Name: 네크로 텍스의 Organotypic 슬라이스 준비에서 전체 셀 녹음 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-03T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 29 s
Description: 배우세요 신피질 오가노타입 슬라이스에서 피라미드 뉴런의 전기생리학적 기록 방법을. 생후 8-10일 래트 뇌 절편을 배양하고 전체세포 전압고정 기법으로 이온 채널 특성을 분석합니다.

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저자는 뛰어난 기술 지원을 마유미 Sakuraba과 레베카 Foehring 감사하고 싶습니다. 또한, 우리는 DRS 감사하고 싶습니다. transfection에 대한 cDNA 구성으로 우리를 제공할 organotypic 슬라이스 문화와 biolistic transfection 프로토콜 및 박사 진 Nerbonne 구현에 도움을 로드리고 안드레 이드. NINDS (RCF)를에서 NS044163 :이 작품은 NIH 교부금에 의해 지원되었다.

<ol><li>Beique, J. C., Imad, M., Mladenovic, L., Gingrich, J. A., Andrade, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+the+5-hydroxytryptamine+2A+receptor-mediated+facilitation+of+synaptic+activity+in+prefrontal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Mechanism of the 5-hydroxytryptamine 2A receptor-mediated facilitation of synaptic activity in prefrontal cortex.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104, 9870-9875 (2007).</li>
<li>Buonomano, D. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Timing+of+neural+responses+in+cortical+organotypic+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Timing of neural responses in cortical organotypic slices.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 4897-4902 (2003).</li>
<li>Caeser, M., Bonhoeffer, T., Bolz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+organization+and+development+of+slice+cultures+from+rat+visual+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Cellular organization and development of slice cultures from rat visual cortex.</a> Exp Brain Res. 77, 234-244 (1989).</li>
<li>Foehring, R. C., Toleman, T., Higgs, M., Guan, D., Spain, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Actions+of+Kv2.1+channels+in+rat+neocortical+pyramidal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Soc+Neurosci+Abstr%22%5BJournal%5D)">Actions of Kv2.1 channels in rat neocortical pyramidal neurons.</a> Soc Neurosci Abstr. 34, (2009).</li>
<li>Gähwiler, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+monolayer+cultures+of+nervous+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Organotypic monolayer cultures of nervous tissue.</a> J Neurosci Methods. 4, 329-342 (1981).</li>
<li>Gähwiler, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+cultures+of+neural+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Organotypic cultures of neural tissue.</a> Trends Neurosci. 11, 484-489 (1988).</li>
<li>Gähwiler, B. H., Capogna, M., Debanne, D., McKinney, R. A., Thompson, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+slice+cultures%3A+a+technique+has+come+of+age%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Organotypic slice cultures: a technique has come of age.</a> Trends Neurosci. 20, 471-477 (1997).</li>
<li>Gähwiler, B. H., Thompson, S. M., Muller, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+and+Maintenance+of+Organotypic+Slice+Cultures+of+CNS+Tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Preparation and Maintenance of Organotypic Slice Cultures of CNS Tissue.</a> Current Protocols in Neuroscience. , 6.11.1-6.11.11 (2001).</li>
<li>Guan, D., Lee, J. C., Tkatch, T., Surmeier, D. J., Armstrong, W. E., Foehring, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+and+biophysical+properties+of+Kv1+channels+in+supragranular+neocortical+pyramidal+neurones%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Expression and biophysical properties of Kv1 channels in supragranular neocortical pyramidal neurones.</a> J Physiol. 571, 371-389 (2006).</li>
<li>Guan, D., Lee, J. C. F., Higgs, M., Spain, W. J., Armstrong, W. E., Foehring, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+roles+of+Kv1+containing+channels+in+neocortical+pyramidal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Functional roles of Kv1 containing channels in neocortical pyramidal neurons.</a> J. Neurophysiol. 97, 1931-1940 (2007).</li>
