세균성 폐 감염을 확립하기 위한 마우스 구인두 흡인 모델 준비

먼저 고정된 마취된 쥐부터 시작하세요. 혀를 부드럽게 당겨 입 뒤에 위치한 목의 구두를 드러냅니다.

소량의 박테리아 현탁물을 구강인두에 주입하세요.

액체는 구인두에 남아 호흡 반사를 유발합니다.

이 반사는 구인두 흡인을 일으켜 박테리아를 기관을 통해 폐로 끌어당깁니다.

박테리아는 작은 기도와 폐포에 도달하여 증식하여 폐 조직의 상피 내막에 부착합니다.

이로 인해 상주 대식세포가 활성화되어 호중구를 모집하는 신호 분자가 방출됩니다. 이 호중구들은 사이토카인을 방출하여 염증을 유발합니다.

쥐를 케이지에 다시 넣고 관찰하세요.

쥐가 안락사된 후에는 기관과 주변 혈관을 절단하여 폐를 제거하세요.

폐를 조직 냉동 배지에 삽입하고 박테리아에 감염된 폐 조직의 추가 분석을 위해 냉동합니다.

쥐에게 예방접종을 하려면, 첫 번째 마취된 동물을 상단 앞니로 강하고 가느다란 끈에 매달아 주세요. 마우스 몸체 길이의 약 두 배 높이에 고정된 물체에 고정하세요. 멸균된 둔끝 겸자를 사용해 혀를 부드럽게 빼내고, 혀를 멸균된 장갑 낀 손가락으로 옮겨 구강인두에 접근할 수 있게 하세요. 마이크로피펫의 플런저를 첫 번째 스톱까지 눌러 50마이크로리터의 접종물을 구인두에 주입하고, 쥐가 반사 흡인으로 박테리아 현탁물을 흡입할 때까지 진행합니다.

접종체가 구인두에 삽입되면 쥐는 몇 초간 호흡을 멈추고, 결국 반사적 흡인해 박테리아 부유액액이 흡입되는데, 이는 액체가 폐로 들어올 때 들리는 독특한 바스락거리는 소리로 나타납니다.

그 후 동물을 다시 우리에 넣고, 모니터링을 통해 완전한 누워 있을 때까지 반복하세요. 적절한 실험 종점에서 기관, 폐동맥, 폐정맥을 절개하여 폐 조직을 제거할 수 있게 합니다.

질병 진행의 조직병리학적 분석을 위해 폐를 표본 몰드에 넣고, 최적의 절단 온도 화합물로 몰드를 채워 조직이 완전히 잠길 때까지 합니다. 그 후 샘플을 영하 80도에서 냉동하여 절단과 분석을 마친다.