성장 조절 단백질 영상을 위한 시아노박테리아 색소 광표백

고정, 고정, 고정, 투과된 남세균 세포를 커버슬립에 부착하는 것으로 시작한다.

이 시아노박테리아 세포들은 저농도 성장 조절 단백질을 발현합니다.

고해상도 형광 이미징 중, 남세균 세포 내 자연광 감응 색소가 배경 형광을 방출합니다.

이로 인해 저농도 단백질을 시각화할 때 이미지 품질이 저하됩니다.

이 배경 형광을 최소화하기 위해 남세균 세포가 담긴 커버슬립을 염색 접시에 넣으세요.

혈청 단백질이 포함된 차단 완충제를 추가하여 하위 처리 과정에서 비특이적 항체 결합을 방지하고, 세포 투과성을 유지하기 위한 세제를 추가합니다.

스테인팅 접시를 얼음 위에 올려놓고 세포를 강한 제논 빛에 노출시키세요.

고강도 빛은 광표백을 시작하여 빛에 민감한 색소를 분해하지만, 저함량의 성장 조절 단백질은 영향을 받지 않습니다.

추운 환경은 열로 인한 손상을 최소화하고 세포의 완전성을 유지합니다.

이 과정은 고해상도 형광 현미경 중 면역염색을 통해 저분량의 성장 조절 단백질을 명확히 시각화할 수 있게 합니다.

세척한 커버 슬립을 스테인팅 접시에 옮기세요.

커버슬립 상단에 블로킹 버퍼 50마이크로리터를 추가하세요. 스테인팅 접시 전체를 얼음 위에 올려놓고, 제논 광원 아래에 옮겨 최소 60분간 광표백하세요. 포토블리치와 블로킹 후에는 종이 타월 가장자리를 사용해 블로킹 버퍼를 제거하세요.