<li>Guan, D., Tkatch, T., Surmeier, D. J., Armstrong, W. E., Foehring, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kv2+subunits+underlie+slowly+inactivating+potassium+current+in+rat+neocortical+pyramidal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Kv2 subunits underlie slowly inactivating potassium current in rat neocortical pyramidal neurons.</a> J Physiol. 581, 941-960 (2007).</li>
<li>Johnson, H. A., Buonomano, D. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+chronic+stimulation+of+cortical+organotypic+cultures+using+implanted+electrodes%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A method for chronic stimulation of cortical organotypic cultures using implanted electrodes.</a> Neurosci Methods. 176, 136-143 (2009).</li>
<li>Johnson, H. A., Buonomano, D. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+plasticity+of+spontaneous+activity+and+Up+states+in+cortical+organotypic+slices%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Development and plasticity of spontaneous activity and Up states in cortical organotypic slices.</a> J Neurosci. 27, 5915-5925 (2007).</li>
<li>Malin, S. A., Nerbonne, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delayed+rectifier+K%2B+currents%2C+IK%2C+are+encoded+by+Kv2+alpha-subunits+and+regulate+tonic+firing+in+mammalian+sympathetic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Delayed rectifier K+ currents, IK, are encoded by Kv2 alpha-subunits and regulate tonic firing in mammalian sympathetic neurons.</a> J Neurosci. 22, 10094-10105 (2002).</li>
<li>O'Brien, J. A., Holt, M., Whiteside, G., Lummis, S. C., Hastings, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modifications+to+the+hand-held+Gene+Gun%3A+improvements+for+in+vitro+biolistic+transfection+of+organotypic+neuronal+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Modifications to the hand-held Gene Gun: improvements for in vitro biolistic transfection of organotypic neuronal tissue.</a> J Neurosci Methods. 112, 57-64 (2001).</li>
<li>Stoppini, L., Buchs, P. A., Muller, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+organotypic+cultures+of+nervous+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A simple method for organotypic cultures of nervous tissue.</a> J Neurosci Methods. 37, 173-182 (1991).</li>
<li>Villalobos, C., Shakkottai, V. G., Chandy, K. G., Michelhaugh, S. K., Andrade, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SKCa+channels+mediate+the+medium+but+not+the+slow+calcium-activated+afterhyperpolarization+in+cortical+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">SKCa channels mediate the medium but not the slow calcium-activated afterhyperpolarization in cortical neurons.</a> J Neurosci. 24, 3537-3542 (2004).</li>
<li>Walker, P. D., Andrade, R., Quinn, J. P., Bannon, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+analysis+of+preprotachykinin+promoter+activity+in+single+cortical+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Real-time analysis of preprotachykinin promoter activity in single cortical neurons.</a> J Neurochem. 75, 882-885 (2000).</li>
<li>Woods, G., Zito, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+gene+gun+bullets+and+biolistic+transfection+of+neurons+in+slice+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Preparation of gene gun bullets and biolistic transfection of neurons in slice culture.</a> J Vis Exp. , (2008).</li>
<li>O'Brien, J. A., Lummis, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biolistic+transfection+of+neuronal+cultures+using+a+hand-held+gene+gun%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Proc%22%5BJournal%5D)">Biolistic transfection of neuronal cultures using a hand-held gene gun.</a> Nat Proc. 1, 977-981 (2006).</li>
<li>Joshi, P., Dunaevsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+gun+transfection+of+hippocampal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Gene gun transfection of hippocampal neurons.</a> J Vis Exp. , (2006).</li>
<li>Biewanga, J. E., Destree, O. H., Scharma, L. H. J Neurosci Met. 71, 67-75 (1997).</li>
</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

