Name: 성인에서 태어난 뉴런의 통합을 공부 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min
Description: 학습하세요 성인 쥐 해마에서 신생 치아회백세포의 기능적 통합을 레트로바이러스 표지와 전세포 패치클램프 기법으로 연구하는 방법을. 이 프로토콜은 신경발생과 시냅스 성숙 메커니즘을 밝히는 데 활용됩니다.

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이 작품은 NINDS와 S.Ge.로 미국 심장 협회가 후원했다 이 접근법은 원래 설립하고 존스 홉킨스 대학에서 박사 Hongjun 노래의 연구실에있는 저자에 의해 개발되었습니다. 우리는 그의지도와 지원을 위해 박사 Hongjun 노래 감사하고 싶습니다.

1. 바이러스 사출 높은 titer 공학 레트로 바이러스 (1 × 10 9 단위 / ML) retroviral 벡터의 공동 transfection에 의해 생산 및 바이러스 뜨는의 ultracentrifugation 다음 HEK293T 세포로 VSVG입니다. 소스 및 생산 방법에 대한, 우수한 조브 데모 (3)을 참조하십시오. 참고 : 젊은 성인 (4-6 주를 넘어서는 안 됨) 여성 C57Bl / 6 생쥐 (찰스 리버)가 표준 조건 하에서 보관되어 있습니다. 모든 절차는 스토니 브룩 대학 IACUC 승인 프로토콜에 따라 실험실 동물 관리 및 사용을위한 국립 연구위원회의 안내를 따르십시오. <ol><li> 얼음 동물 당 냉동 레트로 바이러스의 해동의 2ul. </li><li> 마취시키다 (100 μg의 마취제 + g 체중 당 10 μg의 xylazine)하고 stereotaxic 프레임 (Steolting)에 동물을 탑재합니다. 머리에 머리를 제거하고 70 % 에탄올로 피부를 닦아냅니다. </li><li> 두개골을 노출 다음과 같은 지점에서 치과 드릴 (0.6mm 드릴 비트)를 사용하여 네 얕은 구멍을 드릴 : <ul><li> anterioposterior bregma에서 = -2 mm, 측면 = ± 1.6 mm, 복부 = 2.5 mm; anterioposterior bregma에서 = -3 mm, 측면 = ± 2.6 mm, 복부 = 3.2 mm. </li><li> anterioposterior bregma에서 = -2 mm, 측면 = ± 1.6 mm, 복부 = 2.5 mm; anterioposterior bregma에서 = -3 mm, 측면 = ± 2.6 mm, 복부 = 3.2 mm. </li></ul></li><li> 1μl 해밀턴, 평면 팁 주사기를 탑재하고 이가있는 이랑에 0.25 μl / 분 속도로 사이트마다 0.5 μl 역 바이러스를 주입. 천천히 유체 역류를 방지하기 위해 주사기를 철수하기 전에 각 주입 후 (복부 깊이에 대한 위의 좌표를 참조하십시오.) 일시 정지 2 분. 주사 사이에, 간략하게 멸균 PBS로 주사기 팁 및 혈액 성분을 제거하는 작은 주걱의 외부 표면을 씻어. </li><li> 무균 수술 봉합 재료와 상처 (타입 P - 1; 크기 6-0)을 닫고 사출 후 원하는 시간 단계까지 표준 주택 조건으로 동물을 반환합니다. </li></ol> 2. 슬라이스 준비 성인 생쥐에서 고품질의 급성 조각을 얻으려면, 우리는 (아래 참조) 슬라이스 준비를위한 수정 가공 솔루션을 사용합니다. <ol><li> 0-4 ° 95%와 얼음과 거품에 C O 2 -5 % 적어도 30 분 동안 CO 2 사전 진정 절단 솔루션입니다. </li><li> 마취시키다 및 transcardially 얼음처럼 차가운 산소 포화 절삭 솔루션 동물 perfuse. </li><li> 신속하게 필터 종이 감기, 산소 절단 솔루션으로 사전 침수와 배양 - 접시에 머리를 제거합니다. 소뇌로를 차단하고 (표시) 사출 좌표 최소 1mm의 앞쪽에 장착 표면 슬라이스. 접착제는 두뇌에 vibrotome 무대와 추위와 산소 절단 솔루션으로 가득 절삭 챔버로를 탑재합니다. </li><li> 코로나 또는 수평 조각 (300 - 350μm)을 준비하고 룸 온도 ACSF을 포함하는 잠복기 챔버에 큰 구멍 피펫으로 그들을 전송는 95 % O 2 / 5% CO 2와 함께 부풀어 오른 모양이었다. </li><li> 30~60분 32 ° C에서 슬라이스, 지속 버블링를 품어. 녹음 기간 동안 실내 온도에 챔버를 반환합니다. </li></ol> 3. Electrophysiological 실험 <ol><li> 34 ° C. - 조각이 지속적으로 32 ° C에서 산소 포화 ACSF로 perfused있는 기록 챔버로 전송됩니다 </li><li> 바이폴라 텅스텐 자극 전극은 낮은 배율 현미경의 목표 (10X)를 사용하여 이가있는 이랑의 분자 층에 배치됩니다. </li><li> 하위 세분화된 영역 / 세분화된 세포 계층의 신생아 DGCs는 GFP 또는 dTomato의 표현에 의해 식별됩니다. 전체 셀 patchclamp 녹음은 높은 배율 (40X)에서 신생아 뉴런에서 수행됩니다. </li><li> 기록된 세포의 소성 특성 전류 클램프 모드에서 전류의 일련의 주입에 의해 얻을 수 있습니다. </li><li> 전기 자극은 레코딩 소프트웨어에 의해 제어되는 자극의 아이 솔 레이터를 통해 자극 전극으로 전달하고, 기록하는 신생아 DGCs에서 postsynaptic 전류를 evoked있다. </li></ol> 4. 데이터 분석 evoked postsynaptic 응답 Amplitudes은 성인에서 태어난 뉴런의 다른 발달 단계에서 분석하고 있습니다. 5. 대표 결과 위의 프로토콜을 사용하여 그림 1과 비슷한 신생아 이가있는 이랑의 뉴런에 GFP 표현이 일반적입니다. 신생아 뉴런 쉽게 시각이며, 모두 dendrites과 axons가 견고하게 표시됩니다. 얇은 DGC axons 작은 쪽이 표현은 바이러스의 품질과 titer, 사용되는 모터와 생체내 표현의 길이에 따라 다릅니다. 우리 손에, 신생아 세포 하위 세포 organelles는 사출 다음과 같은 몇 일 이내 볼 수 있으며, 척추 표현은 개발의 초기 단계에서 추적할 수 있습니다. W다른 시간 단계에서 신생아 뉴런에서 구멍 세포 레코딩은 성숙 (그림 2B) 동안 기존의 신경 회로에 고유한 신생아 셀 속성, 예를 들어 행동 잠재력 (그림 2A),뿐만 아니라 시냅스 통합 과정의 연구를 수 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/2548/2548fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="그림 1"> 성인 마우스의 수평 이가있는 이랑 섹션에서 신생아 뉴런의 그림 1은 2 광자 공촛점 이미지. 그린 세포가 21dpi 아르 (일 게시물 주입) GFP - 표현 pUX - GFP의 레트로 바이러스와 라벨 신생아 DGCs합니다. <img src="/files/ftp_upload/2548/2548fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="그림 2"> 그림 2) 액션 가능성 21 신생아 DGC의 속성을 발사 DPI. B)이 대표는 21 DPI에서 신생아 DGC에 기록된 흥분성의 postsynaptic 전류 (EPSCs)를 evoked.

<ol><li>Zhao, C., Deng, W., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+and+functional+implications+of+adult+neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Mechanisms and functional implications of adult neurogenesis.</a> Cell. 132, 645-660 (2008).</li>
<li>Ge, S., Goh, E. L., Sailor, K. A., Kitabatake, Y., Ming, G. L., Song, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GABA+regulates+synaptic+integration+of+newly+generated+neurons+in+the+adult+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">GABA regulates synaptic integration of newly generated neurons in the adult brain.</a> Nature. 439, 589-593 (2006).</li>
<li>Gavrilescu, L. C., Van Etten, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+replication-defective+retrovirus+by+transient+transfection+of+293T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Production of replication-defective retrovirus by transient transfection of 293T cells.</a> J Vis Exp. , (2007).</li>
</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

