JoVE 실험 백과사전
미생물학
0 조회수 • 2:35 분 • March 31st, 2026
고정된 혈구가 들어 있는 슬라이드를 공초점 현미경 스테이지에 올려놓습니다.
이 혈구들은 Drosophila melanogaster 유충에서 얻었으며, 박테리아 병원체에 감염된 상태입니다.
혈구는 녹색 형광 단백질로 표지되고, 핵은 파란색 염료로 염색되며, 박테리아는 시각화를 위해 붉은 형광 단백질을 발현합니다.
현미경을 세 가지 형광체 모두를 검출하도록 구성하여 세포 구획과 병원체를 동시에 추적할 수 있습니다.
고해상도 대물렌즈를 사용하여 목표 혈구에 초점을 맞추어 세포 내 세부 정보를 포착합니다.
적절한 시료 노출을 달성하고 신호 선명도를 최적화하기 위해 레이저 출력과 검출기 이득을 조정하세요.
노출 수준이 적절한지 확인하기 위해 여러 Z-평면을 스캔하세요.
상단과 하단 Z 위치를 설정하여 전체 혈구를 촬영하세요.
스캐닝 줌을 사용해 관심 있는 혈구를 분리하고 고해상도 3D 이미지를 획득하세요.
이 방법은 혈구 내 병원체 위치를 시각화할 수 있게 합니다.
공초점 현미경을 DAPI, EGFP, mCherry의 3색 이미징을 위해 구성하세요.
시료를 현미경에 올려놓고 63X/1.4 수치 구경 대물렌즈를 사용해 시료에 초점을 맞추세요. 영상 촬영을 위해 원하는 혈구를 시야에서 찾아주세요. 그 후 레이저 출력과 검출기 이득을 조정하여 시료의 적절한 노출을 달성합니다.
여러 Z면을 점검하여 전체 샘플 두께에 적합한 노출 수준인지 확인하세요. 다음으로, 전체 혈구의 Z축에서 상단과 하단 위치를 찾습니다. 이 위치들을 Z 구획의 시작과 끝 위치로 설정하세요.
스캐닝 줌을 사용해 혈구가 있는 부위를 촬영하세요. 이미지 직렬을 적절한 해상도, 예를 들어 X-Y 평면의 1024 x 1024 픽셀, Z 차원의 0.3 마이크로미터 간격으로 수집합니다.