우리는 쥐를 네크로 텍스 (4, 9-11)에서 피라미드 뉴런의 전압 - 문이 칼륨 채널의 표현과 기능적 역할을 공부했습니다. 때문에이 채널에 대한 특정 약리 대리인의 부족, 우리는 채널 표현 (1,14,15,17-19)를 조작을위한 유전자 접근 방법을 사용합니다. 세포 형태학 및 피질의 판상 패턴을 유지하기 위해 Stoppini 외 (16)의 접근에서 수정. 우리는 organotypic 문화 준비 (12,13,15-22,, 5-8 2,3) 활용. 우리는 6-17 출생 후의 일에서 급성 neocortical 조각을 분리하고 2~7일에 대한 문화의 슬라이스를 유지합니다. 이것은 우리가 급성 조각과 함께 작품에 비슷한 세 뉴런을 연구 수 있으며 통에 풍부한 흥분성의 연결의 개발을 최소화합니다. 우리는 적외선 조명 (IR -)과 전류 또는 전압 클램프의 전체 세포 패치 클램프 차등 간섭 대비 현미경 (DIC)를 사용하여 레이어 II / III 또는 V에서 시각 식별 피라미드 뉴런에서 기록합니다. 야생 ...

외과 / transfection / 문화 : <ol><li> 브레인 슬라 이서 : 캠덴 Vibroslice # MA572 세계 정밀 계측기, 사라소타, 플로리다, 미국 </li><li> 진 건 시스템 : 바이오 래드는 # 165-2431을 (바이오 - 래드 연구소, 1000 알프레드 노벨 드라이브, 헤라클레스, CA 94547) 편 <ul><li> 진 총, 레귤레이터, 튜브 준비 스테이션 (# 165-2418), 주사기 키트, Tefzel 관, 튜브 커터, 최적화 키트 (# 165-2424), 튜브 커터와 헬륨 호스 어셈블리를 : ​​포함 </li><li> 바이오 래드 헬륨 조정기 (# 165-2413) </li><li> 에 대한 일회용 용품 바이오 래드에서 헬리 우스 : <ul><li> 1.6 μm의 골드 Microcarriers : # 165-2264 </li><li> Tefzel 관 : # 165-2441 </li></ul></li></ul></li><li> 인큐베이터 : 견적 과학적 모델 # 3110 (온습 과학 (866) 984-3766). </li></ol> 미디어 : <ol><li> 호스 세럼 : Hyclone 기증자 에콰인 # SH 30074. (HyClone, 925 웨스트 1800 사우스, 로건, UT 84321) </li><li> HMEM (최소 필수 미디어 플러스 HBSS와 HEPES, 아니 글루타민 : Lonza BioWhittaker 카탈로그 # 12 - 137F) : GIBCO / INVITROGEN (800) 955-6288, 옵션 1. </li><li> HBSS (GIBCO 행크스가 # 24020-117를 호수 버퍼) : GIBCO / INVITROGEN (800) 955-6288, 옵션 1. </li><li> 멤 (GIBCO 최소한의 필수적인 매체, # 12360-038), GIBCO / INVITROGEN (800) 955-6288, 옵션 1. </li><li> 250 ML Millipore 0.2 μm의 필터 : # SC6PU02RE </li><li> 플라스틱 전송 pipettes : 피셔 # 13-711-20. </li><li> 50 ML Millipore steriflip 0.22 μm의 필터 (# SCGP00525) </li></ol> 피셔 과학, 1,241 대사 블러 바드, PO 상자 14989, 세인트 루이스, MO 63132 : 얻은 항목 6-8. 녹음 : <ol><li> Pipet 유리 : 하버드 GC150TF - 10 : 하버드 장치, 84 옥토버 힐로드, 홀리스튼, 매사 추세츠 01,746 </li><li> 서터 P - 87 수평 전극 풀러 : 서터 악기 회사, 하나 디지털 드라이브, 노바토, CA 94949 </li><li> 액슨 인스 트루먼 트의 Multiclamp 700B 앰프 : 분자 디바이스 주식 회사 1311 뉴올리언스 드라이브, 서니 베일, CA 94089-1136 </li><li> 분자 디바이스, 주식 회사, 1311 올리언즈 드라이브, 서니 베일, CA 94089-1136 : 10 데이터 수집 소프트웨어를 PClamp </li><li> 서터 악기 회사, 하나 디지털 드라이브, 노바토, CA 94949 : lectrode 위치는 셔터 교전 - 200 manipulators와 PC - 200 컨트롤러와 제어됩니다. </li><li> 현미경 : IR - DIC 광학과 올림푸스 BX - 50WI 똑바로 현미경 </li><li> IR - 민감한 카메라 OLY - 150 (올림푸스) 또는 DAGE - MTI (DAGE - MTI, 46360 IN 01 노스 Roeske 애비뉴, 미시건 시티). </li></ol>

