Name: Qiagen Miniprep 키트를 사용하여 세균의 플라스미드 식민지에서 DNA를 정화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-29T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 24 s
Description: 배우세요 Qiagen 미니프렙 키트를 사용하여 세균 플라스미드에서 DNA를 정화하는 방법을. 이 기술은 유도돌연변이 실험에서 돌연변이 확인을 위한 시퀀싱 전 단계로 활용됩니다.

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qiagen miniprep 키트를 사용하여 세균의 플라스미드 식민지에서 dna를 정화

Purifying Plasmid DNA from Bacterial Colonies Using the Qiagen Miniprep Kit

E. 대장균에서 플라스미드 DNA 정제는 분자 클로닝을위한 핵심 기술입니다. 세균성 문화 미만 5 ML에서 소규모 정화 (miniprep)는 더 효소 반응 (중합 효소의 연쇄 반응 및 제한 효소 분해)에 의해 다음 클론 확인 또는 DNA의 격리를위한 빠른 방법입니다. 여기, 우리는 분자 생물학 기술에 대한 일반적인 초보자에게 매우 효율적인 기술을 도입을 목표로 QIAGEN의 QIAprep 8 Miniprep 키트를 통해 miniprep의 일반적인 절차를 영상 기록했다. 전체 절차는 높은 소금의 면전에서 이산화 규소에 DNA의 흡착 다음 E. 대장균 세포의 알칼리성 용해에 따라 달라집니다. 1) QIAprep 막, 3) 세정과 플라스미드 DNA의 용출에 DNA의 흡착 세균성 lysate, 2)의 준비 및 삭제 : 그것은 세 단계로 구성되어 있습니다. 모든 단계 페놀, 클로로포름, CsCl, ethidium의 브로마이드의 사용없이 알코올 석출하지 않고 수행됩니다. 그것은 일반적으로 모든 절차를 완료 미만 2 시간 정도 소요됩니다.

Qiagen Miniprep 키트를 사용하여 세균의 플라스미드 식민지에서 DNA를 정화

E. coli로부터의 플라스미드 DNA 정제는 분자 클로닝의 핵심 기술입니다. 5ml 미만의 박테리아 배양액으로부터 수행하는 소규모 정제(miniprep)는...

저는 캘리포니아 대학교 어바인 캠퍼스 생리학 및 생물물리학과 Mike Halen 교수 연구실 소속입니다. 오늘은 박테리아에서 DNA를 정제하기 위해 collagen mini fabricate를 사용하는 방법을 보여드리겠습니다. 이 과정은 부위 특이적 돌연변이 유발 실험의 한 단계로 수행됩니다.플라스미드를 얻은 후, 선택한 클론에 원하는 돌연변이가 포함되어 있는지 확인하기 위해 삽입물을 시퀀싱하겠습니다. 미니 프렙(mini preparation)을 수행하기 전에, 어제 진행한 내용을 간단히 소개하겠습니다. 박테리아를 배양하기 위해, 먼저 개별 튜브에 5 mL의 LB 배지를 접종해야 합니다.보시는 바와 같이, 튜브에 박테리아를 넣기 전의 배지는 투명합니다. 그런 다음 P1000 파이펫을 사용하여 agar 플레이트에서 단일 콜로니를 접종하며, 오염을 방지하기 위해 매번 팁을 교체합니다. 이후 튜브를 쉐이커에 넣고 300 RPM으로 최소 8시간 동안 배양하며, 보통은 하룻밤 동안 배양합니다.콜라겐 미니 조제 키트에는 세 가지 중요한 완충액이 포함되어 있습니다. 각각 P one, P two, N three입니다. P one은 RNA가 포함되어 있어 보통 4°C에서 보관하며, P two는 상온에 둡니다. N three의 경우, 실험 시작 8시간 전에 미리 준비합니다.보시는 바와 같이, 박테리아가 내부에서 증식하고 있기 때문에 현재 배지가 탁해진 상태입니다. 배지 5 µL를 다른 플레이트에 도말하겠습니다. 이렇게 클론을 확인해 두면, 나중에 다시 박테리아로 바로 돌아갈 수 있어 별도의 형질전환을 다시 수행할 필요가 없습니다. 배지를 원심분리하고 나면 튜브 바닥에 박테리아 펠렛이 잘 형성된 것을 볼 수 있으며, 환경 오염을 방지하기 위해 상층액은 표백제에 버리고 펠렛만 남겨둡니다.이제 버퍼 P1을 박테리아 펠릿에 첨가합니다. P1은 박테리아를 재현탁하기 위한 재현탁 버퍼입니다. 이제 파이펫으로 용액을 위아래로 섞어 박테리아와 버퍼를 혼합하겠습니다.이 단계에서는 용액에 박테리아 덩어리가 보이지 않아야 합니다. 이제 재현탁된 박테리아를 새로운 Eppendorf 튜브로 옮기겠습니다. 저는 항상 튜브에 라벨을 붙여 혼동을 방지하고 어떤 용액이 어떤 클론에서 나왔는지 알 수 있도록 합니다.이제 각 튜브에 buffer P 2를 첨가합니다. buffer P 2는 박테리아를 용해하기 위한 용해 버퍼(lysis buffer)입니다. buff

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이 프로토콜은 효율적으로 병렬에서 설명 및 플라스미드 DNA의 정화를위한 비용 효율적인...

