JoVE 실험 백과사전
미생물학
0 조회수 • 2:43 분 • March 31st, 2026
먼저 조직에 정착하고 병변을 형성하는 조작된 그람 양성 박테리아에 감염된 쥐 신장부터 시작하세요.
모든 박테리아 세포는 붉은 형광을 발현하며, 병변 특이적 숙주 조건은 특정 세포에서 녹색 형광 단백질 발현을 가능하게 합니다.
신장에 고정제를 투여하고 어두운 곳에서 배양하여 조직 구조를 보존하고 세포막을 부분적으로 투과시키세요.
장기를 적절한 배지에 삽입하고 냉동한 후 얇은 조직 조각으로 나누세요.
접착을 위해 전하 유리 슬라이드 위에 슬라이스를 올려 부착하세요.
조직에 핵 염료를 입혀 보세요.
염료는 숙주 및 박테리아 세포를 침투하여 DNA에 결합합니다.
조직 위에 커버슬립을 덮고 특정 영상 채널을 사용해 형광 현미경으로 슬라이드를 관찰합니다.
핵 염색은 숙주와 박테리아 DNA를 구분합니다.
조직 내 모든 박테리아는 붉은 형광을 발현하며, 녹색 형광 발현은 숙주-병원체 상호작용 부위를 나타냅니다.
적절한 실험 종료점에서 신장, 심장, 간, 폐, 비장을 15밀리리터 폴리프로필렌 튜브에 10% 완충 포르말린을 넣어 실온에서 24시간에서 48시간 동안 부드러운 흔들거나 회전시키며 배양합니다.
고정 마지막에는 장기를 투명 조직 냉동 배지에 삽입하여 영하 80도에서 보관합니다. 크라이오스탯을 사용해 두께 10마이크로미터의 조직 단편을 확보하고, 개별 사전 세척된 전하 유리 슬라이드에 20분간 건조한 후 DAPI 보조제를 첨가한 하드 마운팅 매체를 적용합니다. 그 후 덮개 슬립을 붙이고 실온에서 하룻밤 경화시킨 후 샘플을 4도 섭씨의 장기 보관으로 옮깁니다.
샘플 내 병변을 식별하기 위해 레이저 스캐닝 공초점 현미경 스테이지에 슬라이드를 올려놓고, 적절한 대물렌즈를 사용해 개별 세포를 시각화하여 병변의 이미지를 획득합니다.