성인 포유류의 두뇌의 해마에서 지속 neurogenesis은 성숙한 두뇌에의 연결을 개발 및 통합을 공부하는 독특한 실험 모델 시스템을 제공합니다. 여기에 제시 프로토콜 retroviral 레이블과 성인 생쥐의 두뇌에서 신생아 이가있는 과립 뉴런의 통합을 연구 electrophysiological 방법을 결합한 제품입니다. 실험 성공되도록하기 위해, 우리는 절차의 중요한 단계 중에 다음 사항을 권장합니다 : 원치 않는 감염 및 염증을 방지하려면, 모든 도구는 수술 전에 (autoclaving, 살균기 모든 종류의, 또는 70 % 에탄올에 의해) 소독해야합니다. 주사하기 전에 주사기 바늘의 팁을 씻어 살균 PBS를 사용합니다. 바이러스 주입의 경우, 동물은 잘 stereotaxic 장치에 장착해야해야하며 불필요한 움직임의 출처는 주입하는 동안 최소화해야합니다. 머리가 잘 고정하고 기업 있는지 확인하고, 사전에 계산 사출 좌표 수준으로 bregma과 람다에 마우스의 코를 위치를 조정합니다. 객실 온도에 노출을 최소화하기 위해 신속하게 주사기로 바이러스를 추출 - retroviruses 특히 온도를 구분합니다. 압력 손상을 최소화하기 위해 권장되는 속도로 천천히 바이러스를 주사. 권장 평면 밀고 주사기 (대 일반 beveled 팁)을 사용하면 균일하게 분산 이가있는 이랑 감염 영역을 보장합니다. 조각을 준비하기 전에 솔루션을 절단하고 ACSF을 잠복기는 산소가 솔루션을 포화 수 있도록 최소 30 분 95% O 2 -5 %의 CO 2와 함께 부풀어 오른해야합니다. 동물은 빠르게 perfused 및 조직 최고의 슬라이스 품질 추위, 산소 포화 용액에 유지되어야합니다. postsynaptic 응답이있을 때까지 녹화, 서서히 자극 강도를 향상시킬 수 있습니다. 필요한 이가있는 이랑의 분자 층 내에서 자극 전극의 위치를​​ 변경합니다. 요약, 권장되는 접근 방법은 적극적으로, 성숙한 회로에 초기 통합하는 동안 서로 다른 특성과 성인에서 태어난 뉴런 가능한 기능 역할을 탐구하는 방법을 제공합니다.

<ul><li> 110 콜린 염화물, 2.5 KCl, 1.3 KH 2 PO 4, 25.0 NaHCO 3, 0.5 CaCl 2, 7 MgCl 2, 10 덱스 트로 오스, 1.3 나트륨 아스코 브, 0.6 나트륨 pyruvate, 5.0 kynurenic 산성 : 솔루션 (MM)을 커팅. </li><li> 인공 세리 브로 - 척수액 (ACSF, MM의) : 125.0 NaCl, NaHCO 3 25.0, 2.5 KCl, 2 CaCl 2, 1.3 KH 2 PO 4, 1.3 MgCl 2, 1.3 나트륨 아스코 브, 0.6 나트륨 pyruvate, 10 덱스 트로 오스. </li><li> 전체 셀 patchclamp위한 내부 솔루션 (MM)을 : 120 글루 콘 산 칼륨, 15 KCl, 4 MgCl 2, 0.1 EGTA, 10.0 HEPES, 4 MgATP, 0.3 나 3 GTP, 7 phosphocreatine (산도 7.4, 300 mOsm). </li></ul>

