 4 [4 조 (diethylamino) styryl] N methylpyridinium 요오드화물을 사용하여 ). 모든 생리 화학 물질은 시그마 화학 회사 (세인트 루이스, MO)에서 얻은되었습니다. </li></ul></li><li> 세포내 녹음을 위해 우리는 유리 모세관 튜브 (FHC, 브런즈윅, ME, 04011, 미국의 카탈로그 # 30-31-0)과 초점 macropatch 전극에 대해 우리가 Kimax - 51를 사용 킴블 제품 아트를 사용합니다. 100mm 번호 34502, ID 0.8 - 1.1mm, 길이. 세포내 전극은 20-30 mOhm의 저항이 있어야합니다. macropatch 전극은 좋은 팁이 전극 풀러에서 만든 후 유리의 끝을 위반하여 구성되어 있습니다. 깨진 해제 팁 직경은 20μM에 대한 깨끗한 수직 휴식이 필요합니다. 팁 다음에 대한 10μM 내경을 연마 열 수 있습니다. 전극의 샤프트는 다음이 점차 구부와 함께 약 45 도로 구부 원인 가열 요소를 통해 실행됩니다. 이것은 준비하는 또 다른 45도에 대한 생산되는 마이크로 조작하는 사람과 각도로 신경 터미널을 통해 평면 또는 수직 전극 루멘을 생산하고 있습니다. </li></ol>

크레이 레그 신근 근육에 높은 및 낮은 출력 nmjs의 생리 레코딩

Physiological Recordings of High and Low Output NMJs on the Crayfish Leg Extensor Muscle

우리는 높은 (phasic)와 낮은 (토닉) 출력 모터 뉴런은 왕새우 걸을 수있는 다리의 신근 근육 innervating위한 시냅스 응답 electrophysiological 녹음을 폭로하고 수행하는 방법을 자세히 설명합니다. 뚜렷한 차이 phasic와 토닉 신경 터미널의 생리와 형태에 존재한다. 토닉의 축삭은 매우 중요한 더 강하게 phasic 축삭보다 얼룩 걸릴 수 있도록, 많은 사람들이 더 mitochondria가 포함되어 있습니다. 토닉 터미널 varicosities 있고, phasic 터미널 사상이다. 토닉 터미널은 시냅스 효능이 적은 있지만 극적으로 촉진 반응을 보여줍니다. 반면, phasic 터미널 quantal 효능 높은 있지만 고주파 자극과 신경 우울증을 보여줍니다. quantal 출력은 시각 신경 터미널을 통해 직접 배치 초점 macropatch 전극과 측정됩니다. phasic와 토닉 두 터미널은 형태학의와 생리 차별 화를위한 그 뉴런의 고유한 차이보다는 근육에서 차등 역행 피드백, 계정을 제안 같은 근육 섬유를 신경을 분포시키다.

이 문서에서는 왕새우 걸을 수있는 다리의 신근 근육에 신경 반응의 electrophysiological 녹음을 실시 방법과 신경 단말기가 높은 및 낮은 출력 신경 단말기 총 형태학의 차이를 보여 시각 아르하는 방법을 보여줍니다.

크레이 레그 신근 근육에 높은 및 낮은 출력 NMJs의 생리 레코딩

우리는 고출력(위상성) 및 저출력(긴장성) 운동 ... 의 시냅스 반응에 대한 전기생리학적 기록을 위해 이를 노출시키고 수행하는 방법을 상세히 설명합니다.

