Name: 해부 그리고 스테 이닝 Drosophila 애벌레 난소 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-13T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 40 s
Description: 학습하세요 Drosophila 애벌레 난소의 해부 및 면역형광 염색법을 통해 생식줄기세포와 그 소환경 형성을 연구하는 방법을. 공초점 현미경으로 세포 특이적 염색을 시각화합니다.

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IM은 마리 퀴리 다시 통합 교부금에 의해 지원됩니다. 이 작품은 이스라엘 과학 기금 부여 번호에 의해 지원되었다. 1146년부터 1108년까지, 헬렌과 줄기 세포 과학의 웨이즈만 연구소에서 연구 및 레어 자선 재단 마틴 킴멀 연구소.

1. 부설 에그 <ol><li> 해부 - 5 일 : 성관계 여성은 효모와 보충 신선한 음식 2~4시간에 대한 알을 낳을 수 있습니다. 에 동기와 잘 개발 애벌레를, 그것이 중요하다 콩나물도하지 양식 (약 30 알 / 25mm 유리병). 일반적으로 7-16 여자들은 누워 얼마나 잘 따라 유리병마다 사용됩니다. </li></ol> 2. 애벌레 선택 <ol><li> 링어의 중간 (128mM NaCl, 2mM Kcl, 1.8mM CaCl 2, MgCl 4mm짜리 2, 35.5mM 자당, 5mM Hepes의 산도 6.9)로 가득한 9 잘 유리 해부 접시를 준비합니다. </li><li> 링어의 중간 얼음에 장소를 포함하는 여섯 잘 플레이트의 세포 strainers를 준비합니다. 또한, 우리는 나일론 메쉬가 장착되어 특별히 만든 금형을 사용합니다. </li><li> 고급 생물 학적 핀셋 (포셉)를 사용하여 유리 벽면에서 시간이 초과되었습니다 애벌레를 선택하고 링거스 포함 해부 접시에 놓으십시오. </li><li> 깨끗한 잘하는 여성 유충을 전송합니다. 우리가 그들의 생식선으로 남성에서 여성을 구분합니다. 남성 testes 쉽게 지방 신체의 뒷부분 세번째에 포함된 빅 클리어 타원으로 식별됩니다. 지방 신체의 같은 부분에 위치한 여성 난소는, 훨씬 작고, 분명히 둥근 분야로 확인할 수 있습니다. </li></ol> 3. 유충의 해부 <ol><li> 포셉과 두뇌로 단지 사후 유충 잡고 포셉의 두 번째 쌍의과 머리를 제거합니다. </li><li> 기관이 아래로 향하게하여, 등의 측면에 나머지 후부 부분을 넣으십시오. </li><li> 포셉 한 쌍의와 사후 spiracles하여 유충을 잡고 절반에 해당하는 애벌레 지방 기관이 나온다 때까지 다른 한쌍은 뒤로 표피를 압박할 수있는 동안 안으로 천천히 밀어. </li><li> 단단히 뒷부분 끝을 잡고 느슨하게 표피를 잡아 포셉의 다른 쌍을 사용합니다. 부드럽게 천천히 후부 끝부분을 끌어낼의 격차를 통해 표피와 연결된 소장 슬라이드 있도록. 이 과정의 끝에, 지방 시체가 완전히 소장 및 표피에서 분리해야합니다. 지방 신체의 앞쪽에 부분에서 대장을 분리합니다. 얼룩 쉽게 장착을 만들려면, 그것은 지방이 몸 그대로 유지됩니다 것이 중요합니다. </li><li> 선호 잘 포함 해부 애벌레에서 링어의 중간과 함께 철저하게 파스투레 피펫 젖었어. 이 외투 피펫 도움과를 지키는에서 지방 시체를 방지할 수 있습니다. 셀 스트레이너에 얼음 차가운 링어의 중간에 지방 시체를 전송하는 파스투레 피펫을 사용합니다. </li></ol> 4. 고정 및 스테 이닝 모든 단계 4에서 처음으로 항체와 부화를 제외하고, 상온에서 수행됩니다 ° C. <ol><li> 링어의 중간에 5 %의 포름 알데히드에 지방 시체를 품어. 부드러운 교반과 함께 20 분. </li><li> 1% PBT (1 % 트리톤 PBS에서 X - 100) 5 분 씻으십시오. 10 분이 단계 45 분 세 번째를 반복합니다. 