Name: 의 복합 식물의 생성 Medicago truncatula 유괴의 Assays 사용 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 37 s
Description: 학습하세요 Medicago truncatula에서 Agrobacterium rhizogenes를 이용한 뿌리 유괴 복합 식물 생성 방법을. 이 기술은 전통적인 조직 배양 없이도 몇 주 안에 형질전환 뿌리 조직을 신속하게 생산하여 식물-근류균 상호작용 및 결절 형성 연구에 활용됩니다.

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저자는 우리 실험실과 DRS에 털이 루트 기술을 소개하는 박사 크리스 테일러 (오하이오 주립 대학)에 감사드립니다. Senthil Subramanian (사우 스다코타 주립 대학), 프로토콜 개선을위한 후안 장 (Ludong 대학 산동 중국). 우리는 또한이 비디오를 만드는 데 도움이 박사 하오 쳉 (남경 농업 대학) 감사합니다. 이 작품은 오우으로 DOE (DE - SC0001295), NSF (MCB - 0923779)과 USDA (2010-65116-20514)에서 부여에 의해 일부 지원

다음 프로토콜은 모델 콩과의 식물 종 M.에 털이 루트 복합 발전소를 생성하는 데 사용되었습니다 truncatula. 비슷한 프로토콜은 적어도 8 식물 종의 1-4에 맞게 조정되었습니다. 우리는 M. 사용 truncatula 털이 루트 복합 식물 뿌리와 결절 개발에 유전자 기능을 연구하기 위해 서요. 털이 루트 복합 발전소를 생성 2),, 3) 공생 Rhizobia 감염, 그리고 4) 유전자 변형 루트 식별을 준비하는 식물 재료에게) 1 : 프로토콜은 4 개의 섹션으로 분리되었습니다. 우리는 합성 유전자 변형 식물의 뿌리 3 검사의 기자로 녹색 형광 단백질 (GFP) 유전자를 포함하는 바이너리 벡터를 사용합니다. 항생제 기반의 선택에 비해 GFP 기반의 심사는 빠르고 쉽게, 그리고 저렴합니다. 우리 구조에서 ER 표현 최적화된 GFP 유전자는 유전자 변형이 아닌 유전자 변형 뿌리 사이에 쉽게 구별 수 있도록 유전자 변형 뿌리에 강한 제정 GFP 신호를 가지고있는 슈퍼 ubiquitin 발기인에 의해 구동됩니다. 1. 식물 재료 준비 <ol><li> M. truncautla의 씨앗은 온실 재배 식물 (50 % 상대 습도, ​​8분의 16 H 조명 / 어두운, 18분의 22 ° C 주 / 야 온도)에서 수확하고 있습니다. 성숙한 종자는 4 ° C.에 저장할 수 있습니다 </li><li> 약 100 씨앗은 정기 잡고 10 분 10 ML 집중 황산 (95-98%, 시그마 - 알드리치, MO)에 scarified 있습니다. </li><li> 씨앗은 부드러운 교반과 멸균 물을 5-7 번 씻어서 있습니다. </li><li> 씨앗은 다음 6 시간 동안 실온에서 물에 흠뻑 젖고 ° C가 36-48시간에 대한 발아를 동기화 4 보관됩니다. </li><li> 약 20-30 종자는 페트리 접시에 배치 젖은 여과지에 보급하고 있습니다. 그들은 22 ° C 유지를 μmol.m -2 8분의 16 H 조명 / 어두운주기, 그리고 40. S -1 빛의 강도는, 5-6 일간. </li><li> Germinated 모종은 흙으로 전송하고 한 달 동안 온실에 배치됩니다. </li></ol> 2. 헤어 루트 복합 식물을 생성 <ol><li> 관심 유전자를 갖고 이진 구성 요소 A.으로 변형되었다 표준 프로토콜을 사용 rhizogenes. 우리는 유전자 변형 조직 검사를 용이하게 마커로서 GFP 유전자를 포함하는 바이너리 벡터의 집합을 꾀하고있다. 