이 실험 절차의 전반적인 목적은 가재의 신근(extensor muscle)에서 형태학적 염색과 전기생리학적 기록을 통해 위상성(phasic) 및 긴장성(tonic) 운동 말단을 노출시키고 구분하는 방법을 시연하는 것입니다. 이를 위해 먼저 중간 크기 가재의 첫 번째 또는 두 번째 보행각을 떼어내고, meite 마디의 큐티클을 절개한 뒤 굴근(flexor muscle)을 제거합니다. 이렇게 하면 신근과 신경다발이 노출됩니다.절차의 두 번째 단계는 axon과 신경 말단을 시각화하기 위해 4-ethyl amino sterile 및 methyl peritoneum iodide, 또는 4D2ASP로 표본을 염색하는 것입니다. 절차의 세 번째 단계는 tonic 및/또는 phasic 뉴런을 선택적으로 자극하는 동시에, 근섬유에서 유발된 EPSP의 세포 내 기록을 수행하는 것입니다. 절차의 마지막 단계는 국소 전극을 사용하여 말단으로부터 자발적 및 유발된 qu 이벤트를 기록하는 것입니다.최종적으로, 면역형광 현미경 검사와 전기생리학적 방법을 통해 형태적 및 생리학적으로 긴장성(tonic) 말단과 위상성(phasic) 말단을 구분하는 결과를 얻을 수 있습니다. 이 방법은 근육 피로, 시냅스 억제 및 시냅스 교차 간섭과 같은 분야의 시냅스 생리학 핵심 질문들에 대한 답을 찾는 데 도움이 될 수 있습니다. 실험은 가재의 집게발에 집히지 않도록 주의하며 가재를 잡는 것으로 시작합니다.이시아 포드(isia pod) 마디에서 다리를 몸체로부터 분리하십시오. 이시아 포드 마디를 강하게 집으면 가재가 첫 번째 보행 다리를 자절(automize)하거나 자연스럽게 떨어뜨리게 됩니다. 가재의 출혈이 멈추면 다시 보관 탱크에 넣습니다.가재를 희생시키지 않습니다. 절개 시 표본을 쉽게 돌릴 수 있도록 다리를 티슈 페이퍼 위에 놓습니다. 가재 다리의 바깥쪽(외측)이 해부 접시의 위쪽을 향하도록 돌려 놓습니다.일반적으로 아치형 부분이 위를 향하게 합니다. 메스 날 브레이커에 부착된 날카로운 면도날을 사용하여 그림에 표시된 패턴을 따라 메이트(meite) 분절 내의 큐티클을 식각합니다. 메이트-카포드(meite carpod) 관절을 따라 등쪽에서 배쪽으로 절개할 때 원위부로 너무 깊게 자르지 않도록 주의하십시오.이 절개를 통해 하단의 다리 근육 위에 있는 메이테(meite)에 창이 형성됩니다. 큐티클은 현재 상태로 둡니다. 준비된 시료를 가재 생리식염수가 담긴 해부 접시에 놓습니다.이 단계에서 미세 핀셋을 사용하여 carpod 마디의 중앙과 ischia pod 마디의 등쪽에 핀을 고정하고, 큐티클에 절개한 창을 원위단부터 약간 들어 올린 후, 면도날을 사용하여 굴근 섬유를 큐티클에서 분리하여 절단합니다. 원위단에서 근위단 방향으로 계속 절단한 다음, 마지막으로 큐티클의 창을 들어 올려 제거합니다. 신근을 노출시키려면 상부에 있는 굴근을 반드시 제거해야 합니다.핀을 사용하여 굴근의 힘줄을 굴근으로부터 밀어내어 분리합니다. 그런 다음 Mari poddy carpod 관절 부위에서 힘줄을 절단합니다. 영상에 표시된 것처럼, 절단하기 전에 힘줄을 다리 강(cavity)에서 조심스럽게 끌어내어야 하며, 힘줄의 내측에 위치한 주 다리 신경이 아닌 힘줄만 절단하도록 각별히 주의하십시오.