옵소니즈드 적혈구를 이용한 보체 매개 식세포작용 모델 in vitro

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미생물학

0 조회수 • 3:22 분 • January 30th, 2026

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세포 표면 항원에 결합된 IgM 항체가 결합된 IgM 광소화된 양 적혈구(SRBC)를 예로 들어보세요.

C5를 제외한 혈청 함유 보완 단백질을 추가하세요.

C1 복합체가 항체에 결합하여 활성화됩니다.

활성화된 C1은 C4와 C2를 절단하여 C3 변환효소를 형성하고, 이 변환효소는 C3를 절단하여 SRBC에 C3b를 침착시킵니다.

C5가 없으면 C3b는 C3bi로 분해됩니다.

SRBC를 대식세포 배양에 추가하세요.

C3bi는 대식세포 수용체에 결합하여 SRBC 식동세포작용을 유도합니다.

용해체에 저장성 용액을 추가하고 비내장화된 SRBC를 제거하세요.

용해 완충제를 추가해 세포를 용해시키고 SRBC 헤모글로빈을 방출합니다.

탐지 시약을 도입하세요.

요소가 존재하는 상태에서 헤모글로빈은 과산화수소에 의한 디아미노플루오렌의 산화를 촉매하여 색소 생성물을 생성합니다.

색소 제품의 흡수도를 측정하는데, 이는 삼식된 SRBC에 비례합니다.

이 분석법은 옵소니제이드 SRBC를 이용해 항체 표적이 부착된 박테리아의 식식을 모델링하여 박테리아 표적을 모방합니다.

옵소니제이션 분석법을 위해 양 적혈구 또는 SRBC를 50마이크로리터의 토끼 항-SRBC 면역글로불린 M 또는 IgM과 함께 상온에서 30분간 인큐베이팅합니다.

그 후 옵소폰화된 SRBC를 C5 결핍 인간 혈청 50마이크로리터와 30분간 섭씨 37도에서 배양하여 IgM 코팅된 SRBC에 C3b 및 C3b 억제제 보완체 조각을 고정합니다.

다음으로, 배지를 흡인하여 1 x 10에 10 x 10의 10 마이크로리터를 1 x 10의 7개 옵소나이션 SRBC에 각 웰의 각 웰에 1 곱하기 10을 4번째 밤새 배양한 쥐 대식세포를 첨가합니다.

SRBC 마우스 대식세포를 37도에서 1시간 배양한 후, 100마이크로리터의 염화암모늄-칼륨 용해 완충제로 1분간 세척하여 결합되지 않은 SRBC를 제거합니다.

분리된 SRBC를 제거한 후에는 100마이크로리터의 배지로 세척합니다. 남은 세포는 0.1% 도데실 황산나트륨으로 용해하고, 2.7-디아미노플루오렌 50마이크로리터에 3% 과산화수소와 6몰 요소로 처리합니다.

그 후 헤모글로빈 촉매에 의해 촉매된 플루오렌 블루 형성의 흡수도를 분광광도계에서 620나노미터에서 측정합니다.

620나노미터 흡광도값의 표준 곡선과 알려진 SRBC의 수를 사용하여 식당화된 옵소니시화된 SRBC의 수를 결정합니다.

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마지막 업데이트: 15 8월 2026