1퍼센트 트리톤 X - 100은 애벌레 난소를 구멍과 항체가 그것을 뚫을 수 있도록해야합니다. </li><li> 부드러운 교반 1 시간 동안 0.3 % PBTB (0.3 % 트리톤 X - 100과 PBS에 1 % BSA)로 차단 </li><li> 4 박 이상 0.3 % PBTB에 희석 원하는 1 일 항체 ° 부드러운 동요와 C와 부화. 이 단계는 일반적으로 롤러에 0.2 ML 튜브에서 수행됩니다. </li><li> 셀 strainers 다시 지방 시신을 전송합니다. </li><li> 부드러운 교반과 함께 0.3 % PBTB 3 회 30 분 각각을 씻으십시오. </li><li> 부드러운 교반 1 시간 동안 5% 정상 당나귀 혈청 보충 0.3 % PBTB로 차단합니다. </li><li> 적절한 보조 항체 부드러운 교반 2 시간 동안 차단 솔루션 (0.3 % PBT에서 5% 정상 당나귀 혈청과 보충 0.3 % PBTB)에 (제조 업체의 사양에 따라) 희석과 부화. 항체가 형광 경우이 시점 이후부터 어둠 속에 품어. 이 단계는 일반적으로 롤러에 0.2 ML 튜브에서 수행됩니다. </li><li> 삼십분 각 부드러운 동요와 0.3 % PBT와 3 번 씻으십시오. </li></ol> 5. 설치 <ol><li> 깨끗한 eppendorf 튜브에 지방 시체를 전송합니다. 매우 신중하게 떨어져 모든 액체를 제거하고 즉시 Vectashield 장착 미디어 커버. 난소가 지방 신체에서 분리되고있는 동안은 강화하지 않기 때문에 우리는 정기적으로 vectashield를 사용합니다. 최대 일주일까지 샘플 4 ° C에서 장착 매체에 저장할 수 있습니다. </li><li> 피펫 팁의 끝을 잘라 조심스럽게 현미경 슬라이드에 장착 미디어의 최소한의 볼륨 (30mm 커버 - 미끄럼 30 μl에 대한)와 지방 몸을 전송로를 사용합니다. </li><li> 지방 시체를 밖으로 확산 0.1 mm 직경의 핀을 잡고, 두 니켈 도금 핀 홀더를 사용하십시오. 난소는 지방 신체의 뒷부분 세번째에 위치하고 있습니다. 그들을 둘러싸고 지방 시체는 일반적으로 '꽃'과 같은 모양입니다. 이것은 난소의 위치를​​ 파악하는 데 도움을줍니다. 지방 신체의 나머지 부분에서 '꽃'을 밖으로 해부하다하고 후자를 폐기하십시오. </li><li> 지방 신체 surro을 제거주위 조심스럽게 두 개의 핀을 교차하여 생식선을 unding. 멀리 지방 바디 잔여물에서 슬라이드에 고립 생식선를 놓습니다. </li><li> 매니큐어와 표지 전표 날인과 함께 표지. </li><li> 공촛점 현미경을 사용하여 직접 시각화. 샘플은 최대 3 주 4 ° C에 저장할 수 있습니다. </li></ol> 6. 대표 결과 우리는 GSCs과 체세포의 틈새를 포함한 체세포의 난소 안에 여러 개의 세포 lineages의 설립에 따라 위의 프로토콜을 사용하고 있습니다. 이러한 목적을 위해 우리는 개발 생식선에있는 다른 세포 유형 간의 구분하는 구체적인 항체와 마커를 사용합니다. 여기 항체의 다른 조합을 물들일이 LL3 난소의 예를 보여줍니다. 그림 1A 함께 틈새 시장의 체세포를 형성 터미널 필라멘트 및 캡 세포 (녹색)를 강조 표시합니다. 그림 1B는 직접 세균 세포 (파란색)에 연락 혼합된 세포 (ICS, 마젠타), 보여줍니다. <img src="/files/ftp_upload/2537/2537fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. LL3 난소. (A) 단클론 항체 1B1 (마젠타)는 체세포와 얼룩 fusome을 PGCs 이내 세포내 organelle을 (화살표) 설명합니다. 향상제 트랩 HH - lacZ (β - galactosidase 방지, 녹색)이 터미널 필라멘트에 표시됩니다. 필라멘트 체세포 캡 세포 (화살촉)의 기지에서 볼 수 있습니다. (B) 1B1 항체 (녹색)은 난소의 모든 체세포를 설명합니다. 안티 바사 (파란색)은 모든 PGCs를 표시합니다. PGCs 직접 혼합된 세포 (ICS, 안티 교통 체증, 마젠타)에게 문의하십시오. 바 (A와 B에 대한) 20 μm의 수 있습니다.

