조직 생검에서 박테리아 부착을 연구하기 위한 in vitro 평행판 유동 모델

천공된 현미경 슬라이드로 시작하여 천공된 부위에 원형 조직 생검을 삽입하세요.

다음으로 고무 가스켓을 덮어주세요.

이 조립체를 뒤집어 금속 관류실 프레임의 하단 부분에 삽입하세요.

위쪽 프레임과 아래쪽 프레임을 맞추고 고정하세요.

캘리퍼를 사용해 균일한 챔버 높이를 확인하세요.

챔버는 펌프에 연결되어 있으며, 펌프는 다시 버퍼 내에 부유된 박테리아가 담긴 저장소에 연결되어 있습니다.

박테리아 현탁액을 챔버로 주입하기 시작하세요.

슬라이드의 중앙 천공은 박테리아 현탁액이 조립체에 침투할 수 있도록 합니다.

이로 인해 박테리아와 조직 표면 간의 상호작용이 촉진되어 부착과 집락화가 촉진됩니다.

이 구조는 조직에서 생체 내 박테리아 집락화를 모방하는 시험관 내 모델을 생성합니다.

프로토콜을 시작하려면, 미리 준비된 조직 생검을 직경 10밀리미터, 두께가 같은 두께의 현미경 슬라이드와 8밀리미터 원형 천공 사이에 놓고, 내부 표면이 위를 향한 고무 가스켓을 넣어 박테리아 현탁액과 접촉시킵니다.

헬더 안에 놓일 때 조직 이식편의 방향에 집중하세요. 조직의 내부 표면이 이미 혈류에 노출되어 있어 실험 배지와 접촉할 수 있도록 해야 합니다.

다음으로, 휴지가 든 홀더를 챔버 하단 금속 프레임에 박힌 가스켓 시트에 삽입하세요.

상단 금속 프레임과 해당 가스켓 시트를 미리 삽입한 휴지 홀더가 있는 챔버 바닥에 부착합니다. 그 다음 챔버 전체를 8개의 나사와 나사 너트로 장착하세요. 캘리퍼나 자를 사용해 그래프 간 챔버 높이가 항상 같도록 하세요.

다음으로 유동 챔버를 연동 펌프로 연결하세요. 그 다음 400밀리리터 유체 저장소를 튜브에 연결하세요. 연동 펌프와 박테리아 저장소를 이용해 1시간 동안 인산염 완충 식염수에서 100밀리리터의 형광 표지 콜로니 형성 단위 100밀리리터 부유물을 관류하는데, 이는 제곱센티미터당 3디네치미터의 압력과 분당 4밀리리터의 유량입니다. 동일한 수집 저장소를 사용해 100밀리리터 박테리아 현탁액을 지속적으로 재순환시킵니다.