네크로 텍스의 organotypic 슬라이스 준비에서 전체 셀 녹음

Whole Cell Recording from an Organotypic Slice Preparation of Neocortex

우리는 쥐 네크로 텍스의 피라미드 뉴런의 전압 - 문이 칼륨 채널의 표현과 기능적 역할을 공부했습니다. 때문에이 채널에 대한 특정 약리 대리인의 부족, 우리는 채널 표현을 조작하는 유전자 접근 방식을 촬영했습니다. 우리는 세포 형태학 및 피질의 판상 패턴을 유지하기 위해 organotypic 문화 준비 (16)를 사용합니다. 우리는 일반적으로 출생 후의 일 8-10에서 급성 neocortical 조각을 분리하고 3~7일에 대한 문화의 슬라이스를 유지합니다. 이것은 우리가 급성 슬라이스와 함께 우리의 일을 사람들에게 비슷한 나이에 신경을 공부 수 있으며 통에 풍부한 흥분성의 연결의 개발을 최소화합니다. 우리는 전류 또는 전압 클램프의 전체 세포 패치 클램프와 함께 적외선 조명 (IR -)와 차동 간섭 대비 현미경 (DIC)를 사용하여 레이어 II / III 또는 V에서 시각 식별 피라미드 뉴런에서 기록합니다. 우리는 그들의 기능을 연구하기 위해 채널의 표현을 조작하는 야생 형식이나 돌연변이 칼륨 채널의 DNA biolistic (진 총) transfection을 사용합니다. transfected 세포는 쉽게 녹색 형광 단백질 (GFP)의 cDNA와 함께 공동 transfection 후 epifluorescence 현미경으로 식별됩니다. 우리는 동일한 슬라이스에서 동일한 레이어에 인접해 untransfected 뉴런에 transfected 세포의 음반을 비교합니다.

이것은 피라미드 뉴런에서 전기 레코딩을 만드는 목적 organotypic 문화 neocortical 슬라이스 준비를 준비하고 유지하는 프로토콜입니다.