이 벡터는 다양한 발기인을 포함하고 모두 이상 표현이나 타겟 유전자 3,5의 입을위한 게이트웨이 복제 사이트 (Invitrogen, 칼스 배드, CA) 있습니다. </li><li> A. rhizogenes의는 28에서 적절한 항생제 선택과 50ml LB 배지 ° 16~24시간 들면 C에서 양식입니다. </li><li> 박테리아는 질소없는 식물 영양소 솔루션 (표 1, 6) = 0.3를 수집하여 OD 600의 최종 농도에 다시 중지합니다. </li><li> 털이 루트 재생, 소독 지원 매트릭스 (이하 "록 양모"Hummert 국제, 지구시, MO)을 지원하기 위해하는 것은 약 3cm 3 플러그로 절단됩니다. 하나는 페트리 접시에 4 플러그를 놓으십시오. </li><li> 구멍 explants의 삽입을 용이하게하기 위해 피펫 팁을 사용하여 각 플러그 위에 찌르고있다. A. rhizogenes (5 ML)은 각 플러그인에 추가됩니다. </li><li> 2-3 겨드랑 꽃봉오리와 촬영 섹션 슬랜팅 절단에 의해 excised 수 있습니다. explant은 다음 플러그에 삽입하고, 22 ° C 3 주에 대한 성장이다. 우리는 물이 그들을 5 ML 질소 무료 솔루션을 필요한 경우와 다음, 처음 10 일 동안 물을없이 Medicago의 explants을 유지. 우리는 혀끝의 분열 조직을 제거하는 것은 우발적인 뿌리의 형성을 낮출 수있는 것으로 나타났습니다. </li></ol> 3. 공생 Rhizobia (Sinorhizobium Meliloti) 감염증 <ol><li> 3 주 후에 어떤 우발적인 뿌리가 록 양모에서 나타날 것입니다. 털이 루트 복합 식물은 록 양모에 관계없이, 모래 또는 vermiculite (소독)으로 전송됩니다. 그들은 22 온실에서 재배 ° C, 8분의 16 H 조명 / 어두운 사이클, 300 μmol.m -2. S는 1 주일 -1 빛의 강도. </li><li> rhizobia 감염, S. 이전에 meliloti 1201 50 ML 효모 추출물 - mannitol 30 ° C (표 2, 6,7)에서 7 일 동안 매체 양식입니다. </li><li> 다시 정지 rhizobia 세포는 OD 600의 최종 농도 = 0.08 사용하여 질소 무료로 영양 솔루션으로 희석하고 있습니다. S.의 10 ML 신선한 서스펜션 meliloti는 결절 형성을 유도하기 위해 각각의 합성 공장에 적용했다. </li></ol> 4. 유전자 변형 루트 식별 <ol><li> 두 주 rhizobi​​a 접종 후, 합성 식물은 물에 세척에 의해 뿌리입니다. 뿌리는 쉽게 물에 모래 또는 펄라이트 분리 수 있습니다. </li><li> 우리는 UV - 현미경 (니콘 SMZ1500, 여기 460 - 500nm, 505nm 이색성, 510nm 이상의 배리어)에서 털이 뿌리를 놓으십시오. 형질 뿌리는 GFP 양성하고 우발적인 뿌리는 GFP 아무것도 없습니다. 우리는 다음 뿌리 accordin를 수집g GFP 신호, 그리고 결절 번호를 카운트 루트 길이를 측정하고, 측면 루트 밀도를 계산합니다. GFP 부정적인 뿌리는 컨트롤로 사용됩니다. </li></ol> 5. 대표 결과 우리의 실험에서 새 머리카락 뿌리는 A. 후 2-3주에 explants에서 재생 rhizogenes innoculation. UV - 현미경, GFP 유전자를 가지고 유전자 변형 뿌리는 강한 녹색 형광 (그림 1)를 보여줍니다. 재생 뿌리와 GFP 긍정적인 뿌리 부분의 금액은 explants 및 복합 plants.On 평균의 성장 환경의 조건에 따라, 생산 뿌리의 25 %가 유전자 변형 털이 뿌리 셋 있었다. 변환 효율, 1)를 향상시키기 위해 로 비디오에 표시된 플라스틱 커버 운명은, 처음 몇 일 동안 성장 트레이에서 습도를 유지하기 위해 충분하고, 식물은 처음 며칠 동안 약간의 물을 필요로합니다. 과도한 관수는 털이 루트 형성에 해로운이며 2) Agrobacterium innoculant의 농도가 변화하는 것이 중요합니다. 