<ol><li>Fuller, M. T., Spradling, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Male+and+female+Drosophila+germline+stem+cells%3A+two+versions+of+immortality%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Male and female Drosophila germline stem cells: two versions of immortality.</a> Science. 316, 402-404 (2007).</li>
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<li>Gilboa, L., Lehmann, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repression+of+primordial+germ+cell+differentiation+parallels+germ+line+stem+cell+maintenance%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Repression of primordial germ cell differentiation parallels germ line stem cell maintenance.</a> Curr Biol. 14, 981-986 (2004).</li>
<li>Gilboa, L., Lehmann, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soma-germline+interactions+coordinate+homeostasis+and+growth+in+the+Drosophila+gonad%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Soma-germline interactions coordinate homeostasis and growth in the Drosophila gonad.</a> Nature. 443, 97-100 (2006).</li>
</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

이 비디오는 후반 세번째 instar 애벌레의 난소의 격리 및 얼룩 프로토콜을 보여줍니다. 일상적으로 안정이 프로토콜을 수행하려면, 관심은 다음 사항에 지불되어야합니다 <ol><li> 동기화 및 잘 발달 애벌레의 경우, 이상의 크롤 링은 피해야합니다. </li><li> 작은 반투명 난소의 손실을 피하기 위해 지방 몸이 그대로 해부하다에 있는지 확인하십시오. 이것은 (두 번째 혹은 세 instar의 시작) 이하 난소를 장착 특히, 장착 단계에서 난소를 찾는데 도움이 될 것입니다. </li><li> 한 번에 많은 샘플을 처리하기 위해 셀 strainers 또는 기타 contraptions을 사용합니다. </li><li> 샘플 건조 절대 있는지 확인하십시오. </li><li> 우리는 설치 단계에 대한 스테레오 현미경 좋은을 사용합니다. 일방적인 어둠이 빛을 전송 기반을 사용하면 반투명 난소와 하얀 지방이 신체의 대비가 난소를 찾아서 조작으로 쉽게 어디에 우리가 조건을 찾을 수 제기했다. </li><li> 설치에 따라 반복되는...

<table><tbody><tr><td>NaCl</td><td>JT Baker</td><td></td><td></td></tr><tr><td>염화칼륨</td><td>Merck &amp;amp; Co., Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CaCl₂&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MgCl₂&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td>Merck &amp;amp; Co., Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>자당</td><td>JT Baker</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>인산완충생리식염수</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민 분획 V</td><td>MP Biomedicals</td><td>160069</td><td></td></tr><tr><td>Dumont 생물학용 핀셋 5 dumstar 연마형</td><td>Fine Science Tools</td><td>11295-10</td><td></td></tr><tr><td>니켈 도금 핀 홀더</td><td>Fine Science Tools</td><td>26018-17</td><td></td></tr><tr><td>스테인리스강 미세 핀 (직경 0.1mm, 길이 10mm)</td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-10</td><td></td></tr><tr><td>9웰 플레이트 85X100 mm, 외경 22mm x 깊이 7mm</td><td>Corning</td><td>7220-85</td><td></td></tr><tr><td>표준 투과광 베이스 TL ST가 장착된 MZ 16.5 실체 현미경</td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>6-웰 플레이트</td><td>Costar</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>슬라이드</td><td>멘젤-글레이저(Menzel-Glaser)</td><td>798</td><td></td></tr><tr><td>커버슬립</td><td>Corning</td><td>2940-223</td><td></td></tr><tr><td>봉입제</td><td>Vectashield</td><td>H-1200</td><td></td></tr><tr><td>셀 스트레이너</td><td>Falcon BD</td><td>FAL352350</td><td></td></tr><tr><td>1B1 항체</td><td>발달 연구 하이브리도마 은행</td><td></td><td></td></tr><tr><td>교통 체증 방지</td><td>Dorothea Godt 박사 연구실</td><td></td><td></td></tr><tr><td>항-Vasa</td><td>Ruth Lehmann 박사 연구실</td><td></td><td></td></tr><tr><td>항- &amp;#946;-갈락토시다아제</td><td>카펠</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2차 항체</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