성인에서 태어난 뉴런의 통합을 공부

Studying the Integration of Adult-born Neurons

Neurogenesis은 측면 뇌실의 하위 심실 구역 (SVZ) 및 생활 전반에 걸쳐 hippocampal 이가있는 이랑의 하위 세분화된 영역 (SGZ)에 성인 포유류의 두뇌에서 발생합니다. 이전 보고서는 성인 hippocampal neurogenesis가 간질, 정신 분열증, 우울증과 불안 (1) 등 다양한 뇌 장애와 관련된 것으로 나타났습니다. 정상 및 비정상적 성인 태어난 뉴런 통합의 과정을 해독하는 것은 이러한 질병의 병인에 빛을 창고 및 새로운 치료법의 개발을 알려 수 있습니다. SGZ 성인 neurogenesis은 운명의 사양, 마이 그 레이션, 시냅스 통합 및 성숙의 단계를 포함하여, 배아 및 사후 산후의 연결을 개발을 거울. 그러나, 전체 통합은 장기, 6 주 기간 동안 발생합니다. 성인 출생 SGZ 이가있는 과립 세포 (DGCs)에 초기 시냅스 입력을 14 일 (2)에서 glutamatergic 입력 다음, GABAergic이다. 이가있는 이랑에 성인에서 태어난 뉴런의 회로 형성을 조절하는 특정 요소는 현재 알 수 있습니다. 우리 연구실이 proliferating 세포에 형광 단백질과 가상 규제 유전자를 전달하기 위해 몰로니 murine 백혈병 바이러스에 따라 복제 - 결함 retroviral 벡터를 사용합니다. 이 바이러스 기술은 세포 생년월일, 혈통 형태, 그리고 synaptogenesis 분석에 대해 높은 특이성과 해상도를 제공합니다. 전형적인 실험은 종종 독특한 라벨, transgene, 그리고 생체내에서 원하는 개발 프로세스의 단일 세포 분석을위한 발기인 요소가 포함된 두 개 또는 세 바이러스를 고용합니다. 다음 프로토콜은 하나의 녹색 (GFP) 또는 빨간색 (dTomato) 형광 단백질 레트로 바이러스 및 패치 - 클램프 전기 생리학을 사용하여 기능성 신생아 신경 통합을 분석하는 방법을 설명합니다.

성인 동물 신생아 이가있는 과립 세포의 통합을 연구하는 방법이 설명되어 있습니다. 이 기술은 생체내 기능 통합 확인할 수 electrophysiological 녹음 뒤에 신생아 뉴런을 라벨 설계 레트로 바이러스를 사용합니다.

성체 포유류 뇌의 신경발생은 외측 뇌실의 뇌실하구역(sub-ventricular zone, SVZ)과 ...의 과립하구역(sub-granular zone, SGZ)에서 일어납니다.

