쥐 박테리아 감염의 생물발광 영상

병원성 박테리아에 감염된 피부 절개가 있는 마취된 쥐를 예로 들어봅시다.

이 박테리아는 럭스ABCDE 리포터 시스템을 포함한 플라스미드를 유전적으로 조작하여 자율 생물발광을 가능하게 합니다.

쥐를 생물발광 영상 플랫폼 위에 엎드린 자세로 눕히세요.

감염 부위에서는 박테리아의 luxA 와 luxB 유전자가 루시퍼레이스 효소를 암호화하고, luxCDE 유전자는 루시퍼레이즈의 기질 역할을 하는 장쇄 지방 알데히드를 합성하는 효소를 암호화합니다.

산소가 존재하는 상황에서 루시퍼레이스는 보조인자인 환원 플라빈 단핵소탄의 산화를 촉매하고, 이 산화는 장쇄 지방 알데히드와 반응하여 청록색 빛을 생성합니다.

이 생물발광은 감염 부위에 대사 활동 중인 박테리아가 존재함을 나타냅니다.

영상 시스템을 사용하여 감염 부위를 촬영하고 생물발광 신호 강도를 정량화합니다.

감염된 상처의 생체 내 영상 촬영을 위해, 생쥐를 영상 기기로 이동시키고 이동할 때 생물안전 수준 2 격리 프로토콜을 따르고, 마취된 마우스를 영상 챔버 내에서 엎드린 자세로 눕혀야 합니다.

영상 소프트웨어에서 노출 시간, 빈 조정, 조리개 스톱, 시야각을 실험에 맞게 설정하세요.

다음으로, 상처 부위에 관심 영역을 만들고 초당 광자 플럭스(광자 플럭스)를 평균 측정합니다.

배경을 측정하려면 영상 플랫폼에서 무작위 영역에 관심 영역을 만들고 초당 배경 광자 수를 빼면 됩니다.