식물 추출 병원체에서 유전자 발현의 단세포 분석

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미생물학

0 조회수 • 2:36 분 • March 31st, 2026

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감염된 식물에서 분리된 병원성 박테리아의 현탁액을 가져가자.

박테리아 게놈에는 전사 융합이 포함되어 있는데, 이 과정에서 병원성 조절 유전자의 프로모터가 하류 비프로모터 형광 단백질 유전자의 발현을 함께 유도합니다.

식물 감염 과정에서 프로모터 활성화가 조절 단백질과 형광 단백질의 생성을 촉진합니다.

조절 단백질은 병원성 유전자를 활성화시키고, 형광은 병원성 활성화를 측정 가능한 지표로 제공합니다.

세포를 원심분리하고 상청액을 버린 후 다시 현탁하여 농축된 현탁액을 얻습니다.

커버 슬립에 한 방울을 떨어뜨리고 아가로스 패드를 덧대어 세포를 퍼뜨리고 움직이지 못하게 하세요.

밝은 영역 이미지를 촬영해 모든 박테리아 세포를 식별하고, 형광 이미지를 통해 단일 세포 형광을 감지합니다.

두 도구를 합치면 형광 강도 차이를 시각화하면, 병원성 유전자 발현이 높거나 낮거나 없는 하위 집단을 확인할 수 있습니다.

이러한 표현형 변이는 식물 정착 과정에서 박테리아의 생존을 향상시키는 적응 전략을 반영합니다.

단일 세포 분석을 위해 증류수에 1.5% 아가로스 용액을 준비합니다. 녹으면 나란히 놓은 두 개의 현미경 슬라이드 사이 공간을 채울 만큼 충분한 부피를 추가하고, 그 위에 또 다른 슬라이드를 올려놓습니다. 15분간 운전하게 한 뒤 위에 놓인 슬라이드를 조심스럽게 제거하세요.

칼날을 사용해 아가로스 패드를 5밀리미터 x 5밀리미터 크기로 잘라내서 사용 전에 사용하세요. 병렬로, 원심분리기 1밀리리터의 세포 추출 박테리아. 피펫으로 상청액을 조심스럽게 제거하고 펠릿을 20마이크로리터의 물에 다시 부유시켜 세포를 농축하세요.

농축된 세포 2마이크로리터 한 방울을 0.17밀리미터 커버 슬립에 놓고, 그 방울을 아가로스 패드로 덮습니다. 특정 레이저를 사용해 공초점 현미경으로 박테리아 준비 과정을 시각화하여 녹색 형광 박테리아를 식별합니다. 밝은 영역을 이용해 모든 박테리아를 식별하고 두 영역을 합치세요.

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마지막 업데이트: 15 8월 2026