본 절차의 전반적인 목적은 성체에서 생성된 치상회 과립세포의 기능적 통합을 연구하는 방법을 소개하는 것입니다. 이는 우선 성체 마우스의 치상회에 레트로바이러스를 정위 주입하여 새로 생성된 치상회 과립세포를 표지함으로써 수행됩니다. 본 절차의 두 번째 단계는 특정 시점에 마우스에 차가운 절편 제작 용액을 관류시키고 뇌를 적출하는 것입니다.절차의 세 번째 단계는 진동 절편기(vibratome)를 사용하여 급성 뇌 절편을 준비하는 것입니다. 네 번째 단계는 신생 치상회 과립 세포(dentate granule cells)에서 전체 세포 패치 클램프 기록을 수행하고, 급성 뇌 절편의 분자층을 자극하는 것입니다. 최종적으로, 신생 치상회 과립 뉴런에서 유발된 시냅스 후 전류를 기록하고 분석함으로써 신생 뉴런의 기능적 시냅스 통합을 보여주는 결과를 얻을 수 있습니다.이 기술의 주요 장점은 성체 뇌 내 신생 뉴런의 레트로바이러스 라벨링과 성체 동물로부터의 급성 뇌 슬라이스 표본 제작이 가능하다는 점입니다. 이 방법은 성체 뇌에서 신생 뉴런의 기능적 손실과 같은 성체 신경발생 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 냉동고에서 녹색 형광 단백질 GFP 또는 적색 형광 단백질 D tomato 레트로바이러스를 꺼내 얼음 위에서 해동하여 바이러스 주입을 준비하십시오.4~6주 된 암컷 마우스 한 마리당 2 µL의 레트로바이러스를 투여하기 전 마취를 실시합니다. 발가락을 집어 마취 상태를 확인한 후, 마우스를 정위 고정 장치(stereotaxic frame)에 고정하고 머리의 털을 깎은 뒤 피부를 70% ethanol로 닦아냅니다. 메스를 사용하여 피부를 절개하고 두개골을 노출시킵니다.0.6 millimeter 드릴 비트가 장착된 치과용 드릴을 사용하여 bgma와 lambda가 동일한 수평면에 오도록 마우스의 코 위치를 조정합니다. 여기에 표시된 좌표에 따라 두개골에 4개의 구멍을 뚫습니다. 해동된 레트로바이러스를 1 µL Hamilton flat tip 시린지에 빠르게 채웁니다.치상회(dentate gyrus)에 레트로바이러스를 주입하기 위해, -2 mm bgma 지점에 생성된 구멍 중 하나 위에 주사기를 배치합니다. 주사기를 수직 깊이 2.5 mm까지 내립니다. 액체 역류를 방지하기 위해 분당 0.25 µL의 속도로 레트로바이러스 0.5 µL를 주입합니다.각 주입 후 2분 동안 기다린 다음 주사기를 천천히 제거합니다. 혈액 흔적을 제거하기 위해 멸균 PBS와 어플리케이터를 사용하여 주사기 팁의 외부 표면을 가볍게 헹굽니다. 동일한 절차를 사용하여 0.5 µL의 레트로바이러스를 복측 깊이 2.5 또는 3.2 mm의 나머지 세 곳에 주입합니다.멸균된 외과용 봉합사로 상처 부위를 봉합하고, 신생 뉴런이 원하는 성숙 단계에 도달할 때까지 동물을 사육장으로 돌려보냅니다. 21일이 지난 후, 필요한 용액들을 제조하여 마우스 뇌 슬라이싱을 준비합니다. 절단 용액을 0~4°C의 얼음 위에서 냉각시키고, 95% oxygen, 5% carbon dioxide 혼합 가스를 최소 30분 동안 버블링합니다.인공 뇌척수액(A CSF)을 상온에 두고 95% 산소, 5% 이산화탄소를 사용하여 최소 30분 동안 버블링합니다. 30분 후 얼음 위에서 보관하여 심장 관류를 위한 산소 포화 절단 용액을 준비합니다. 마우스를 마취시킨 후 심장 관류를 수행합니다.그런 다음 신속하게 뇌를 적출하여 절단액과 거름종이가 들어 있는 페트리 접시에 놓습니다. 소뇌를 절단한 후, 주입 지점에서 앞쪽으로 1~2mm 지점을 관상면으로 절단하여 평평한 표면을 만듭니다. 마운팅을 위해.뇌를 Vibram 플랫폼 위에 접착합니다. 