세포의 과도한 금액은 털이 루트 형성 또는 결절 형성에 도움이되지 않습니다. 결절 형성은 물을 솔루션은 질소 무료 있어야합니다, 그렇지 않으면 몇 nodules가 형성됩니다. 털이 루트 복합 식물은 시작 물질로 cotyledons 또는 entact의 모종을 사용하여 생성할 수 있습니다. 위의 프로토콜만이 사소한 변경은 다른 조직 8 털이 뿌리를 생성할 수 ncessary 있습니다. 중요한 것은 각각의 털이 루트는 독립적인 변환 이벤트입니다. 따라서 하나의 합성 공장에서 관찰 phenotypes 여러 복합 식물의 반복에 의해 확인하는 데 필요한 몇 가지 transforamtion 이벤트의 총합으로 이루어진 <img src="/files/ftp_upload/2633/2633fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. A. 형질 전환 뿌리는 털이 뿌리에서 밖으로 정렬할 수 있습니다. B.의 Nodules는 털이 루트 합성 공장에서 형성되었다. 우리는 4 주 된 M. 배치 UV - 현미경과 GFP 긍정적인 뿌리 아래에 truncatula 털이 뿌리 식물을 쉽게 확인할 수 있습니다. (레드 애로우 : GFP 루트, 노란색 화살표 : 비 - GFP 루트) <table border="1"><tbody><tr><td> 재고 </td><td> g/200ml </td><td> ML 재고 / 리터 </td></tr><tr><td> MgSO 4 0.7 H 2 O </td><td> 12.3 </td><td> 2 </td></tr><tr><td> CaCl 2 0.2 H 2 O </td><td> 14.7 </td><td> 4 </td></tr><tr><td> K 2 HPO 4 0.3 H 2 O </td><td> 6.8 </td><td> 1 </td></tr><tr><td> K 2 SO 4 </td><td> 11 </td><td> 4 </td></tr><tr><td> 철 Club 호텔 3 0.6 H 2 O </td><td> 0.49 </td><td> 2.5 </td></tr><tr><td> Micronutrients </td><td> 아래 참조 </td><td> 1 </td></tr></tbody></table><table border="1"><tbody><tr><td> Micronutrients </td><td> 리터 당 g </td></tr><tr><td> H 3 BO 3 </td><td> 0.142 </td></tr><tr><td> MnSO 4. H 2 O </td><td> 0.077 </td></tr><tr><td> ZnSO 4 0.7 H 2 O </td><td> 0.1725 </td></tr><tr><td> CuSO 4 0.5 H 2 O </td><td> 0.037 </td></tr><tr><td> NaMoO 4. H 2 O </td><td> 0.024 </td></tr><tr><td> CoCl 2. H 2 O </td><td> 0.0025 </td></tr><tr><td> NiSO 4 </td><td> 0.001 </td></tr></tbody></table> 표 1. Nitogen없는 영양 솔루션 <table border="1"><tbody><tr><td> K 2 HPO4 </td><td> 0.5g </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> 0.1g </td></tr><tr><td> MgSO 4 명이 7H 2 O </td><td> 0.2g </td></tr><tr><td> 효모 추출 </td><td> 0.4g </td></tr><tr><td> Mannitol </td><td> 10g </td></tr><tr><td> 산도 = 6.8 </td><td></td></tr></tbody></table> 표 2. 효모는 (리터 당) mannitol 미디어를 추출