Prokaryotic 문화 플라스미드 DNA의 유선형 정화

우리는 기본 T 세포를 사용하여 염색질의 immunoprecipitation위한 강력한 방법을 설명합니다. 이 방법은 표준 방법에 설립 있지만, 세포의 제한된 수량에 대한 효율성을 개선 조건과 시약의 특정 집합을 사용합니다. 중요한 데이터 분석 단계에 대한 자세한 설명이 표시됩니다.

바이오 매스의 제한 금액을 사용하여 효율적으로 염색질 immunoprecipitation의

환경 가금류 생산 샘플에 사용하기 위한 새로운 반자동 하이브리드 DNA 추출 방법이 개발되었으며 전체 박테리아 군집의 정량적 및 정성적 추정치 측면에서 일반적인 기계적 및 효소 추출 방법에 비해 개선되었음을 입증했습니다.

가금류 생산 샘플에서 세균 공동체의 정성 및 정량 평가를위한 하이브리드 DNA 추출 방법

선형 공유 결합(LCC) DNA 미니 벡터(DNA ministring)는 높은 transfection 효율을 제공하는 비바이러스 유전자 전달 벡터이며 모든 DNA 전달 응용 분야와 관련이 있습니다. 생산 시스템은 간단하고 빠르며 in vivo에서 확장 가능합니다. 다음 프로토콜은 DNA 미니스트링 생산을 위한 시각적 단계별 지침을 제공합니다.

이중 가닥 DNA Ministrings의 생산

이 논문은 염색체 외 원형 DNA(eccDNA)를 정제하기 위한 Circle-Seq라는 민감한 방법을 제시합니다. 이 방법에는 컬럼 정제, 남아 있는 선형 염색체 DNA 제거, 롤링 서클 증폭 및 고처리량 염기서열분석이 포함됩니다. Circle-Seq는 진핵생물 eccDNA의 게놈 규모 스크리닝 및 게놈 불안정성 및 복제 수 변이 연구에 적용할 수 있습니다.

진핵 세포에서 염색체 외 원형 DNA의 게놈 차원의 정화

여기, 제한 효소 사이트를 동의어 DNA 시퀀스에 삽입 및 기능 플라스미드 복구를 기반으로하는 프로토콜 인 플라스미드 회수 및 제한 효소 사이트 삽입 (CAPRRESI)에 의한 키메라 어셈블리를 제시합니다. 이 프로토콜은 단백질 코딩 유전자 융합을위한 빠르고 저렴한 방법입니다.

카스트레 : 플라스미드 회수 및 제한 효소 부위 삽입에 의한 키메라 조립

이 프로토콜은 음향 액적 배출 기술을 사용하여 384 웰 플레이트에서 포유류 세포의 고처리량 플라스미드 형질 감염을 설명합니다. 시간이 많이 소요되고 오류가 발생하기 쉬운 DNA 디스펜싱과 트랜스펙션 시약 디스펜싱은 나노 에스터디터 장치에 의해 소프트웨어 구동 및 수행됩니다. 세포는 다음 이 미리 채워진 우물에서 파종됩니다.

음향 나노 디스펜싱 기술을 사용한 고처리량 DNA 플라스미드 멀티플렉싱 및 트랜스펙션

여기에서는 리 모실락토바실러스 루테리 DSM20016 작업을 위한 프로토콜, 성장, 플라스미드 형질전환, 콜로니 PCR, 형광 리포터 단백질 측정, 제한된 플라스미드 미니 프렙, 일반적인 문제 및 문제 해결을 자세히 설명합니다. 이러한 프로토콜을 통해 DSM20016에서 리포터 단백질을 측정하거나 리포터가 관여하지 않는 경우 콜로니 PCR을 통해 확인할 수 있습니다.

Limosilactobacillus reuteri DSM20016의 전기천공 및 변형 확인 방법

재조합 아데노 관련 바이러스(rAAV)는 임상 및 전임상 유전자 전달에 널리 사용됩니다. rAAV의 과소평가된 용도는 정제 없이 배양된 세포의 강력한 transduction입니다. rAAV를 처음 접하는 연구자를 위해 transgene cassette 클로닝, 미정제 벡터 생산 및 세포 배양 transduction을 위한 프로토콜을 제공합니다.

Unpurified Recombinant Adeno-associated Viral Vectors를 사용한 배양 세포에서의 전이유전자 발현

본 연구는 염색체 서열이 이미 알려져 있거나 관심 없는 플라스미드의 나노포어 시퀀싱 워크플로우를 설명합니다. 초기 플라스미드 DNA 풍부화 단계는 최적의 플라스미드 서열 깊이를 보장하고 플로우 셀당 시퀀싱 가능한 샘플 수를 극대화합니다.

나노포어 시퀀싱 기반 워크플로우를 이용한 롱리드 플라스미드 시퀀싱 및 조립

배우세요 Qiagen 미니프렙 키트를 사용하여 세균 플라스미드에서 DNA를 정화하는 방법을. 이 기술은 유도돌연변이 실험에서 돌연변이 확인을 위한 시퀀싱 전 단계로 활용됩니다.

Qiagen Miniprep 키트를 사용하여 세균의 플라스미드 식민지에서 DNA를 정화

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