박테리오파지 감염을 위한 토양 박테리아 배양 준비

먼저 토양 박테리아의 분리된 군락을 포함한 배양판부터 시작하세요.

군집을 채집하여 영양 배지가 들어있는 배플링 플라스크에 접종합니다.

흔들림으로 배양을 부화하세요.

배플 플라스크는 내부 능선이 있어 흔들릴 때 난류를 증가시켜 산소 조절을 강화합니다.

이 과정은 산소 분포를 균일하게 하고 세포 응집과 침전을 방지하여 영양분이 고르게 퍼질 수 있게 합니다.

박테리아는 빠르게 증식하여 균일한 생리학적 특성을 가진 세포로 밀집된 부유물을 형성합니다.

정기적으로 큐벳에 샘플을 채취하세요.

분광광도계를 사용해 시료를 통과시킵니다. 투과된 빛의 양은 박테리아 성장을 정량화하기 위해 측정되며, 이를 광학 밀도(OD)라고 합니다.

세포가 대사적으로 매우 활발하여 효율적인 박테리오파지 감염에 가장 취약하기 때문에, 지수적기에서 초기 정지기의 일부 박테리아 배양을 선택한다.

Arthrobacter 세포는 LB 한천 플레이트에 줄무늬가 있는 군집에서 배양하여 30도 섭씨에서 2일에서 3일간 배양합니다.

멸균 루프를 사용해 군집을 골라 배플링 플라스크에 넣은 50밀리리터 LB 육수에 넣으세요. 플라스크를 30도 섭씨 225rpm의 흔들리는 인큐베이터에서 약 24시간 배양하여 파지 감염 실험을 위한 지수 또는 초기 정지 세포를 얻습니다.

박테리아 성장 상태를 면밀히 관찰하여 세포가 중후기의 정지 성장 상태에 들어가지 않도록 하세요. 파지 분리에 이상적인 OD₆₀₀ 은 0.5에서 0.7 사이입니다.