<ol><li>Limpens, E., Ramos, J., Franken, C., Raz, V., Compaan, B., Franssen, H., Bisseling, T., Geurts, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+interference+in+Agrobacterium+rhizogenes-transformed+roots+of+Arabidopsis+and+Medicago+truncatula%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Bot%22%5BJournal%5D)">RNA interference in Agrobacterium rhizogenes-transformed roots of Arabidopsis and Medicago truncatula.</a> J. Exp. Bot. 55, 983-992 (2004).</li>
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<li>Zhang, J., Subramanian, S., Stacey, G., Yu, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flavones+and+flavonols+play+distinct+critical+roles+during+nodulation+of+Medicago+truncatula+by+Sinorhizobium+meliloti%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+J%22%5BJournal%5D)">Flavones and flavonols play distinct critical roles during nodulation of Medicago truncatula by Sinorhizobium meliloti.</a> Plant J. 57, 171-183 (2009).</li>
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</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

털이 루트 합성 공장을 생성하는 것은 많은 dicot 종족에 대한 유전자 변형 물질의 다량을 얻을 수있는 빠르고 쉬운 방법입니다. 이 방법은 유전자 변형 종자를 생산할 수 없지만, 그것은 몇 주 안에 유전자 변형 물질을 생성할 수 있습니다. 방법은 어려움이 조직 문화를 구축하거나 안정적인 transformants 생성을 가지고 식물에 특히 적합합니다. 수년에 걸쳐, 우리는 유전자 기능, 발기인 기능, microRNAs, 루트 및 측면 루트 개발, 국방 및 비생물적 스트레스 반응, 유괴 및 기타 공생 프로세스, 호르몬 반응, 신진 대사 프로 파일링, 유전자 프로 파일링, proteomic 분석, 연구를이 기술을 사용한 다른 생물 학적 처리합니다. 프로토콜은 강력하고 복제할 수 있습니다.

의 복합 식물의 생성 medicago truncatula 유괴의 assays 사용

Generation of Composite Plants in Medicago truncatula used for Nodulation Assays

Agrobacterium의 tumerfaciens 마찬가지로, Agrobacterium rhizogenes의는 플라스미드 (리) 루트 - 유도하는 자율을 바탕으로 식물 세포에 외국 DNAs을 전송할 수 있습니다. 답변 rhizogenes는 식물 조직에 털이 루트 형성 원인 및 변환 후 복합 발전소를 형성할 수 있습니다. 이러한 복합 식물에서 생성 뿌리의 일부가 야생 타입 T - DNA와 엔지니어링 이진 벡터를 들고, 유전자 변형되며, 쏘고는 에너지 및 성장 지원을 제공하기 위해 제공 아직되지 않은 유전자 변형되는 동안. 이러한 털이 루트 복합 식물 유전자 변형 종자를 생산하지 않지만 식물 연구에 매우 유용 이러한 합성 공장을 만드는 중요한 기능은 여러 가지가있을 수 있습니다. 첫째, 광범위한 호스트 범위, ​​A. rhizogenes는 인류의 다양한 유전 공학을 허용, 특히 많은 식물 종, dicots를 변환하실 수 있습니다. 둘째, A. rhizogenes 직접 조직 및 explants 감염, 이전에 변환 할 조직 문화는 완강히 저항하는 식물 종의 변화에 이상적, 복합 발전소를 얻을 필요가 없습니다. 또한, 유전자 변형 루트 조직은 주 만에 생성할 수 있습니다. Medicago truncatula 들어, 우리는 정상적인 꽃 물놀이 Arabidopsis 변형보다 같은 짧은 셋처럼 주 형질 뿌리를 얻을 수 있습니다. 전반적으로, 털이 루트 복합 플랜트 기술은 유전자 기능을 연구하고 관련 - phenotypes를 루트에 다목적하고 유용한 도구입니다. 여기 털이 루트 복합 식물이 어려운 변환 종 M. 공장 - rhizobium 상호 작용과 유괴를 공부하는 데 사용할 수있는 방법을 보여줍니다 truncatula.

털이 루트 복합 식물이 어려운 변환 종의 식물 rhizobi​​um 상호 작용과 유괴를 공부하는 데 사용할 수있는 방법을 우리가 보여<em&gt; Medicago truncatula</em&gt;.

의 복합 식물의 생성 Medicago truncatula 유괴의 Assays 사용

Agrobacterium tumefaciens와 유사하게, Agrobacterium rhizogenes는 자율 뿌리 유도(root-inducing, Ri) ...에 기반하여 외래 DNA를 식물 세포로 전달할 수 있습니다.