핀셋으로 절단된 건 부위를 잡고, 굴곡근을 위쪽 방향으로 들어 올려 다리에서 분리합니다. 신전근으로 가는 신경을 노출시키기 위해, 주족신경을 중수지절 관절 부위에서 절단하고 주족신경을 신전근 너머로 조심스럽게 당겨 젖힙니다. 주족신경에서 신전근 신경을 분리할 때는 주족신경의 원위부 단단을 준비물 측면으로 부드럽게 당기면 더 효과적입니다. 주족신경을 신전근 너머로 젖혀 벗겨낼 때, 억제성 축삭의 작은 가지들을 절단해야 할 수도 있습니다.신경 다발은 메틸렌 블루 염색으로 시각화할 수 있습니다. 하지만 위 이미지의 전기생리학적 기록에는 메틸렌 블루를 사용하지 않습니다. 빨간색 화살표는 관심 대상인 신경 경로를 표시합니다.대상 신경다발은 메레포드(merepod)가 있는 근위단 근처에서 주 다리 신경으로부터 갈라져 나오는 더 큰 다발입니다. 축삭 분지와 신경 내에서 쉽게 확인되는 두 개의 축삭에 유의하십시오. 이제 신경과 근육이 노출되었으므로, 실험에 사용할 장치를 준비하십시오.세포 내 및 세포 외 기록은 표준 헤드 스테이지와 증폭기를 사용하여 수행합니다. Axon Clamp 2B 증폭기와 1XLU 헤드 스테이지 모델을 사용합니다. 세포 내 전극 하나와 세포 외 전극 두 개를 포함하여 총 세 개의 전극이 필요합니다.두 개의 세포외 전극은 신경을 자극하고 시냅스 유발 및 자발적 사건을 기록하는 데 사용됩니다. 국소 전극을 화염 연마(fire polish)하고 가열 장치 위에서 살짝 구부립니다. 국소 전극을 식염수로 채운 후, 자극 전극 홀더에 배치하고 자극기 와이어가 식염수에 닿도록 삽입합니다.이 장치는 grass P 15 자극 분리 장치에 연결되어 있으며, 이는 다시 S 88 grass 자극기에 연결되어 있습니다. 전기생리학적 기록 중에, 축삭을 시각화하여 염색하기 위해 D two ASP 생체 염료를 사용합니다. 배양액을 5 µM의 four D two as per 염료가 포함된 식염수로 교체하여 5분 동안 처리합니다. 5분 후, 접시에 가재 생리식염수를 다시 채우고, 표본을 현미경 아래에 배치한 뒤 Forex 대물렌즈를 사용합니다.10배 접안렌즈에서 자극 전극을 관심 영역으로 이동시킵니다. 다음 단계는 매크로 패치 자극 전극의 루멘을 위상성(phasic) 또는 강직성(tonic) 축삭 위에 배치하는 것입니다. 4가지 염료와 2가지로 염색된 표본의 이 사진을 보면, 강직성 축삭이 미토콘드리아 함량이 더 많아 더 밝게 보이는 것을 알 수 있습니다.형광 현미경으로 관찰했을 때, tonic 말단은 수많은 정맥류(varicosities)를 나타내며 phasic 말단은 더 가느다란 특성을 보입니다. 20배 대물렌즈를 사용하여 전극을 tonic 또는 phasic 축삭 위에 배치합니다. 여기서는 전극을 tonic 축삭 위에 배치하고 있습니다.세포 내 전극을 마이크로 매니퓰레이터에 장착하고, 세포 내 전극을 신근 세포에 삽입합니다. 이는 세포 내 흥분성 돌발후전위(EPSP)를 기록하는 데 사용됩니다. 정성적 EPSP 기록을 위해 사용합니다.두 번째 초점 전극을 마이크로 조작기에 장착합니다. 이는 기존의 세포 내 전극과 홀더를 제거하고 깨끗한 전극 홀더로 교체함으로써 수행합니다. 마이크로 조작기를 사용하여 두 번째 초점 전극의 루멘을 시냅스 정맥류(synaptic varicosity) 바로 위에 위치시킵니다.