질 그룹 B 연쇄상구균 감염의 마우스 모델 구축

기회주의적 박테리아 병원체인 B 연쇄상구균 (GBS) 배양을 예로 들어보겠습니다.

배양물을 신선한 배지에 희석하고 배양하여 활발히 분열하는 박테리아를 얻습니다.

배양물을 원뿔 튜브로 옮기세요.

원심분리기로 박테리아를 먹이고, 상원액은 버리세요.

박테리아를 버퍼로 씻어주세요.

다시 원심분리기로 돌려 상원액을 제거한 뒤, 박테리아를 버퍼 안에 다시 부탁하세요.

다음으로, 감염에 더 취약한 질 상피가 준비된 호르몬 처리된 암컷 마우스를 사용하세요.

쥐를 제압해. 가는 피펫 팁을 사용해 GBS 현탁액을 질 내강에 분사합니다.

쥐를 놓고 꼬리를 들어 올린 뒤, 앞발이 단단한 표면 위를 걷게 하세요.

이로 인해 질 내강 내 접종 체류 촉진이 이루어져 GBS 순응이 가능해집니다.

질 입구에 접종 역류가 있는지 점검하세요.

부착된 박테리아가 질 상피 표면에 정착하여 감염을 형성합니다.

질 감염이 있는 마우스 모델은 추가 연구를 위해 준비가 되었습니다.

주사 당일, 관심 있는 GBS 균주를 37도 섭씨에서 5밀리리터 밤새 배양합니다.

다음 날 아침, GBS를 1에서 10 부피의 신선한 THB에 하위배양하여 37도 섭씨에서 2시간에서 3시간 배양하여 박테리아가 로그 단계 중간 단계에 도달할 때까지 합니다. 그 후 아부배양을 멸균된 15밀리리터 원뿔 튜브로 옮기고, 박테리아 세포를 원심분리합니다. 펠릿을 멸균 PBS 200마이크로리터에 재현탁하세요.

그 다음, 현탁액의 총 부피를 10마리 마우스당 1밀리리터의 PBS로 올려, 새로운 5밀리리터 배양관에서 OD₆₀₀ 0.4에 도달합니다. 배양물을 새로운 15밀리리터 튜브로 옮기고 박테리아를 다시 펠릿으로 투여하세요. 그 후 세포를 원래 부피의 10분의 1로 PBS에 재현탁합니다.

THB 한천에 연속 희석 및 도판을 위해 박테리아 50마이크로리터를 비워두어 접종의 정확한 CFU를 결정합니다. 그 다음 200마이크로리터 젤 로딩 피펫 팁에 GBS 10마이크로리터를 채취하고, 첫 번째 동물의 목덜미에 느슨한 피부를 엄지와 검지 사이에 수동으로 고정한 뒤, 꼬리를 고정합니다. 피펫 팁을 질 내강에 5밀리미터에서 10밀리미터 정도 삽입하고 접종구 전체를 분사하세요.

그 후 즉시 목덜미를 풀고 꼬리를 들어 동물의 뒷부분을 들어 올리며, 앞발로 단단한 표면을 걷습니다. 1분 후에는 질 입구를 육안으로 확인해 접종 역류가 있는지 확인하세요.