안녕하세요, 저는 Dan 식물 과학 센터의 Oliver Yu입니다. 오늘은 아그로박테리움(Agrobacterium)을 이용해 Ute Compote 식물을 생성하는 방법을 보여드리겠습니다. 이 기술은 현재 오하이오 주립대학교에 재직 중인 Chris Taylor 박사에 의해 Dan 센터에 도입되었습니다.지난 수년간 저의 이전 그룹 멤버 여러 명이 이 기술들을 개선해 왔으며, 현재 그룹 멤버인 Stone 박사와 Mao가 Harry Root Composite Plants가 어떻게 제작되는지 보여주기 위해 이 영상을 제작했습니다. Agrobacterium ZOS는 외래 DNA를 식물에 도입한다는 점에서 agrobacterium tumor fis와 매우 유사하지만, ZOS는 야생형 조직의 더 높은 뿌리 형성을 유도하여 이와 같은 복합 식물을 형성할 수 있습니다. 따라서 이러한 복합 식물에서는 일부 뿌리는 형질전환된 상태인 반면, 지상부는 여전히 야생형입니다.따라서 이 기술은 형질 전환 종자를 생성하지 않습니다. 하지만, 고효율 뿌리 캠비움 식물을 이용하는 것에는 이 기술을 매우 유용하게 만드는 세 가지 주요 장점이 있습니다. 첫째, 많은 식물 종, 특히 쌍자엽 식물 종은 아그로박테리움(agro bacterial ous)에 의해 형질 전환될 수 있습니다.둘째로, 형질전환 전에 조직 배양을 확립할 필요가 없습니다. 유묘, 줄기, 뿌리 등 식물의 여러 부위를 이용하여 직접적으로 형질전환 식물을 생성할 수 있습니다. 마지막으로, 수주 이내에 형질전환된 뿌리 조직을 얻을 수 있습니다.대두와 메디카고(medicargo) 형질전환의 경우, OPIS 형질전환보다 최대 3주 더 빠르게 형질전환 뿌리를 얻을 수 있습니다. 전반적으로, 고효율 뿌리 세포 식물 기술은 유전자 기능과 뿌리 관련 표현형을 연구하는 데 매우 유용한 도구입니다. 안녕하세요, 제 이름은 Ong입니다.안녕하세요, 제 이름은 [이름]이며, 여기 촬영 담당 빌이 있습니다. 오늘은 Harry root 복합 식물 프로토콜을 소개해 드리겠습니다. 네, 저희는 여러 프로젝트에서 이 프로토콜을 사용하고 있습니다.이미 시작했습니다. 네. 시연을 위해 meta cargo Tula를 예로 사용하겠습니다. 이것들은 meta cargo 성숙 꼬투리입니다.꼬투리를 분쇄 상자에 넣고 길고 강한 동작으로 분쇄합니다. 꼬투리를 가볍게 흔들어 씨앗을 분리한 후, 씨앗을 50 milliliter 원심분리 튜브에 넣습니다. 그런 다음 5 milliliter의 진한 황산을 첨가합니다.매우 주의해서 스캐닝합니다. 약 10분이 소요됩니다. 튜브를 2~3회 정도 가볍게 섞어줍니다.산 처리 과정 동안 종피는 노란색으로 변합니다. 튜브에서 황산을 제거하고 멸균수로 종자를 최소 5회 헹굽니다. 종자를 실온의 탈이온수에 6시간 동안 담근 후, 4°C에서 2일 동안 보관합니다.발아 시기를 맞추기 위해, 20~30개의 씨앗을 페트리 접시의 젖은 여과지 위에 펼쳐 놓습니다. 5~6일 후, 발아한 씨앗을 토양으로 옮기고 온실에서 4주 동안 재배합니다.복합 식물 형질전환을 위해, 일반적으로 agrobacterium Zony K 5 99 균주를 사용합니다. 셔틀 벡터 또는 바이너리 벡터는 표준 agrobacterium tumor facit 형질전환 프로토콜에 따라 K 5 99로 형질전환될 수 있습니다. agrobacterium을 접종하고, 30 °C에서 16~24시간 동안 배양합니다. 