감염 연구를 위한 쥐 비장 내 박테리아 부하 평가

병원성 박테리아에 미리 감염된 쥐의 비장부터 시작하세요.

박테리아의 생존력을 유지하기 위해 비장을 차가운 인산염 완충 식염수에 넣으세요.

균질기를 사용해 비장을 균질화하여 기계적으로 교란시키고 세포 내 박테리아를 완충제로 방출합니다.

이로 인해 비장 내 전체 세균 부하를 반영하는 박테리아 부탁 물질이 생성됩니다.

정확한 박테리아 개체수를 측정하기 위해 용액 내 박테리아 밀도를 줄이기 위해 균질을 연속적으로 희석합니다.

다음으로, 두 부분으로 나눈 영양 한천 플레이트를 준비하세요.

동일한 박테리아 희석액을 한천 플레이트의 각 부분에 도판하여 복제를 생성합니다.

접시를 건조시킨 후 뒤집어 배양하세요. 배양 기간 동안 생존 가능한 박테리아가 증식하여 뚜렷한 집단을 형성합니다.

판의 각 구간에서 집락 수를 세어 평균 집락 형성 단위(CFU)를 계산하는데, 이는 감염 시 비장 내 총 박테리아 부하를 나타냅니다.

비장은 15밀리리터 튜브에 2밀리리터의 PBS가 들어 있습니다. 다음으로, 샘플당 일회용 균질제를 사용해 조직을 얼음 위에 담금한 후, 조직 슬러리를 연속적으로 희석합니다.

희석액을 한 TSA 플레이트의 각각 다른 면에 두 겹씩 도판하고 샘플을 잠시 건조시키세요. 그 후 플레이트를 뒤집어 37도 정적인 인큐베이터에서 하룻밤 동안 배양하며, 다음 날 아침 각 희석 배양 시 양면과 각 희석 시의 박테리아 군락을 평균합니다.