해부 그리고 스테 이닝 drosophila 애벌레 난소

Dissection and Staining of Drosophila Larval Ovaries

많은 기관 embryogenesis 동안에 성인 생활 동안 유지 보수 또는 수리를 위해 자신의 개발을위한 줄기 세포에 따라 달라집니다. 그들이 환경과 상호 작용하는 방법에 줄기 세포 형태, 방법을 이해하는 것은 개발, 항상성 및 질병을 이해 그러므로 매우 중요합니다. 과일 파리 Drosophila melanogaster의 난소는 체세포 지원 전지 (틈새) 1, 2와 세균 라인 줄기 세포 (GSCs)의 상호 작용에 대한 영향력 모델로 재직하고 있습니다. 유전자를 조작하는 능력을 결합 틈새와 GSCs의 알려진 위치, 줄기 세포와 그 틈새 3-12 사이의 상호 작용의 다양한 명료하게하다하는 연구자를 허용하고 있습니다. GSC 유지 및 분화를 조절하는 메커니즘에 대한 정보의 풍부한에도 불구하고, 상대적으로 조금은 GSCs 및 체세포의 틈새 시장 개발 중에 양식 방법에 대한 알려져있다. 그의 세포 컴포넌트 단자 필라멘트와 캡 세포 (그림 1), 세 번째 애벌레 instar 13-17 동안 양식을 포함 약 18 체세포의 틈새. GSCs는 원시 배아 세포 (PGCs)에서 발생한. PGCs 일찍 애벌레 단계에서 세포 분열 따위에 의해 번식하지만 틈새의 형성 다음 PGCs의 하급 집단은 GSCs 7, 16, 18, ​​19이됩니다. 함께, 체세포의 틈새 세포와 GSCs은 유기체의 일생 동안 계란을 생산하는 기능 단위를합니다. GSC 단위의 형성에 관한 많은 질문도 답이 남아 있습니다. 이러한 전구체 틈새와 줄기 세포 엽 성의 전구 물질에 대한 세포, 또는 그들이 GSCs가로의가 PGCs 내에서 비​​대칭 세대 간의 조정하는 프로세스는 최고의 유충에서 공부하실 수 있습니다. 그러나 애벌레 난소 개발 방식 연구 물리적으로 도전합니다. 첫째, 애벌레 난소 작은 수 있습니다. 비록 늦은 애벌레 단계에서 그들은 전반에만 100μm 수 있습니다. 또한, 난소 투명하고 하얀 지방이 신체에 박혀있다. 여기 형광 항체와 얼룩 다음 늦은 세번째 instar (LL3) Drosophila의 유충에서 난소를 분리를위한 단계별 절차를 설명합니다. 우리는, 난소의 위치를​​ 침몰하지 티슈 얼룩 및 세척하고, 항체가 조직에 침투되었는지 확인하는 등의 문제 몇 가지 기술적인 솔루션을 제공합니다. 이 프로토콜은 이전의 애벌레 단계와뿐만 아니라 애벌레 testes에 적용할 수 있습니다.

틈새와 줄기 세포를 개발하는 동안 양식 얼마나 실용적인 의미가있는 중요한 질문이다. 에<em&gt; Drosophila</em&gt; 난소 배아 라인 줄기 세포 및 체세포의 틈새는 애벌레 개발하는 동안 형식입니다. 이 동영상은 늦은 세번째 instar (LL3)에서 여성 생식선을, 해부하다 얼룩 및 마운트하는 방법을 보여줍니다<em&gt; Drosophila</em&gt; 애벌레.

해부 그리고 스테 이닝 Drosophila 애벌레 난소

많은 장기들은 배아 발생기 동안의 발달과 성체기 동안의 유지 및 회복을 위해 줄기세포에 의존합니다. 줄기세포가 어떻게 ...

