$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
먼저 감수성 박테리아를 제거하는 항생제 농도를 점차 고른 박테리아 샘플부터 시작하세요.
해당 튜브에 중수소 산화물과 같은 항생제 농도가 포함된 배지를 추가하세요.
튜브를 흔들리는 조건에서 부양하세요.
중수소 산화물은 박테리아 세포에 들어가 새로 합성된 생체분자에 통합되어 탄소-중수소 결합을 형성합니다.
박테리아를 돌려서 상원액을 버리고 세척하세요.
박테리아 구조를 보존하기 위해 고정제를 추가하세요.
물을 넣고 원심분리한 후 상원액을 제거하세요.
박테리아를 다시 현탁시키고, 현탁액을 폴리-L-라이신 코팅 커버글라스 위에 옮긴 뒤 밀봉하세요.
샘플을 사전 보정된 자극 라만 산란 현미경 또는 SRS 현미경 스테이지에 올려놓습니다. 물을 넣고 대지수를 낮추세요.
탄소-중수소 진동 주파수를 평가하기 위해 여러 필드의 이미지를 획득합니다.
항생제 농도가 높을수록 탄소-중수소 신호가 감소하여 박테리아의 생존 능력이 감소함을 나타냅니다.
이를 통해 SRS 신호 강도와 박테리아 생존력을 연관시켜 항생제 감수성을 신속히 평가할 수 있습니다.
1시간 배양 후, 100% 중수소 함유 MHB 배지로 연속 희석한 700마이크로리터의 항생제를 300마이크로리터 전처리 박테리아에 같은 항생제 농도의 300마이크로리터를 첨가합니다. 피펫을 여러 번 위아래로 움직이며 혼합물을 균질화합니다. 항생제 무첨가 100% 중수소 함유 MHB 배지 700마이크로리터와 항생제 무첨가 박테리아 300마이크로리터를 양성 대조군으로 추가합니다.
음성 대조군으로 항생제 무첨가 0% 중수소 함유 MHB 배지 700마이크로리터와 항생제 무첨가 박테리아 300마이크로리터를 추가하세요. 모든 마이크로튜브를 37도 섭씨, 분당 200회전으로 30분 동안 배양하세요. 배양 후, 항생제 1밀리리터와 중수소 처리된 박테리아 샘플을 6,200g g에서 4도 섭씨에서 5분 간 원심분리합니다. 그 후 정수된 물로 펠릿을 두 번 세척하세요. 샘플을 10% 부피별 포르말린 용액에 고정하여 4도 섭씨에서 보관합니다.
샘플 준비를 위해 정제된 물로 고정된 박테리아 용액 1밀리리터를 세척한 후, 세척된 박테리아 용액을 6,200g 배 높이에서 4 도 섭씨에서 5분간 원심분리합니다.
상원액을 제거하고 박테리아 용액을 약 20마이크로리터 정도로 살균한 물로 농축합니다. 박테리아 용액을 폴리-L-라이신 코팅된 커버 유리 위에 담고, 다른 커버 유리와 샌드위치로 섞어 샘플을 밀봉합니다. 박테리아 샘플을 샘플 단계에 올려놓고 60배 물 침수 목표 아래에 두세요. 박테리아 샘플의 SRS 영상 촬영을 시작하세요. 각 샘플마다 최소 세 개의 시야각을 촬영하세요.