배양 기간이 지난 후, 배양액을 50 mL 원심분리 튜브에 넣어 세포를 수집합니다.원심분리기를 사용하여 5,000 G에서 30분 동안 원심분리합니다. 펠렛을 질소 제거 영양액으로 재현탁합니다. 아그로박테리움 세포를 OD 600 기준 0.3으로 희석하십시오.이 농도는 최대 형질전환을 위해 중요합니다. 지지 매트릭스로 암벽(rock wall)을 사용합니다. 고빈도 형질전환을 위해서는 이 재료를 사용하는 것이 중요합니다.암벽을 적절한 크기로 자릅니다. 플러그의 상단에 지름 약 1.5~2cm의 구멍을 뚫습니다. 피펫 팁을 사용하여 각 플러그에 Resuspended Agrobacterium Zony 용액 5mL를 첨가합니다.2~3개의 측아(auxiliary buds)가 있는 줄기 절편을 선택하여 사선으로 자릅니다. 식물 절편을 암벽 구멍에 삽입합니다. 절단된 식물을 성장 챔버나 실험대 위에 3주 동안 둡니다.10일마다 각 플러그에 영양액 5 mL를 첨가합니다. 3주 후, 절단면에서 뿌리가 재생됩니다. 식물을 물에 담급니다.뿌리가 손상되지 않도록 주의하며 부드러워진 암벽을 조심스럽게 제거하십시오. 암벽을 완전히 제거해야 합니다. 모상근 복합 식물을 모래나 펄라이트로 옮길 수 있습니다. 공생 실험을 위해, 리조비움을 효모 추출물 매니토 배지에서 30 °C로 7일 동안 배양하십시오.zoia 세포를 수집하여 재현탁합니다. 펠렛을 질소 제거 영양 용액으로 현탁합니다. 용액을 OD 600 기준 0.08까지 희석합니다.각 복합 식물 배양액에 ZOA 용액 10 milliliters를 첨가하고, 뿌리혹이 형성될 수 있도록 식물을 2~3주 더 배양합니다. 복합 식물을 뿌리째 뽑아 세척하여 모래를 제거합니다. 녹색 형광 단백질 발현을 이용하여 형질전환된 뿌리를 확인합니다.이를 위해 형광 현미경을 사용합니다. 모든 모상근 컨스트럭트에는 형질전환 라인을 선별하기 위한 구성적 GFP 카세트가 포함되어 있습니다. 이 사진은 형광 현미경으로 관찰한 GFP 형질전환 모상근 복합 식물을 보여줍니다.더 밝은 녹색 형광을 띠는 형질전환 뿌리는 비형질전환 뿌리와 쉽게 구별할 수 있습니다. 복합 식물의 모상근에는 뿌리혹이 형성됩니다. 여기 전체 프로토콜이 있습니다.다시 한번 강조하자면, 모상근 복합 식물체를 생성하는 것은 특히 이배체 종에서 다량의 형질전환 조직을 얻을 수 있는 빠르고 쉬운 방법입니다. 이 방법으로는 형질전환 종자를 얻을 수는 없지만, 몇 주 만에 형질전환 물질을 생산할 수 있습니다. 이는 조직 배양 및 형질전환 확립에 어려움이 있는 식물에 특히 적합합니다.수년간 저희는 이 기술을 사용하여 유전자 기능, 프로모터 기능, microRNA, 뿌리 및 측근 발달, 방어 및 항생제 스트레스 반응, 근절 형성 및 기타 공생 과정을 연구해 왔습니다. 또한 상부 뿌리 복합 식물을 이용하여 호르몬 반응, 대사체 프로파일링, 유전자 프로파일링 및 단백질체 분석을 수행하였습니다. 이 영상이 여러분이 선호하는 종에 이 시스템을 적용하는 데 도움이 되기를 바랍니다.본 기술과 관련된 문의 사항이 있으시면 언제든지 연락해 주시기 바라며, 좋은 결과가 있으시길 바랍니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

