감염된 마우스 모델의 대변 샘플에서 클 로스트리듐 디피실 정량화

0 조회수3:08 • March 31st, 2026

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혐기성 포자 형성 박테리아 병원체인 클로스트리디움 디피실 이 위장관에 점식한 쥐부터 시작한다.

쥐를 제지하고 자연스럽게 멸균된 사전에 무게가 측정된 관에 배변하도록 하세요.

빈 튜브 무게를 전체 무게에서 빼어 대변 샘플의 순중량을 결정하여 적절한 희석액을 준비합니다.

산소에 민감한 박테리아의 생존 가능성을 보존하기 위해 샘플을 혐기성 환경으로 옮기세요.

샘플에 완충제를 추가하고 기계적으로 교란시켜 내용물을 현탁 상태로 방출합니다.

더 큰 이물질이 침전하도록 배양하여 박테리아 세포와 포자를 상청액에 머물게 합니다.

버퍼 내 상원액을 연속적으로 희석하세요.

희석된 배지를 선택적 배지에 배양하고 혐기성 조건에서 배양합니다.

배지는 포자 발아와 클 로스트리듐 디피실 의 선택적 성장을 촉진하는 한편, 경쟁 박테리아를 억제하여 뚜렷한 군집을 형성합니다.

집락 수를 세어 대변 내 클로스트리듐 디피실 부하를 정량화하고 위장관 집락화를 평가하세요.

쥐의 배설물 샘플을 채취해 평가를 위해 먼저 목과 등 쪽의 느슨한 피부로 가볍지만 단단히 쥐를 묶어 동물이 고통받지 않도록 합니다.

새끼손가락을 사용해 동물의 꼬리를 부드럽게 들어 항문을 드러냅니다. 무게가 알려진 멸균 마이크로 원심분리기를 동물의 항문 바로 아래에 대고, 튜브가 쥐에 직접 닿지 않도록 하세요. 동물이 배설을 하면 배설물을 튜브에 담아 모으세요.

필요한 샘플을 모두 채취할 때까지 튜브를 실온에 보관하세요. 대변이 담긴 관을 분석 저울로 재고 소수점 4자리까지 무게를 기록하세요. 관 무게를 빼서 대변 펠릿의 무게를 계산하세요.

다음으로, 내용물의 1에서 10 희석 비율을 계산하여 1x PBS로 재현탁합니다. 피펫 끝을 사용해 대변을 부드럽게 섞어 용액으로 만듭니다. 샘플을 실온에서 30분간 배양하여 내용물이 가라앉도록 하세요.

용액을 무산소 상태로 유지하며, 각 샘플마다 1x PBS로 연속 희석을 합니다. 각 연속 희석액을 100마이크로리터씩 TCCFA 플레이트에 옮깁니다. 멸균된 L자형 스프레더를 사용해 매체를 플레이트에 고르게 바르세요.

판을 37도 섭씨의 혐기성 조건에서 24시간 배양하세요. 마지막으로, C. difficile 군락을 열거하고 대변 함량당 집락 형성 단위를 계산합니다.

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마지막 업데이트: 1 8월 2026