전극과 씰 저항은 테스트 전류 펄스를 전극으로 통과시켜 측정합니다. 본 실험에서 씰 저항은 0.3에서 1 MΩ 범위였으며, 전극 저항은 0.5에서 1 MΩ 범위였습니다. 씰 저항은 기록 전 과정 동안 모니터링할 수 있습니다.자극을 시작할 준비가 되면, scope 5.0 소프트웨어를 켜고 분리된 축삭에 자극을 가하기 시작합니다. 신경다발에서, 흡입 전극을 통해 강직성 축삭을 자극하고 근섬유의 EPSP를 세포 내 또는 세포 외 전극으로 기록합니다. EPSP는 power lab forest 인터페이스를 통해 컴퓨터로 기록됩니다.긴장성 축삭(tonic axon)을 자극한 후, 자극 전극을 위상성 축삭(phasic axon)으로 이동시켜 신경 자극 후 실험을 반복할 수 있습니다. 세포 내 전극은 긴장성 및 위상성 운동 뉴런 활동 모두에 반응하여 생성된 EPSP를 기록합니다. 긴장성 신경근 접합부의 시냅스 촉진은 여기에서 60 hertz 주파수로 각각 약 20회의 자극이 연속적으로 가해지는 일련의 자극 훈련에서 보여주는 바와 같이 신경 자극의 빈도에 따라 달라집니다.다중 자극 시 발생하는 촉진 현상에 주목하십시오. 이 그림은 파란색의 20 hertz, 초록색의 40 hertz, 빨간색의 60 hertz 빈도로 긴장성 신경을 자극했을 때 생성된 EPSP의 진폭을 비교한 것입니다. 자극 빈도가 높을수록 뚜렷한 촉진 현상이 나타남을 확인할 수 있습니다. 긴장성 말단은 시냅스 효율이 낮지만, 여기에서 나타난 바와 같이 극적인 촉진 반응을 보입니다.여기서는 강성(tonic) EPSP만 나타냈으며, 이후 위상성(phasic) 반응을 동일한 척도로 겹쳐서 보여줍니다. 강성 말단과 대조적으로, 위상성 말단은 정량적 효능(quantal efficacy)이 높지만 고주파 자극 시 시냅스 억제(synaptic depression)를 보입니다. 위상성 말단의 시냅스 억제 또한 여기에서 보여주는 바와 같이 자극 빈도와 관련이 있습니다.30분 동안 5 Hz로 지속적으로 자극하면 신경근 접합부의 반응이 억제됩니다. 자극 빈도가 더 높을 경우, 적절한 자극을 통해 더 빠르게 억제될 것입니다. 가재의 신경근 접합부는 스파이킹이 없는 EPSP를 생성합니다.이러한 EPSP는 이 근육들의 등급 전기 신호를 구성하는 정량적 특성을 조사하는 데 사용될 수 있습니다. 여기에서는 tonic 말단의 정량적 시냅스 반응을 보여줍니다. 모든 자극 시도가 정량적 이벤트로 이어지는 것은 아니라는 점에 유의하십시오.각 유발 반응에 대해 낮은 빈도의 자극을 주면 양자 이벤트의 직접적인 계수가 가능합니다. 강직성 말단의 경우 양자 이벤트의 수를 쉽게 결정할 수 있습니다. 양자 이벤트를 계수함으로써, 위상성 운동 뉴런으로부터의 시냅스 반응 또한 동일한 방식으로 기록할 수 있습니다.하지만, 유발 반응은 본질적으로 다중 단위(multi qual)의 특성을 가집니다. 평균 단위 함량은 편향의 평균 진폭 또는 면적을 자발적 사건의 평균 피크 진폭 또는 면적과 함께 사용하여 추정합니다. 마지막으로, 신근을 기다리는 동안 신경이 손상되지 않도록 굴근을 제거할 때 주의하십시오.이상입니다. 시청해 주셔서 감사하며, 여러분의 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.

