비복제성 지속성 결핵균의 세포층 투과성 평가

먼저 미 코박테리움 결핵의 비복제성 지속성 단계(NRP)를 포함하는 튜브부터 시작하는데, 이 단계는 외피가 두꺼워져 있습니다.

유리 구슬을 한 튜브에 넣고 흔들어 마이코박테리아의 외부 층을 기계적으로 교란시켜 투과성을 높입니다.

다음으로, 구슬로 두드린 마이코박테리아 현탁액을 새 튜브로 옮깁니다.

형광 표지된 리팜피신(항결핵 항생제)을 처리하지 않은 세포와 구슬 두드림 세포 부탁액 모두에 첨가합니다.

형광 표지된 리팜피신이 균세균에 침투하도록 진동시키며 배양하세요.

시간이 지나면서 더 많은 리팜피신이 마이코박테리아에 들어갑니다.

샘플을 원심분리하여 세포를 분리하고 결합되지 않은 리팜피신이 포함된 상원액을 제거합니다.

마이코박테리아를 새로운 배지에 다시 현탁하세요.

유세포분석을 사용해 샘플을 분석합니다. 세포가 레이저 빔을 통과할 때, 세포 내 형광-리팜피신에 비례하는 형광을 방출합니다.

서로 다른 시점에서 처리되지 않은 NRP 세포는 구슬 박힌 세포보다 형광이 낮습니다.

이는 두꺼워진 외층이 리팜피신 진입을 제한하여 숙주-병원체 상호작용 동안 박테리아의 지속을 지원한다는 것을 의미합니다.