이 절차의 전반적인 목적은 공초점 현미경을 사용하여 초파리 3령 후기 유충에서 분리한 난소를 시각화하는 것입니다. 이는 먼저 동기화된 집단에서 암컷 유충을 선택함으로써 수행됩니다. 절차의 두 번째 단계는 손상되지 않은 지방체를 해부하여 분리하고, 이를 장 및 큐티클로부터 떼어낸 후 얼음 위에 놓는 것입니다.절차의 세 번째 단계는 내장지방체와 함께 매립된 난소를 고정, 염색 및 세척하는 것입니다. 절차의 마지막 단계는 마운팅을 수행하며 내장지방체로부터 난소를 분리하는 것입니다. 최종적으로 면역형광현미경을 통해 세포 특이적 염색을 보여주는 결과를 얻을 수 있습니다.일반적으로 이 방법을 처음 접하는 연구자는 미세 해부와 마운팅에 상당한 연습이 필요하기 때문에 어려움을 겪을 수 있습니다. 해부 5일 전에 신선한 25 millimeter 초파리 먹이 바이알에 효모를 추가하십시오. 교미한 암컷 초파리 7~16마리를 바이알에 넣으십시오.암컷이 2~4시간 동안 또는 바이알당 약 30개의 알을 낳을 때까지 둡니다. 알이 들어 있는 바이알을 25°C, 최소 70% 습도에서 배양합니다. 5일 후면 유충이 3령 후기에 도달합니다.9구 유리 해부 접시에 링거액(ringer's medium)을 채웁니다. 다음으로, 링거액이 담긴 페트리 접시 내에 나일론 메쉬가 장착된 특수 제작 몰드를 준비합니다. 미세 핀셋을 사용하여 접시를 얼음 위에 올려둡니다.바이알 벽면에서 유충 10~15마리를 골라 해부 접시에 옮깁니다. 암컷 선택 및 해부를 위해 해부 접시를 현미경 아래에 놓습니다. 암컷 유충은 가시(goads)를 통해 수컷과 구별할 수 있습니다.수컷의 정소는 지방체의 후방 1/3 지점에 박혀 있는 크고 투명한 타원형으로 쉽게 식별할 수 있습니다. 지방체의 동일한 부위에 위치한 암컷의 난소는 훨씬 더 작고 투명한 원형 구체로 식별할 수 있습니다. 난소가 보이지 않을 경우, 정소가 없는 것으로 암컷 유충임을 식별합니다.암컷 유충을 깨끗한 웰로 옮깁니다. 해부를 시작하려면 핀셋을 사용하여 뇌 바로 뒤쪽에서 유충을 눌러 고정합니다. 두 번째 핀셋으로 머리를 제거합니다. 유충의 남은 후방 부분을 기관이 아래를 향하도록 하여 등 쪽이 위로 오게 놓습니다.한 쌍의 핀셋으로 유충의 후방 구형 부위를 잡습니다. 그런 다음 핀셋을 천천히 안쪽으로 밀어 넣으면서, 동시에 다른 핀셋을 사용하여 유충 지방체(fat body)의 약 절반이 단단하게 드러날 때까지 큐티

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 비디오는 초파리 난소의 일반적인 해부학적 구조를 설명하고 실시간 또는 고정 이미징을 위해 난소를 해부하는 방법을 제공합니다.

초파리 melanogaster 난소 박리: 생체 외 조직 준비를 위한 기술

면역염색은 조직 내의 특정 세포 유형과 단백질을 시각화하는 효과적인 기술입니다. 초음파 처리를 활용함으로써, 여기에 설명된 프로토콜은 면역 염색 전에 후기 단계의 배아와 유충에서 Drosophila melanogaster 조직을 해부해야 할 필요성을 완화합니다. 우리는 포름알데히드가 고정된 전체 산 유충의 면역 염색을 위한 효율적인 방법론을 제공합니다.

늦게 단계 배아와 애벌레의 초음파 - 촉진 면역 형광 염색<em&gt; 초파리</em&gt; 조직<em&gt; 제자리에서</em

초파리의 성체 구조는 상상 원반이라고 하는 주머니와 같은 구조에서 파생됩니다. 이러한 디스크의 분석은 조직 결정, 구획 경계 설정, 세포 증식, 세포 운명 사양 및 평면 세포 극성을 포함한 많은 발달 과정에 대한 통찰력을 제공합니다. 이 프로토콜은 광/형광 현미경 검사를 위해 가상 디스크를 준비하는 데 사용됩니다.