physiological-recordings-high-low-output-nmjs-on-crayfish-leg

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

여기 Drosophila의 유충의 신경근육학 교차점에서 시냅스 전송을 측정 electrophysiological 방법을 설명합니다. Evoked 릴리스는 모터 신경의 axons을 자극하여 인공적으로 시작되며, NMJ을 통해 전송은 근육에 evoked postsynaptic 반응에 의해 측정할 수 있습니다.

Drosophila의 애벌레의 NMJ에서 시냅틱 후보를 녹음 Electrophysiological 방법

접근 시냅스에 전기 생리학의 응용 프로그램 시냅스 돌연변이를 분석에 유용 시냅스 활동의 같지는 조치를 제공합니다. 이 문서 신경근육학 분기점 (NMJ)의 노출하는 데 사용되는 절개 방법을...

해부 및 C. 엘레간스 신경근육학 융티온에서 레코딩

자유롭게 동물 행동의 신경 활동 패턴의 비침습 측정은 고속 videography와 neurophysiological 레코딩을 결합하여 얻을 수 있습니다.

자유롭게 동물 행동의 신경 회로 활성화의 기록

크레이 피쉬 다리의 따개 근육은 근육 표현형, 신경 생리학 및 소성의 역사 중요성과 실험 다목적을 위해 제공됩니다.

크레이 피쉬 오프너 근육의 NMJ에서 역사보기 및 생리학 시범

실험 근육 구조, 시냅스 반응, 이온 그라디언트 및 막 잠재력에 대한 투자율의 효과를 조사 경험을 얻기 위해 학생들을위한 쉬운 접근 방법을 보여줍니다. 또한, 감각 - CNS - 모터 근육 회로의 연결 회로에서 화합물의 효과를 테스트하는 방법을 보여 제공됩니다.

멤브레인 후보, 시냅틱 응답,의 연결 회로, Neuromodulation과 크레이를 사용하여 근육 조직학 : 학생 실험실 연습

이 실험의 주된 목적은 일차 감각 뉴런은 동물에 대한 고유 정보를 공동 움직임과 위치 정보를 전달 방법을 이해하는 것입니다. 이 보고서의 추가 목적은 해부 현미경으로 해부와 뉴런의보고에 의해 준비의 해부 존재합니다.

크레이 피쉬 복부 근육 수용체 기관 : Proprioception에서 학생 실험실 연습

우리는 직접의 근육 힘, 근육 힘, 수축성 속도론 및 절연 골격 근육의 fatigability를 측정하는 방법을...

절연 골격근의 수축성, Fatigability 및 Alternans의 예 VIVO 평가

생리와 해부학 적 기술은 갑각류 도보 사지 관절 proprioceptors과 근육의 긴장 수용체에 대한 기능과 구조를 해결하기 위해 증명된다.

게 사지에서 고유 감각과 긴장 수용체 : 학생 실험실 연습

근육 감각 신경은 proprioceptor 신호에 참여하고 또한 신진 대사 상태 및 상해 관련 이벤트를보고있다. 우리는 스트레치 활성화 근육의 심성에 대한 연구를위한 체외 근육 - 신경 준비 성인 마우스를 설명합니다.

체외 성인 마우스 근육 - 신경 준비

신경 근육 학 교차로 (NMJ)의 기능 평가 근육과 신경 사이 통신에 필수 정보를 제공할 수 있습니다. 여기는 포괄적으로 두 개의 서로 다른 근육-신경 준비, 즉 soleus 좌 골 인할지 다이어 프 램을 사용 하 여 NMJ 및 근육 기능을 평가 하는 프로토콜에 설명 합니다.

신경 근육 학 교차로 기능을 측정

제시된 것은 쥐에서 상이한 유형의 중간 신경(MN) 병변 및 수리를 생성하는 프로토콜이다. 추가적으로, 프로토콜은 몇몇 비침범성 행동 시험 및 생리적인 측정을 사용하여 신경의 기능적 회복을 평가하는 방법을 보여줍니다.

쥐에서 중간 신경 재생을 평가하는 기능적 및 생리적 방법

학습하세요 가재 신근 근육에서 고출력과 저출력 운동신경말단의 형태학적 염색 및 전기생리학적 기록 방법. 이 기법은 시냅스 생리학 및 근육 피로 연구에 활용됩니다.

크레이 레그 신근 근육에 높은 및 낮은 출력 NMJs의 생리 레코딩

더 많은 동영상 탐색