JoVE 실험 백과사전
미생물학
0 조회수 • 4:19 분 • February 2nd, 2026
관심 박테리아가 장내강에 정착하는 Caenorhabditis 유충이 있는 배양 플레이트를 가져가세요.
접시에는 알려진 박테리아 균주가 음식으로 들어 있습니다. 벌레를 굶겨서 박테리아를 모두 먹고 휴면 상태로 들어가게 하세요.
배지를 넣고 벌레를 튜브로 옮기세요.
원심분리기를 하고 상원액을 버립니다.
세제 용액을 넣고 표면에 붙은 박테리아를 제거하기 위해 교반한 뒤 다시 원심분리한 후 상청액을 버리세요.
세척을 반복한 후 벌레를 새 배양 배지로 옮기세요.
기어가면서 표면과 장 내강에서 느슨하게 결합된 음식 박테리아를 제거하되, 장에 안정적으로 정착하는 관심 박테리아는 유지합니다.
음식 박테리아가 완전히 제거되도록 옮기고 기어 다니는 과정을 반복하세요.
배지를 넣고 벌레를 시계 유리에 옮긴 뒤 장을 해부해 노출시킵니다.
관심 있는 박테리아가 포함된 장을 해부하여 물이 채워진 튜브에 담아 냉동하여 향후 사용을 위해 보관합니다.
벌레를 굶기게 하고 OP50-1 박테리아 수를 줄이기 위해 선충을 20도 섭씨에서 3일에서 4일간 배양하세요. 최근에 굶주린 벌레 플레이트에 5밀리리터의 M9 매체를 추가한 후, M9 매체와 웜을 멸균된 15밀리미터 원심분리관으로 옮겨 실온에서 30초간 1,000 g 원심분리관으로 돌립니다.
상청액을 제거한 후 0.05% 트리톤 X-100이 함유된 M9 10밀리리터로 5회 세척 후 20분간 Nutator 위에 세척하세요. 마지막 세척 후에는 100마이크로리터 용액에서 펠릿을 흐트러뜨리지 않고 상정액을 제거하고, M9와 벌레를 씨앗이 없는 6cm NGM 플레이트로 옮깁니다. 벌레가 기어 다니는 동안 20분간 접시를 건조시켜 큐티클과 장에서 OP50-1을 제거하는 데 도움을 줍니다.
플레이트가 마르면 M9 250마이크로리터를 추가한 후 씨앗이 없는 6cm NGM 플레이트에 웜을 옮겨 플레이트가 마르는 동안 웜이 기어갈 수 있도록 하는 과정을 반복합니다.
20분 후에는 M9 250마이크로리터를 플레이트에 추가하고, 벌레와 함께 M9 100마이크로리터를 깨끗한 시계 유리에 옮깁니다.
그 다음 26게이지 주사기로 선충을 제거하고, 벌레는 다른 26게이지 주사기로 눌러줍니다.
목이 절단되면 장, 과립 덩어리, 투명한 생식선이 자연스럽게 선충체에서 떨어져 나가고, 노출된 장의 일부를 절단한 뒤 해부된 장을 0.5밀리리터 PCR 튜브에 10마이크로리터 멸균수를 넣어 옮깁니다. 최소 다섯 마리의 다른 동물의 장을 PCR 튜브에 담아 다시 수집하는 절차를 반복하세요.
PCR 튜브를 영하 80도에서 최소 5분간 냉동 보관하세요. PCR 및 시퀀싱을 진행하기 전에 장 샘플을 해동하여 식별을 진행합니다.