글리세롤 또는 디메틸 설폭사이드를 이용한 시아노박테리아 균주의 장기 냉동 보존

먼저 시아노박테리아 균주를 배지에 접종하는 것으로 시작하세요. 세포가 원하는 밀도로 성장할 수 있도록 배양하세요.

세포를 원심분리로 세척한 후, 잔류 대사산물과 이물질이 포함된 상원액을 버립니다.

소량의 성장 배지를 통해 펠릿을 재현탁하여 농축된 현탁액을 만드세요.

이 현탁액을 얼음 막을 안정시키고 얼음 결정 형성을 방지하는 냉동 보호제인 글리세롤과 얼음 한 조각을 혼합하세요.

또 다른 변형에 디메틸 설폭사이드를 추가하는데, 이는 세포를 침투해 얼음 핵생성을 억제하는 냉동 보호제입니다.

샘플은 낮은 온도에서 보관하는데, 이 온도에서는 대사 활동이 멈추고 세포가 오랜 기간 생존할 수 있습니다.

소량의 냉동 생체량을 항생제 없이 한천 플레이트에 긁어 스트릭을 하여 스트레스를 줄이고 점진적인 회복을 돕습니다.

이 방법은 향후 연구를 위한 청박테리아 균주를 장기 냉동 보존 및 부활시킬 수 있게 합니다.

균주를 장기 저장하기 위해, 세포 루프를 30에서 50밀리리터 두께의 BG11 배지에 접종하여 신선한 배양을 시작하세요. 배양을 3일에서 4일간 OD₇₅₀ 으로 키우고, 이는 0.4에서 0.7에 해당합니다.

BG11을 사용해 세포를 한 번 세척한 후, 약 2밀리리터의 BG11에 펠릿을 다시 부유합니다. 농축된 세포 0.8밀리리터를 한 튜브에 추가하세요. 그 다음 80% 필터 멸균 글리세롤을 0.2밀리리터 넣으세요.

다른 튜브에 농축 세포 0.93밀리리터와 DMSO 0.07밀리리터를 추가합니다. 두 튜브 모두 영하 80도에 보관하세요. 균주를 되살리려면, 튜브를 제거하고 무딘 끝 이쑤시개로 항생제 없이 한천 플레이트에 세포를 긁어내세요. 그 다음 멸균 루프를 사용해 평소처럼 줄무늬를 내세요.