해부하고, 상상 디스크의 면역 염색에서 초파리

이 프로토콜에 설명된 직립 이미징 방법을 사용하면 발달 중인 Drosophila melanogaster 난자의 극을 자세히 시각화할 수 있습니다.  이 최종 보기는 여포 상피에서 여러 세포 유형의 배열과 형태에 대한 새로운 관점을 제공합니다.

의 수직 이미지<em&gt; 초파리</em&gt; 계란 챔버

진딧물 배아에 대한 전체 마운트 면역 염색 프로토콜이 제시되며, 이 프로토콜에서는 배경 염색을 줄이고 조직 투과성을 증가시키기 위한 중요한 조건을 다룹니다. 이러한 조건은 진딧물의 배아 조직에서 단백질 발현을 효과적으로 검출하기 위해 특별히 개발되었습니다.

완두콩 진딧물 태아의 면역 염색을위한 중요한 조건의 확인 : 조직 투과성을 증가 및 배경 염색을 감소

우리는 해부, 고정, 스테로이드 호르몬 생합성과 규제 메커니즘을 연구하는 초파리 유충과 성인 여성의 steroidogenic 장기의 면역 염색을위한 프로토콜을 설명합니다. steroidogenic 기관뿐만 아니라, 우리는 배아 줄기 세포로 steroidogenic 기관의 신경 분포뿐만 아니라 steroidogenic 표적 세포를 시각화.

과일 플라이의 면역 염색과 Steroidogenic 기관 및 그들의 상호 작용하는 장기를 시각화하기위한 프로토콜<em&gt; 노랑 초파리</em

Drosophila 난소 줄기 세포 틈새 시장 개발을 공부 하는 우수한 모델 시스템입니다. 애벌레와 성인 난소를 해 부 방법 출판 되었습니다 비록 번데기 난소 해 자세히 게시 되지 않은 다른 기술이 필요 합니다. 여기 우리는 해 부, 얼룩, 번데기 난소를 장착 한 프로토콜 개요.

해 부와 초파리 번데기 난소의 얼룩

여기에 제시된 보디피 493/503, 지질 방울 특이적 형광 염료를 사용하여 드로소필라 유충에서 에노세포의 해종 및 지질 방울 염색에 대한 상세한 방법이 제시되어 있다.

초파리 유충에 있는 Oenocytes의 해부 그리고 지질 물방울 염색

여기서, 우리는 후기 배아 초파리 남성 생식선을 생생하게 이미지화하는 데 필요한 해부 프로토콜을 제공한다. 이 프로토콜은 정상적인 조건 하에서 또는 트랜스제닉 또는 약리학적 조작 후에 동적 세포 과정의 관찰을 허용할 것이다.

후기 배아 초파리 고나드의 해부와 라이브 이미징

이 프로토콜의 목적은 Drosophila 난소에서 세포 극체 구조의 국소화 및 역학에 산화 손상의 효력을 시각화하기 위하여 살아있는 화상 진찰을 사용하는 것입니다.

라이브 이미징을 사용하여 Drosophila 계란 챔버에 산화 손상의 효과 시각화

기저막은 발달 동안 조직 및 장기 형태 형성에 필수적입니다. 이 구조의 적절한 배치로 이어지는 메커니즘을 더 잘 이해하기 위해 제시된 프로토콜은 공초점 및 초분해능 현미경을 사용하여 상피 세포에서 기저막 단백질의 세포 내 밀매 및 분비를 시각화하고 특성화하는 방법을 설명합니다.

초 파리 Oogenesis 동안 양극화 된 세포 내 밀매 및 기저막 단백질의 분비의 공초점 및 수퍼 해상도 이미징

학습하세요 Drosophila 애벌레 난소의 해부 및 면역형광 염색법을 통해 생식줄기세포와 그 소환경 형성을 연구하는 방법을. 공초점 현미경으로 세포 특이적 염색을 시각화합니다.

해부 그리고 스테 이닝 Drosophila 애벌레 난소

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