산소화된 절단 용액이 채워진 Vibram 절단 챔버에 플랫폼을 장착합니다. 칼날을 내리고 Vibram의 절단 창을 설정합니다.조직 슬라이싱을 시작합니다. 각 슬라이스를 정중선을 따라 두 개의 반으로 자릅니다. 구경이 큰 피펫을 사용하여 이 슬라이스들을 상온의 배양 챔버로 옮깁니다.95% oxygen 및 5% carbon dioxide로 포화시킨 Temperature A CSF를 사용합니다. 해마의 전단(anterior end)이 보일 때까지 절편 제작을 계속합니다. 32 °C 항온수조에서 지속적으로 포화시키며 절편을 30분에서 60분 동안 배양합니다.녹화가 진행되는 동안 배양실을 실온으로 되돌립니다. 이제 슬라이서가 녹화 준비가 되었습니다. 먼저 기록 챔버에 32 to 34 °C의 산소 포화 A CSF를 분당 약 2 mL의 속도로 관류하기 시작합니다.대형 보어 퍼펫(boar perpet)을 사용하여 절편을 기록 챔버로 옮깁니다. 저배율에서 절편을 고정하기 위해 나일론 실이 연결된 U자형 백금 와이어를 절편 위에 놓습니다. 치상회(dentate gyrus)의 분자층을 확인합니다.그다음 자극 전극을 치상회(dentate gyrus)의 분자층으로 내립니다. 고배율 하에서 sub granular zone 또는 과립층(granular layer)에 있는 신생 치상 과립 세포를 녹색 또는 적색 형광 단백질 표지 발현을 통해 식별합니다.DIC 필터와 형광 필터를 전환하며 GFP 또는 D tomato를 발현하는 신생 뉴런을 찾습니다. 전체 세포 패치 클램프 기록을 위해 형광이 비교적 밝고 세포체가 건강한 세포를 선택합니다. 적절한 내부 용액이 채워져 있고 팁 저항이 3~6 MΩ인 유리 마이크로피펫을 현미경의 고배율 대물렌즈 아래에서 앰플리파이어 헤드 스테이지의 마이크로피펫 홀더에 삽입합니다.마이크로 조작기를 사용하여 마이크로피펫을 선택한 치상회 과립세포로 내린 후 whole-cell patch를 형성합니다. current clamp 모드에서 일련의 전류를 주입하고 신생 뉴런의 발화 특성을 기록합니다. 자극 전극을 통해 단일 펄스 또는 쌍 펄스 전기 자극을 가하고 유발된 시냅스 후 전류를 기록합니다.시냅스 후 반응이 나타나지 않으면, 자극 전극을 분자층의 다른 위치로 이동시켜 새로운 자극 위치에서 유발되는 시냅스 후 전류를 기록하십시오. 실험을 마친 후, Clampfit을 사용하여 신생 뉴런에서 유발된 시냅스 후 반응의 진폭을 측정하십시오. 이 그림은 GFP 레트로바이러스 주입 21일 후, 성체 마우스 치상회 신생 뉴런에서의 GFP 발현을 보여줍니다.신생 뉴런은 쉽게 시각화되며, 수지상 돌기와 축삭이 모두 강력하게 표지됨을 알 수 있습니다. 수지상 돌기는 세포체(soma)에서 치상회(dentate gyrus)의 분자층으로 뻗어 나가는 돌기이며, 축삭 또한 힐루스(hilos)와 ca three 영역에서 관찰됩니다. 이 그림은 성체 마우스에 P-U-X-G-F-P 레트로바이러스를 주입한 지 21일 후, 신생 치상과립세포에서 측정된 전체 세포 전류 고정(current clamp) 기록을 보여줍니다.상단 트레이스는 전류 주입에 의해 유도된 활동 전위를 보여줍니다. 이 그림은 바이러스 주입 21일 후 신생 치상회 과립 세포에서 유도된 시냅스 후 전류를 보여줍니다. 분자층을 자극함으로써 가능했습니다.시냅스 후 반응의 존재는 신생 뉴런이 이미 기존의 신경 회로에 통합되었으며, 발달 후 다양한 기원의 ENT로부터 시냅스 입력을 받고 있음을 보여줍니다. 이 기술은 성체 신경 발생 분야의 연구자들이 성체 뇌 내에서 신생 뉴런의 기능적 통합을 탐구할 수 있는 길을 열어주었습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

