Synaptically Linked Neuron의 3D 재구성을 위한 Focused Ion Beam Scanning Electron Microscopy

0 조회수1:21 • May 30th, 2025

뉴런 축삭돌기와 수상돌기를 나타내는 쥐 피질 뇌 조직의 고정된 부분을 취합니다. 수상돌기는 축삭돌기와 함께 시냅스를 형성하는 수지상 가시로 알려진 돌출부를 가지고 있습니다.

지질에 결합하는 오스뮴-페로시아나이드로 조직을 배양한 다음, 이미징을 위한 구조적 대비를 향상시키는 또 다른 오스뮴 적용을 수행합니다.

거대분자에 결합하고 대비를 향상시키는 중금속 화합물로 얼룩이 있습니다.

수지 포매를 위해 알코올 농도를 증가시켜 탈수합니다.

티슈를 레진에 삽입하고 홀더에 장착한 다음 금으로 코팅하여 이미징 품질을 최적화합니다.

3차원 이미징을 위해 집속 이온 빔 주사 전자 현미경을 사용합니다.

이온 빔을 사용하여 수지가 내장된 조직의 얇은 층을 제거하여 이미징 표면을 노출시킵니다.

노출된 표면에 전자빔의 초점을 맞추고 후방 산란된 전자를 검출하여 이미지를 생성합니다.

연속 슬라이싱 및 이미징을 수행하고 3차원 이미지를 재구성하여 구문으로 연결된 피질 신경 네트워크를 드러냅니다.