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미생물학
0 조회수 • 2:51 분 • February 26th, 2026
커버슬립 위에 부착된 암 상피세포를 포함하는 다중 웰 플레이트부터 시작하세요.
병원성 박테리아인 시겔라 플렉스네리를 추가하세요.
박테리아가 세포와 접촉하도록 원심분리한 후 배양하세요.
특수 분비 시스템을 사용하여 시겔라는 병원성 단백질을 상피 세포에 주입합니다.
이 병원성 단백질들은 상피 신호 시스템을 조절하여 박테리아의 흡수를 촉진합니다.
세포 내에서 박테리아는 계속해서 병원성 단백질을 분비하여 세포 번역을 방해하고 번역되지 않은 mRNA를 축적합니다.
RNA 결합 및 신호 전달 단백질은 번역되지 않은 mRNA와 결합하여 막이 없는 세포질 과립인 스트레스 과립을 형성합니다.
배지를 버리고 씻어 붙지 않은 박테리아를 제거하세요.
다음으로, 겐타미신이 보충된 사전 가열된 배양지를 추가하여 표면에 부착된 박테리아를 제거합니다.
세포 구조와 스트레스 과립을 보존하기 위해 고정제를 추가하세요.
고정제는 버리고 잔여 고정제를 부드럽게 흔들어 씻어내세요.
세포들은 시 겔라 유발 스트레스 과립을 시각화하기 위한 면역형광 염색 준비가 완료되었습니다.
세척물을 웰당 500마이크로리터의 감염 배지로 교체하고, 24웰 플레이트를 원심분리하여 박테리아를 세포 위로 돌리세요.
숙주 세포 감염을 촉진하기 위해 침착된 박테리아 공동 배양 배양 인큐베이터에 30분간 옮겨 30분간 보관합니다.
배양 종료 시, 세척당 1밀리리터 1밀리리터의 신선한 37도 HeLa 배양 배양지에 세 번 헹구어 세포 내 외부 박테리아를 제거합니다.
그 후 감염된 세포에 겐타미신이 포함된 신선한 배양지 1밀리리터를 덮고 접시를 세포 배양 인큐베이터로 돌려보냅니다.
1시간 후 상원액을 완전히 흡인하고, 상온 4% 파라포름알데히드 0.5밀리리터에 30분간 고정합니다.
다음으로 고정제를 적절한 폐기통에 버리고, 1밀리리터 트리스 완충 식염수로 커버슬립을 2분간 부드럽게 흔들어 씻어냅니다.
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