후각 망울의 성인에서 태어난 뉴런은 optogenetically Channelrhodopsin2 - 표현 이식 미니어처와 함께 주동이의 철새 스트림과 만성 photostimulation에서 lentiviral 주사를 LED를 사용하여 조절할 수 있습니다.

만성에 대한 성인 태어나 강한 뉴런의 선택 바이러스성 전달 생체내에 Optogenetic의 자극

교양 성인 지느러미 루트 신경절의 신경 세포와 축삭 재생의 유전 연구

출처: Gómez-Villafuertes, R., et. al., 세포 생물학 및 여러 신경 집단의 계통 진행을 모니터링하기 위한 실시간 이미징 후 단일 세포 추적.J. Vis. Exp. (2017) 비디오는 분열 및 분화를 포함한 세포 행동을 연구하기 위해 실시간으로 성체 신경 줄기 세포를 준비, 이미징 및 추적하는 과정을 보여줍니다.

 성체 신경 줄기 세포의 신경 계통을 모니터링하기 위한 라이브 이미징 및 단일 세포 추적

NF-κB에 의존하는 성인의 해마 신경의 조작 및 분석을위한 방법이 설명되어 있습니다. 자세한 프로토콜은 마우스의인지 결과의 조사를 위해 치아 이랑 (dentate gyrus)에 의존하는 행동 테스트 (공간 패턴 분리 - 바네스의 미로라고합니다)에 제공된다. 이 기술은 또한 다른 실험 설정에서 조사를 활성화하는 데 도움이됩니다.

