광감감제 전구체를 이용한 박테리아 바이오필름의 광 활성화 처리

병원성 박테리아의 바이오필름을 담은 마이크로플레이트 웰부터 시작하여 네 개의 실험 그룹으로 나누어 진행합니다.

배지를 부드럽게 흡인하고 완충제로 세척하여 비부착 세포를 제거합니다.

광감광 전구체가 포함된 버퍼를 두 그룹에 추가하고, 나머지 두 그룹은 버퍼만 받습니다.

모든 그룹을 어둠 속에서 배양하여 전구체가 바이오필름을 통해 확산되어 박테리아 세포에 들어가 광감감제로 대사되어 세포질과 세포막에 축적되도록 하세요.

배양 후에는 전구체 처리된 그룹과 완충 전용 그룹을 한 그룹에 빛 조사에 노출시킵니다.

전구체 처리된 그룹에서는 빛이 광감성을 여기시키고, 광감성제가 분자 산소로 에너지를 전달하여 활성 산소종(ROS)을 생성합니다.

ROS는 막을 파괴하고 단백질과 DNA를 분해하여 박테리아 세포 사멸을 초래합니다.

나머지 세 가지 조건은 전구체나 빛이 없어 바이오필름에 영향을 미치지 않아 ROS를 생성하지 못합니다.

96웰 플레이트에서 바이오필름을 생성하려면, 먼저 300도 해동 Staphylococcus aureus USA를 300도 바이오필름에 접종하여 임상 균주 배양을 37도 인큐베이터에 37도 인큐베이터에 5밀리리터의 트립톤 대두육수(TSB) 매개체에 넣어 임상 균주 배양을 형성합니다. 배양물이 고정 단계에 도달하면 박테리아 세포를 원심분리하여 펠릿과 PBS를 밀리리터당 2 곱하기 10의 9번째 콜로니 단위로 재현탁합니다. 이 박테리아 현탁액을 1:200 비율로 희석하고, TSB 배지를 0.5% 포도당으로 보조한 뒤, 실험군당 200마이크로리터의 박테리아 세포를 폴리스티렌 세포 배양 처리된 96 웰 마이크로플레이트에서 37도 마이크로플레이트에서 37도 섭씨 상태로 24시간 배양하여 실험군당 3개의 웰에 씨앗을 종착시킨다. 떨지 않고.

다음 날에는 바이오필름을 건드리지 않고 PBS로 웰을 세 번 부드럽게 세척하세요. 다음으로, 적절한 실험용 웰에 신선하게 준비된 ALA 200마이크로리터를 추가하고, 플레이트를 25도 섭씨에서 빛을 차단한 상태로 1시간 동안 보관합니다. 그 후 100밀리와트/제곱센티미터 빛의 강도로 발광 다이오드를 1시간 동안 판에 방사선합니다.