Nicotiana benthamiana 공장에서 PTI에 대한 세포 죽음 기반 분석을 설명합니다.

병원체 - 관련 분자 패턴 (PAMP) 트리거된 식물의 내성 (PTI)에 대한 분석

루트 매듭 nematodes있는 화면 식물 별개의 두 가지 방법이 설명되어 있습니다. 설명한 방법은 번식 프로그램에서 이러한 식물의 이용을 촉진 비파괴 방식으로 nematodes과 높은 처리량 화면을 포함합니다.

루트 - 매듭 Nematodes과 높고 낮은 처리량 화면 Meloidogyne SPP.</em

표준 실험실 접시에서 만든 개별 멸균 소우주의 질소 고정 박테리아 Sinorhizobium meliloti과의 공생에 개자리의 truncatula 식물의 성장 저하 불임없이 루트 시스템과 결절의 자주 검사를 허용합니다. 식물은 최대 9 주 동안 이러한 성장 챔버에서 유지 될 수있다.

유괴와 콩과 식물의 성장을위한 단일 공장, 무균 소우주<em&gt; 개자리 truncatula</em&gt; Rhizobi​​al 공생과<em&gt; Sinorhizobi​​um meliloti</em

목표는 콩과 식물이 아닌 애기장대 모델을 보완하기 위해 초기 식물 배아 발생의 조절을 조사하는 데 모델 콩과 식물 Medicago truncatula를 쉽게 사용할 수 있음을 설명하는 것입니다. 포드 형태학은 접합 배발생 단계와 관련이 있으며 조직 배양을 사용하여 배아를 수집하는 프로토콜도 제공됩니다.

모델 콩과 식물에서 초기 배아 발달의 규정 유학을위한 접합체 및 체세포 배아를 얻기위한 프로토콜<em&gt; Medicago truncatula</em

발기인 식 분석은 유전자 규정의 이해 및 대상 유전자의 spatiotemporal 식 개선에 중요 한. 여기 우리는 식별, 격리, 식물 발기인을 복제 하는 프로토콜을 제시. 또한, 우리는 일반적인 콩 털이 뿌리에 결 절 특정 발기인의 특성을 설명합니다.

식물 발기인 분석: 식별 및 일반적인 콩에서 루트 결 절 특정 발기인의 특성

이 프로토콜에 복사 번호 유사의 전체 게놈 배열 기반 비교 genomic 교 잡 (CGH) 분석 수행에 관심이 있는 연구자에 대 한 실험 단계 및 시 약, 장비, 및 분석 도구에 대 한 정보 제공 식물입니다.

어레이 기반 비교 Genomic 교 잡 플랫폼 효율적인 탐지의 복사 번호 유사 빠른 중성자 유도 개자리속 truncatula 돌연변이에 대 한

Nicotiana benthamiana 잎에서 생 합성 효소의 일시적인 분리 식 생 공급 2, 3-oxidosqualene 새로운 고부가가치 보관 제품의 생산으로의 착륙 장이 있습니다. 여기는 triterpenes 그리고이 강력한 식물 기반 플랫폼을 활용 하 여 아날로그의 빠른 (5 일) 대리점 규모 생산을 위한 상세한 프로토콜을 설명.

Nicotiana Benthamiana 에 과도 식 보관 생산 대리점 규모에 대 한 나뭇잎

이 논문은 면역 점구체에 노출 된 후 애기장대에서 방어 반응을 정량화하는 두 가지 방법, 즉 일시적인 산화 파열 및 모종 성장 억제에 대해 설명합니다.

애기장대에서 패턴 트리거 산화 버스트와 모종 성장 억제 어세

Parasponia andersonii는 대마초 가족 (칸 나바세아)에 속하는 빠르게 성장하는 열대 나무이며, rhizobium와 관련하여 질소 고정 뿌리 작은 혹을 형성 할 수 있습니다. 여기에서, 우리는 Agrobacterium tumefaciens-중재된 안정한 변환 및 CRISPR/Cas9 기지를 둔 게놈 편집에 근거를 둔 P. andersonii에 있는 역유전 분석을 위한 상세한 프로토콜을 기술합니다.

질소 고정 열대 카나바세아 나무 파라스포니아 앤더슨이 변형, 게놈 편집 및 현상형 화

여기에서는 복합 식물을 생산하기 위해 Agrobacterium tumefaciens 가 매개하는 원스텝 형질전환 방법의 자세한 프로토콜을 제공합니다.

Agrobacterium rhizogenes 기반 털이 많은 뿌리 형질전환에 의한 복합 식물 생산을 위한 효율적이고 재현 가능한 방법

학습하세요 Medicago truncatula에서 Agrobacterium rhizogenes를 이용한 뿌리 유괴 복합 식물 생성 방법을. 이 기술은 전통적인 조직 배양 없이도 몇 주 안에 형질전환 뿌리 조직을 신속하게 생산하여 식물-근류균 상호작용 및 결절 형성 연구에 활용됩니다.

의 복합 식물의 생성 Medicago truncatula 유괴의 Assays 사용

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