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미생물학
0 조회수 • 3:23 분 • February 26th, 2026
영양 한천에서 자란 병원성 박테리아 유래 바이오필름을 예로 들어보세요.
처리되지 않은 바이오필름은 보호막 내에 밀집된 박테리아를 특징으로 합니다.
억제제 처리 바이오필름은 희소한 기질 내에 느슨하게 연관된 세포를 특징으로 합니다.
각 바이오필름을 반으로 나누고, 한쪽은 대조군으로서 완충제에, 나머지 쪽은 에탄올에 노출시켜 항균 스트레스를 가합니다.
처리되지 않은 에탄올 노출 바이오필름에서는 밀도가 높은 매트릭스가 에탄올 확산을 줄이고 세포 침투를 제한하여 박테리아 사멸을 줄입니다.
억제제로 처리된 에탄올 노출 바이오필름에서는 희박한 기질 때문에 에탄올이 더 쉽게 침투하여 박테리아 사살이 증가합니다.
튜브를 원심분리하여 상원액을 제거하세요. 버퍼를 추가하고 초음파 처리하여 세포를 분산시키세요.
희석된 현탁액을 도판 상태로 덮고 배양하여 생존 가능한 박테리아가 성장할 수 있도록 하세요.
군체 형성 단위(CFU); 억제제 처리된 에탄올 노출 바이오필름에서 나오는 CFU가 적은 수로 인해 매트릭스의 무결성이 에탄올 내성에 필수적임을 확인시켜 줍니다.
깨끗한 면도날을 사용해 템플릿을 이용해 바이오필름 군락을 두 동등하게 잘라주세요. 깨끗한 주걱으로 군집의 절반을 조심스럽게 들어 올려 500마이크로리터 PBS가 들어 있는 1.5밀리리터 마이크로 원심분리관으로 옮깁니다.
군집의 나머지 절반을 50% 에탄올 500마이크로리터가 들어있는 마이크로 원심분리관에 옮기세요. 이 검사들은 멸균제에 대한 내성을 평가하는 데 사용됩니다. 그 후 D-류신 처리 군락의 전반부를 PBS에 넣습니다.
그다음 이 군락의 나머지 절반을 에탄올로 옮깁니다. 바이오필름 반쪽이 담긴 모든 튜브를 실온에서 10분간 배양하세요. 그리고 18,000g 속도로 5분간 원심분리합니다.
피펫을 사용해 조심스럽게 상상액을 제거합니다. PBS 300마이크로리터를 추가한 후, 마이크로팁 소닉케이터로 저음파 검사를 합니다. 최종 부피 1밀리리터를 위해 PBS를 추가로 700마이크로리터 추가하세요.
다음으로, PBS에서 10의 음의 7으로 연속 희석을 수행합니다. 희석액 중 하나를 100마이크로리터 채취하고, 1.5% 아가르 LB 플레이트를 접종하세요. 이 과정을 샘플당 두 번의 희석에 대해 반복합니다.
접종액을 유리 구슬로 바른 후 플레이트를 30도 섭씨에서 하룻밤 배양하세요. 판을 살펴보고 집단 형성 단위(CFU)를 세어보세요. CFU를 밀리리터당 계산한 후, PBS와 에탄올 처리 중 생존자 비율을 계산합니다.