아그로박테리움 매개 재조합 바이러스 클론을 옥수수 묘목에 전달하여 유전자 침묵을 위한 방법

우선 숙주 역할을 할 수 있는 통제된 조건 하에 자라는 옥수수 묘목부터 시작하세요.

다음으로, 식물 병원성 박테리아인 아그로박테리움 투메파시엔스를 복용하세요.

조작된 박테리아는 재조합 바이러스 게놈을 암호화하는 T-DNA 구조를 가지고 있습니다. 이 게놈에는 표적 옥수수 유전자를 침묵시키기 위해 삽입된 유전자 조각이 포함되어 있습니다.

박테리아를 식물에서 가장 낮은 결절인 결측근 바로 위에 주입하여 부탁액이 결측절을 채우도록 하여 내부 조직에 전달되도록 합니다.

주입 부위에서 박테리아는 바이러스 게놈을 가진 T-DNA를 옥수수 세포로 옮기고, 그곳에서 바이러스 RNA로 전사되어 세포질로 이동합니다.

RNA는 바이러스 단백질 생성을 복제하고 촉진하여 새로운 바이러스 입자를 형성하고, 이 입자는 전신적으로 퍼져 감염을 확립합니다.

원하는 유전자 조각을 가진 바이러스 RNA는 식물의 RNA 간섭 기구를 활성화하여 특정 옥수수 mRNA를 분해하고 표적 유전자를 침묵시킵니다.

이로 인해 감염된 식물이 성장함에 따라 표적 유전자에 의해 조절되는 표현형에 괴사성 병변 형성과 같은 눈에 띄는 변화가 나타나 성공적인 유전자 침묵이 확인된다.

4일에서 7일 된 옥수수 묘목을 사용해 아그로박테리움을 주입하세요. 주사기와 바늘을 조립하세요. 박테리아 현탁액을 대결절 위 2-3밀리미터 지점에 부드럽게 주입하여 부합결절을 채우거나 식물의 성장 단계에 따라 소용돌이에서 보이게 만듭니다.

모든 묘목을 주입하고, 각 구조물을 주입할 주사기와 바늘을 교체하세요. 조종 유전자, 병변 모방 22, 또는 잎의 피토엔 사토라제를 침묵시켜 병변을 관찰하여 표현형 감염을 확인한다.