NF-κB에 의존하는 성인 신경 발생의 변조 및 분석을위한 방법

이 비디오 기사는 동일한 조직 절편 내에서 성체 해마 신경 발생의 모든 단계를 감지하고 정량화하는 포괄적인 프로토콜을 보여줍니다. 우리는 다른 숙주 종의 적절한 항체를 사용할 수 없을 때 발생하는 간접 다중 면역 형광의 한계를 극복하기 위한 방법을 정교하게 만들었습니다.

동일한 호스트 종에서 항체와 면역 조직 화학 및 다중 라벨은 성인 해마 신경 발생을 연구하기 위해

새로운 두뇌 지구에서 젊은 신경 도전 어떻게 환경 sculpts 신경 운명과 성숙에 중요 한 통찰력을 밝힐 수 있다. 이 프로토콜 interneuron 선구자 특정 두뇌 지역에서 수확 하 고 그들에 게 어느 homotopically를 이식 하는 절차에 설명 합니다 또는 출생 후 새끼의 뇌에 heterotopically.

이른 출생 후 마우스 두뇌로 Interneuron 선구자의 Homochronic 이식

이 프로토콜의 목표는 특정 국소 신경 회로의 화학 유전적 조작에 응하여 성인 신경 줄기/전구 세포의 행동을 분석하기 위한 접근법을 설명하는 것입니다.

성인 해마 신경 전구세포의 회로 특정 조절 을 시술

유도성 트랜스제닉 계보 추적 마우스 라인을 사용하여 줄기 세포 및 그의 자손을 형광단으로 영구적으로 표시하는 능력은 생체내에서 활성화, 증식, 이동 및/또는 분화의 공간적 및 시간적 분석을 가능하게 한다. 계보 추적은 혈통 헌신, 개입에 대한 반응 및 다능성에 대한 새로운 정보를 나타낼 수 있습니다.

성인 마우스 뇌에서 유도성 형광 표지 줄기 세포의 계보 추적

여기에 제시된 것은 형광 활성화 핵 (FAN) 분류를 통해 대부분의 뉴런을 배제하는 마우스 치아 이랑에서 분리 된 단일 핵을 서열화하는 방법입니다. 이 접근법은 고품질 발현 프로필을 생성하고 신경 줄기 세포와 같은 희소 한 집단을 포함하여 틈새 시장에서 대표되는 대부분의 다른 세포 유형에 대한 연구를 용이하게합니다.

해마 신경인성 틈새를 연구하기 위해 단일 핵 RNA 시퀀싱과 결합된 뉴런의 형광 활성화 핵 음성 분류

여기서는 HD-MEA를 사용하여 대규모 신경 앙상블, 특히 해마, 후각 전구 회로 및 인간 신경 네트워크의 계산 역학을 탐구합니다. 계산 도구와 결합된 시공간 활동을 캡처하면 신경 앙상블 복잡성에 대한 통찰력을 얻을 수 있습니다. 이 방법은 뇌 기능에 대한 이해를 높여 잠재적으로 신경 장애에 대한 바이오마커 및 치료법을 식별합니다.

CMOS 통합 고밀도 미세전극 어레이에서 Multimodal Large-Scale Neuronal Ensemble Dynamics 기록 및 분석

현대 신경과학은 실험실 설치류와 인간을 포함한 여러 종 간의 차이를 탐구해야 합니다. 하지만 큰 뇌를 가진 포유류가 관련될 때는 기술적 어려움이 발생합니다. 이 접근법은 매우 다양한 포유류 내 신경 집단의 종간 변이를 다루며, 진화적 패턴을 밝히기 위해 지도화할 수 있는 유사한 결과를 도출합니다.

서로 다른 포유류 뇌에서의 정량적 세포 계수 연구를 위한 비교적 접근법

학습하세요 성인 쥐 해마에서 신생 치아회백세포의 기능적 통합을 레트로바이러스 표지와 전세포 패치클램프 기법으로 연구하는 방법을. 이 프로토콜은 신경발생과 시냅스 성숙 메커니즘을 밝히는 데 활용됩니다.

성인에서 태어난 뉴런의 통합을 공부

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