네크로 텍스의 Organotypic 슬라이스 준비에서 전체 셀 녹음

우리는 쥐의 신피질 피라미드 뉴런에서 전압 개폐성 칼륨 채널의 발현과 기능적 역할을 연구해 왔습니다. ...으로 인해

이 절차의 전체적인 목표는 신피질의 기관형 절편 내 parametal 뉴런으로부터 전기 생리학적 기록을 얻는 것입니다. 이는 먼저 생후 P 8에서 P 10 사이의 쥐로부터 급성 절편을 제작함으로써 이루어집니다. 절차의 두 번째 단계는 cDNA의 Bic 형질전환을 유도하는 것입니다. 절차의 세 번째 단계는 해당 절편을 3일에서 7일 동안 배양하는 것입니다.절차의 마지막 단계는 전류 또는 전압 클램프를 사용하여 형질전환된 세포로부터 전기적 기록을 얻는 것입니다. 최종적으로, 기관유사 슬라이스의 parametal 세포가 동일한 연령의 급성 슬라이스 유래 세포와 유사한 특성을 가짐을 보여주는 결과를 얻을 수 있습니다. GFP 형질전환은 이러한 특성을 변화시키지 않으므로, 전체 세포 전류 또는 전압 클램프 기록을 통해 이온 채널의 유전적 조작 후 뉴런을 연구할 수 있습니다.이 기술의 주요 장점은 급성 절편(acute slices)과 달리, 이온 채널을 유전적으로 조작할 수 있을 만큼 충분히 긴 시간 동안 세포를 정상적인 환경에서 유지할 수 있다는 점입니다. 이 방법은 특정 이온 채널 유형의 기능적 역할과 같은 이온 채널 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 동반된 원고에 명시된 대로 층류 후드(laminar flow hood), 진공 흐름 후드, 수술용 소모품 및 용액을 준비하십시오. 준비된 250 milliliters 절단 용액을 여과한 후, 이후의 모든 단계에서는 장갑을 착용하고 해당 용액 중 40 milliliters를 50 milliliter 비커에 분취하십시오.절단 챔버, 40 milliliter 분주액, 그리고 나머지 210 milliliters의 절단 용액을 층류 후드(laminar flow hood) 내 -20 °C 냉동고에 보관하십시오. 6-well 플레이트의 대각선 방향으로 위치한 3개의 웰에 배양액 1.1 milliliters씩을 넣으십시오. 이 과정을 한 번 더 반복하십시오.6-웰 플레이트. 6-웰 플레이트를 37 °C 인큐베이터에 넣어 최소 1시간 동안 보관하십시오. 다음으로, 멸균 가위를 사용하여 절편 전이에 사용할 전이 피펫 4개의 길이를 짧게 자릅니다.용액이 걸쭉한 혼합물이 되었을 때 다른 3개의 피펫은 그대로 둡니다. 냉동고에서 40 milliliter의 절단 용액 분량을 꺼내 진공 후드 아래에 둡니다. 여기에 95%oxygen, 5%carbon dioxide를 버블링합니

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

이 프로토콜은 주동이의 철새 스트림에서 출생 후의 두뇌와 neuroblast 마이 그 레이션의 고해상도 시간 저속 영상에 최적화된 organotypic 슬라이스 분석을 설명합니다.

출생 후의 두뇌에의 연결을 마이 그 레이션의 고해상도 시간 경과 이미징을위한 Organotypic 슬라이스 분석

이 비디오는 뇌 절편 근처에 가는 뾰족한 피펫을 배치하여 신경 세포와 밀봉을 형성하는 방법을 보여줍니다. 흡입은 세포막을 파괴하여 전기생리학 실험을 위한 전류 측정을 가능하게 하는 전체 세포 패치 클램프를 생성합니다.

Brain Slices의 전기생리학적 기록을 위한 전체 셀 전압 클램프 구성 설정

이 비디오는 뉴런 특이적 형광 단백질을 포함하는 형질전환 뇌 절편에서 전기 활동을 동시에 이미징하고 기록하는 방법을 설명합니다. 이 절차에는 폭기된 인공 뇌척수액이 있는 관류 챔버에서 뇌 절편을 유지하고, 광원을 사용하여 형광 표지된 세포를 여기시키고, 다중 채널 프로브 및 패치 클램프로 전기 신호를 기록하는 것이 포함됩니다.

뇌 절편에 있는 신경 세포의 동시 광학 및 전기 생리학적 모니터링

쌍 기록은 시냅스로 연결된 두 개의 뉴런에서 동시에 전체 세포 패치 클램프 기록으로, 개별 뉴런 사이의 시냅스에 대한 정확한 전기생리학적 및 약리학적 특성화를 가능하게 합니다. 여기에서는 전기생리학을 위한 모든 실험실에서 유기형 해마 절편 배양에서 이 기술을 확립하기 위한 자세한 방법론과 요구 사항에 대해 설명합니다.

