숙주-병원체 상호작용을 연구하기 위한 장벽 기능을 가진 인간 대장층 단층 생성

콜라겐 코팅된 웰 인서트가 포함된 다중 웰 플레이트부터 시작합니다.

우물에 팽창 매체를 추가하세요.

배지 내 영양분은 세포 증식을 촉진하고, 분화 억제제는 줄기와 유사한 상태를 유지합니다.

웰 인서트에 대장 줄기세포 배양에서 유래한 상피세포 클러스터를 현탁액으로 추가하여 배양합니다.

세포는 콜라겐으로 덮인 표면에 붙어 상하 구획 모두에서 영양분을 받습니다.

이 억제제는 세포 분화를 막고 세포 군집의 증식을 촉진합니다.

위상 차이 현미경을 사용해 배양을 관찰하세요.

단일층이 형성되면, 세포 분화 억제제가 없는 신선한 배양지로 배양지를 교체합니다.

이로 인해 세포가 촘촘한 접합을 가진 성숙한 대장 상피세포로 분화하는 것이 촉진됩니다.

이 세포들은 점액을 분비하며, 숙주-병원체 상호작용 연구를 위한 생리적 장 장벽을 모방하는 기능적 단일층을 형성합니다.

각 인서트 아래 공간에 팽창 매체 600마이크로리터를 피펫으로 주입하세요. 각 인서트에 100마이크로리터의 세포 현탁액을 피펫으로 채취하세요.

플레이트를 조직 배양 인큐베이터에 다시 넣고 최소 12시간 이상 건드리지 않고 두세요. 접시를 흔들거나 급격히 기울이지 마세요. 인큐베이션 후에는 2.5배에서 10배 대물렌즈가 장착된 위상 대비 광학 현미경에 판을 올려놓습니다.

억제 치료를 중단하기 위해 억제제가 없는 배양지로 새롭게 사용하세요. 매체를 이틀에서 사흘마다 계속 새롭게 섞어 합류시키세요.