만성 장 감염 마우스 모델에서 조직 세균 부하의 정량화

만성 장 감염을 모델링하는 항생제 내성 박테리아 균주에 감염된 안락사된 쥐부터 시작한다.

복강을 노출시켜 맹장과 비장에 접근하세요.

장내 및 전신 박테리아 정착 부위인 맹장 및 비장 조직을 채취합니다.

각 조직을 완충제와 강철 구슬이 들어있는 별도의 튜브에 넣습니다.

튜브를 빠르게 교란시켜 강철 구슬이 조직과 충돌하고 분해되어 세균이 현탁액으로 방출되도록 하여 조직을 균질화합니다.

버퍼 내 균질염을 연속적으로 희석하여 박테리아 농도를 줄이세요.

각 희석액에서 알리코트를 식염 한천에 판 분리하여 항생제를 보충하여 항생제 내성 박테리아를 선택적으로 회수합니다.

배지를 배양하여 생존 가능한 박테리아가 군락으로 성장할 수 있도록 하세요.

조직당 생존 가능한 박테리아 수를 계산하고 맹장과 비장의 박테리아 부하를 비교하기 위해 집락 수를 세세요.

먼저, 2밀리리터의 안전 잠금 둥근 바닥 마이크로튜브를 놓고, 각 튜브에 멸균 PBS 1밀리리터와 오토클레이드 스테인리스 스틸 비드를 추가하세요. 조직 채취 전에 튜브 무게를 미리 재세요.

쥐를 안락사시킨 후에는 맹장과 비장 조직을 절제하고, 개별 동물의 조직을 별도의 관에 담아 수집하세요. 각 튜브의 무게를 재어 조직 무게를 확인하세요.

믹서 밀 장치를 사용해 30헤르츠에서 15분간 조직을 균질화하세요. 그 다음 96웰 2밀리리터 메가 블록의 각 웰에 900마이크로리터의 PBS를 옮깁니다. 첫 번째 웰에 조직 균질산 100마이크로리터를 피펫팅하고 잘 섞습니다.

다음 우물에 100마이크로리터를 추가하여 연속 희석을 수행하여 10의 음의 6차 희석이 나올 때까지 수행합니다. 스트렙토마이신이 포함된 LB 한천에 3번의 희석액을 10마이크로리터 플레이트로 덮어줍니다. 그 다음, 텍스트 프로토콜에 명시된 대로 평균 콜로니 형성 단위를 세고, 조직당 클로니 형성 단위를 결정합니다.