해마의 Organotypic 조각의 쌍으로 전체 셀 녹음

폐쇄 루프 프로토콜은 현대 전기 생리학에서 점점 더 널리 보급되고 있습니다. 우리는 데스크톱 컴퓨터와 디지털 수집 보드를 사용하여 체외에서 피질 피라미드 뉴런에서 복잡한 전기 생리학적 프로토콜을 수행하는 간단하고 다재다능하며 저렴한 방법을 제시합니다.

실시간 전기 생리학 : 프로브 신경 역학과 저쪽​​에 폐쇄 루프 프로토콜을 사용하여

여기에서는 배양 또는 생체 내에서 뉴런에서 발현되는 표적 뉴런 단백질에 광반응성 비천연 아미노산을 유전적으로 암호화하여 짧은 광 펄스로 뉴런 단백질을 선택적으로 활성화하는 절차를 제시합니다.

뉴런의 유전자 인코딩 된 부 자연스러운 아미노산을 사용하여 신경 세포 단백질의 광 제어

이 프로토콜에서는 최적화 된 N의 구현을 보여 줍니다.-메 틸-D-glucamine (NMDG) 보호 복구 방법의 뇌 조각 준비. 단일 미디어 공식 안정적으로 다양 한 실험적인 응용 프로그램에 대 한 어떤 나이의 동물에서 건강 한 뇌 조각 얻을 하는 데 사용 됩니다.

최적화 된 N를 사용 하 여 급성 뇌 조각의 준비-메 틸-D-glucamine 보호 복구 방법

이 종이 전체 셀 패치 클램프 기록 Xenopus laevis tadpoles의 retinotectal 회로 공부 하는 데 사용 하는 세 뇌 준비를 다루겠습니다. 그것의 자신의 특정 이점 각 준비 신경 회로 기능을 공부 하는 모델로 Xenopus 올챙이의 실험 추적성에 기여 한다.

준비 및 Xenopus laevis Tectal 신경의 전체 셀 패치 클램프 기록에 대 한 프로토콜

여기, 우리가 시험관에서 척수 조각에서 신경 세포 substantia gelatinosa (SG)에서 만든 전체 셀 패치 클램프 기록에 대 한 필수 단계 설명 합니다. 이 메서드는 기본 막 속성, 시 냅 스 전송 및 공부 SG 뉴런의 형태학 상 특성을 수 있습니다.

급성 척수 조각 Substantia Gelatinosa 신경에 있는 전체 셀 패치 클램프 기록에 대 한 준비

여기에서, 우리는 측방 geniculate 핵을 포함하는 급성 두뇌 조각의 준비를 위한 프로토콜 및 망막 생성 성 및 코르티코겐iculate 시냅스 기능의 전기 생리학적 조사를 제시합니다. 이 프로토콜은 동일한 급성 뇌 슬라이스에서 높은 방출 및 낮은 방출 확률로 시냅스를 연구하는 효율적인 방법을 제공합니다.

망막 생성 및 코르티코제네틸레이트 시냅스 기능의 전기 생리학적 조사

여기서 우리는 급성 설치류 뇌 조각에서 시냅스 특이적 전기생리학적 특성을 허용하기 위해 광유전학적 구조를 가진 분리된 뇌 영역의 바이러스 형질도입을 설명하는 프로토콜을 제시합니다.

생체 외 내측 전두엽 피질에서 외측 내후각 피질까지의 장거리 시냅스 전달 및 가소성에 대한 광유전학적 심문

배우세요 신피질 오가노타입 슬라이스에서 피라미드 뉴런의 전기생리학적 기록 방법을. 생후 8-10일 래트 뇌 절편을 배양하고 전체세포 전압고정 기법으로 이온 채널 특성을 분석합니다.

네크로 텍스의 Organotypic 슬라이스 준비에서 전체 셀 녹음

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