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미생물학
0 조회수 • 2:32 분 • February 26th, 2026
부착된 박테리아가 포함된 챔버드 커버글라스를 배양지에 배양하고, 낭포성 섬유증 환자 유래 가래 여과액을 보충하여 배양합니다.
가래 여과액에는 숙주 유래 성분이 포함되어 있어 박테리아 신호 전달 경로를 자극하여 기질 생성과 바이오필름 형성을 촉진합니다.
바이오필름이 형성되면, 자유 떠다니는 박테리아와 잔류 숙주 유래 성분이 포함된 배지를 버리세요.
느슨하게 붙은 박테리아를 제거하기 위해 완충제로 세척하세요.
막 투과성 및 불투과성 형광 염료가 포함된 염색 혼합물을 넣고 어두운 환경에서 배양합니다.
막 투과성 염료는 온전한 막을 가로질러 생존 가능한 박테리아와 비생존 박테리아를 모두 표지합니다. 반면, 불투과성 염료는 손상된 막에만 들어가 생존 불가능한 박테리아를 선택적으로 표지합니다.
배양 후에는 염색 용액을 제거하고 완충제로 세척하여 과도한 염료를 제거하고 배경 형광을 줄입니다.
신선한 배지를 추가하고 공초점 현미경으로 이미지를 획득합니다.
가래 여과액으로 배양된 바이오필름은 두께가 증가하여 숙주 유래 성분이 바이오필름 형성에서 중요한 역할을 강조합니다.
성장 후에는 챔버 웰에서 배지를 제거하고 각 챔버를 300마이크로리터 멸균 PBS로 두 번 부드럽게 세척합니다.
다음으로, 바이오필름 염색 혼합물을 준비하기 위해 생존 키트에 포함된 각 염료를 1마이크로리터를 필요한 용액 1밀리리터에 첨가하고 혼합합니다.
최적의 염료량과 염색 시간은 각 생물체별로 경험적으로 결정됩니다.
챔버드 커버 유리의 각 웰에 200마이크로리터의 스테인 혼합물을 추가하세요. 덮개 유리를 부화시키세요.
배양 후에는 염색 혼합물을 챔버에서 제거하고 각 웰에 300마이크로리터의 멸균 PBS를 세척합니다.
PBS를 새로운 미디어로 대체하세요. 마지막으로 공초점 현미경을 이용한 시각화를 진행하세요.