구강 병원 연구를 위한 박테리아-곰팡이 교차 생물막 구축

구강 병원성 박테리아인 Streptococcus mutans와 기회주의 곰팡이 병원체인 Candida albicans 배양부터 시작하세요.

분리된 군집을 영양분이 풍부한 배지로 옮겨 하룻밤 배양하여 활발한 성장을 보장합니다.

세포를 펠릿으로 만드는 원심분리기. 상청액을 제거하고 세포를 멸균 식염수에 일정 농도로 재현탁합니다.

인간의 침액으로 코팅된 멀티웰 플레이트를 사용해 구강 환경을 모방합니다.

C. albicans를 추가하고 침 코팅에 부착되도록 배양하세요. 비부착 세포를 제거하기 위해 멸균 식염수로 세척하세요.

열로 비활성화된 혈청을 첨가하고 균사 발달을 자극하기 위해 배양하세요. 과잉 세럼을 씻어내세요.

S. mutans를 도입한 후 자당이 풍부한 배지를 넣어 배양하세요. S. mutans는 글루코실트랜스퍼라제를 분비하여 C. 알비칸스 만난에 결합합니다.

이 효소는 자당을 균류 표면의 글루칸으로 촉매하여 박테리아를 균사에 고정시키고 증식과 기질 형성을 촉진합니다.

이 방법은 구강 병태기전에서 미생물 시너지를 모델링하는 크로스 킹덤 바이오필름을 생성합니다.

호기성 조건에서 37도 섭씨의 혈액 한천 플레이트에 S. mutans 와 C. albicans 를 배양합니다.

그 후 각 생물체의 단일 군락을 5밀리리터의 뇌심장 주입이 담긴 시험관에 옮겨 추가로 18시간 동안 배양합니다.

다음 날, 배양물을 1,200g 속도로 5분간 원심분리한 후 상청액을 버립니다. 세포를 생리식염수에 다시 현탁시키고, C. 알비칸과 S. mutans 모두에 대해 OD₅₅₀을 0.5로 조정합니다.

그 후 S. mutans 현탁액을 1에서 10으로 희석하여 동일한 농도를 얻습니다. 멸균 침액 50마이크로리터를 광학 바닥 96웰 플레이트의 웰에 피펫으로 주입하여 현미경 검사를 합니다.

플레이트를 37도 섭씨에서 30분간 배양한 후, 100마이크로리터의 멸균 생리식염수로 플레이트를 세 번 세척한 후 웰을 비우세요.

각 웰에 100마이크로리터의 C. albicans 현탁액을 추가하고, 플레이트를 37도 섭씨에서 90분간 배양한 후 웰을 세 번 식염수로 세척합니다.

다음으로, 각 웰에 열 비활성화된 태아 소 혈청 100마이크로리터를 추가합니다. 플레이트를 2시간 동안 부양한 후 생리식염수로 세 번 세척하세요.

우물을 비우되 과도한 전단력을 피하기 위해 20마이크로리터 저류지를 남겨두세요. 각 우물에 100마이크로리터의 S. mutans 현탁액과 5% 자당이 포함된 BHI