시험관 내 박테리아 바이오필름 형성을 위한 챔버드 커버글라스 방법

영양분이 풍부한 배지에서 배양된 바이오필름 형성 박테리아 배양을 예로 들어보세요.

배양물을 신선한 배지에 희석하고 진동시키며 배양하여 원하는 농도에 도달할 때까지 박테리아 성장을 촉진합니다.

다음으로, 배양물을 낭포성 섬유증 환자 유래 가래 여과액으로 풍부하게 한 신선한 배지에 첨가합니다.

이 여과물들은 박테리아의 바이오필름 형성을 준비시키는 숙주 유래 인자를 포함하고 있습니다.

준비된 현탁액을 챔버드 커버글라스의 웰에 분배한 후 박테리아가 유리 표면에 부착할 수 있도록 정적으로 배양합니다.

배양 후에는 배지를 제거하고 신선한 배지로 웰을 부드럽게 헹구어 부착하지 않은 박테리아를 제거합니다.

가래가 포함된 신선한 배지를 웰에 넣고 다시 정적으로 커베이션을 배양합니다.

배양 중 숙주 유래 인자들은 박테리아 신호 전달 경로를 활성화하여 세포외 기질 생성을 촉진하고 구조화된 바이오필름 발달을 촉진합니다.

바이오필름은 이제 추가 분석 준비가 완료되었습니다.

미리 준비한 배양물 40마이크로리터를 신선한 루리아 육수 또는 LB 배지 4밀리리터에 넣고, 박테리아를 배양하여 600나노미터에서 광 밀도 0.55의 배양물을 얻습니다.

다음으로, 0.5 OD 배양액 100마이크로리터를 LB에서 준비된 10% 가래 여과액 400마이크로리터에 희석합니다. 희석액 200마이크로리터를 사용해 슬라이드 챔버의 웰에 씨앗을 뿌립니다.

박테리아가 37도 섭씨에서 흔들리지 않고 4시간 동안 붙도록 하세요.

4시간 후에는 배지를 제거하고 1x 신선한 LB로 바이오필름을 부드럽게 세척합니다. 남은 배지를 200마이크로리터의 신선한 LB로 교체합니다. 바이오필름이 37도 섭씨에서 흔들림 없이 성장하도록 합니다. 바이오필름이 현미경 검사에 적합할 때까지 세척하지 않고 12시간마다 매 매 교환하세요.