면봉 및 염색 배양을 통한 마우스 질 내강 내 그룹 B 연쇄상구균 부하 정량화

질 내에 B 군 연쇄상구 균(GBS)이 형성된 암컷 쥐를 예로 들어보겠습니다. GBS는 질의 기회주의적 박테리아 병원체입니다.

쥐를 제지하고 완충 윤리 면봉을 질 내강에 삽입하세요.

면봉을 부드럽게 돌리면서 질 벽에 약간의 압력을 가해 표면에 박힌 박테리아를 제거하세요.

면봉을 완충제에 담가 박테리아를 부유시키도록 교반하세요.

버퍼 내 현탁액을 연속적으로 희석한 후, 염색물질과 연결된 기질이 포함된 염색 차별 한천에 도판합니다.

박테리아 성장을 위해 배양하세요.

배양 과정에서 GBS는 염색 기질을 가수분해하는 특정 효소를 발현합니다.

방출된 염색원은 자발적으로 산화와 이합체를 겪어 분홍색 또는 연보라색 화합물을 형성합니다.

이로 인해 다른 박테리아 군락과 시각적으로 구별되는 분홍색 또는 연보라색 GBS 군락이 형성됩니다.

집단을 세어 GBS 부중을 정량화하고 마우스 모델에서 그 지속 가능성을 평가합니다.

면봉 채취 직전에 PBS에 미리 적셔서 쥐 한 마리를 제지하세요.

면봉을 질 내강에 10밀리미터 삽입하고, 부드럽게 시계 방향 4회, 반시계 방향 4회를 돌리면서 질 벽에 약간의 압력을 가하세요.

면봉을 1.5밀리리터 마이크로 원심분리기에 100마이크로리터 PBS를 넣고, 튜브를 소용돌이로 채취해 약 15초간 면체를 채취해 면섬유에서 박테리아를 제거하세요. 그 후 각 샘플을 PBS로 연속적으로 희석하고, 제조사 지침에 따라 조제한 차등 중위 한천 플레이트에 1에서 10에서 10,000 마이크로리터 희석액을 20마이크로리터 플레이트로 배팅하여 37도 섭씨에서 24시간 배양합니다. GBS 집단은 밝은 분홍색 또는 연보라색을 띱니다.