Name: RNA 또는 특정 뇌 영역에서 단백질 추출에 대한 쥐 두뇌의 마이크로 해부 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-08-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 31 s
Description: 배우세요 쥐 뇌 미세해부 기법으로 후각구, 전대피질, 선조체, 해마를 분리하여 RNA와 단백질 분해를 방지하는 방법. 이 기술은 신경퇴행성 질환 연구에 필수적인 고품질 조직 샘플 확보에 활용됩니다.

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1 단계 설립 프로토콜에 따라 쥐를 희생. 두개골의 두뇌를 제거하고 얼음에 씻어 차가운 DEPC는 표면 혈액을 제거하는 밀리 Q 물을 취급. 2 단계 차가운 금속 접시에 놓습니다. 좌우 반구로 두뇌 BI 절반을 잘라. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_3/269_Figure-01.png" alt="269​​_Figure - 01" width="474" height="224" /> 그림 1. 쥐 반구의 중간보기에서 절단 위치 3 단계 오른쪽 첫 번째 컷 후 후각 망울를 수집합니다. 플래시 -80에서 액체 질소와 저장소의 표본을 동결 ° C. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_4/269_Figure-02.png" alt="269​​_Figure - 02" width="564" height="145" /> 그림 2. 후각 망울의 해부 4 단계 블레이드와 더몬트 제 5 포셉를 사용하여 두 번째 절단 후 전두엽 피질의 권리를 수집합니다. 플래시 -80에서 액체 질소와 저장소의 표본을 동결 ° C. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_5/269_Figure-03.png" alt="269​​_Figure - 03" width="566" height="220" /> 그림 3. 전두엽 피질의 절개 5 단계 오른쪽이 더몬트 5 번 집게의 도움으로 세 번째 절단 후 striatum (꼬리가있는 핵)를 수집합니다. 플래시 -80에서 액체 질소와 저장소의 표본을 동결 ° C. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_6/269_Figure-04.png" alt="269​​_Figure - 04" width="555" height="208" /> 그림 4. Striatum (꼬리가있는 핵) 해부 6 단계 해마를 수집, 최대 두뇌의 복부 측면을 넣고 다음 해마을 폭로 midbrain를 제거합니다. 이 더몬트 5 번 집게를 사용하여 피질의 해마을 해부하다. 플래시 -80에서 액체 질소와 저장소의 표본을 동결 ° C. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_7/269_Figure-05.png" alt="269​​_Figure - 05" width="559" height="191" /> 그림 5. 해마의 해부

<ol><li>Palkovits, M. Maps and guide to micro-dissection of the rat brain. , Elsevier. New York. (c.1988).</li>
<li>Swanson, L. W. Brain maps: structure of the rat brain. 3rd revised edition. , Elsevier Academic Press. (2004).</li>
</ol>

동물 홍콩의 대학 교육 및 연구에 살아있는 동물의 사용 (CULATR)에위원회에 의해 승인과 동물 사용을위한 건강 지침 국립 연구소에 따르면 연구에 동물의 사용을 위해 프로토콜에 따라 처리되었습니다.

다른 뇌 영역은 다른 neurodegenerative 질병에 함께 연결합니다. 해마는 알츠하이머와 관련된 반면 예를 들어, 전두엽 피질과 striatum는 파킨슨병의 질환과 관련. 뇌 정밀 미세 절개은 우리가보다 정확하게 질병 지역의 mRNA와 단백질 변화를 검색할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>현미경</td><td>Olympus Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>해부 도구</td><td></td><td></td><td>금속판, 핀셋, 메스 등. RNase를 제거하기 위해 각각 알루미늄 호일로 감싸 180oC에서 8시간 동안 가열함. 사용 전 얼음 위에서 차갑게 식혀 준비함. </td></tr></tbody></table>

rna 또는 특정 뇌 영역에서 단백질 추출에 대한 쥐 두뇌의 마이크로 해부

Micro-dissection of Rat Brain for RNA or Protein Extraction from Specific Brain Region

여러 지역에 쥐 두뇌의 미세 절개 다른 neurodegenerative 질병의 연구를 위해 매우 중요합니다. 이 동영상은 네 개의 주요 뇌 영역의 미세 절개는 후각 망울, 전두엽의 피질, striatum 신선한 쥐의 뇌 조직에서 해마를 포함 보여줍니다. RNA와 단백질 조직의 저하를 피하기 위해 해당 지역의 빠른 제거를위한 유용한 팁은 주어집니다.

RNA 또는 특정 뇌 영역에서 단백질 추출에 대한 쥐 두뇌의 마이크로 해부

다양한 신경퇴행성 질환 연구를 위해 쥐의 뇌를 여러 영역으로 미세 절개하는 것은 매우 중요합니다. 이 영상에서는 ...

안녕하세요, 홍콩 대학교 해부학과의 Quint입니다. 오늘은 쥐의 뇌를 전두엽 피질, 선조체, 시상 및 해마의 네 가지 주요 경로로 미세 절제하는 방법을 소개하겠습니다. 여기 뇌 절제 방법을 보여주는 모식도가 있습니다.세 번의 절단 과정이 있습니다. 첫 번째 절단면은 후각구와 전두엽 피질의 연결 부위에 위치합니다. 두 번째 절단면은 뇌량의 이온 부위에 위치합니다.세 번째 절단면은 phonics의 전방 팁에 위치합니다. 세 번의 절단 후, 네 개의 뇌 경로가 생성됩니다. 왼쪽에는 인자가 있습니다.오른쪽에 해마가 있습니다. 전두엽 피질은 첫 번째 절단면과 두 번째 절단면 사이에 위치합니다. 층의 일부인 코딩 뉴클레아제는 신선한 뇌 반구의 두 번째와 세 번째 절단면 사이에 위치합니다.뇌량(corpus callosum)과 전교차(anterior commissure)를 먼저 확인하는 것이 매우 중요합니다. 그 다음 세 곳의 절단 부위를 쉽게 찾을 수 있습니다. 첫 번째 절단면은 후각구(olfactory bulb)와 전두엽 피질(frontal cortex)이 연결되는 지점에 위치합니다.두 번째 절단면은 뇌량(corpus callosum) 부위에 위치하며, 세 번째 절단면은 전교차(anterior commissure)의 앞쪽 끝단에 위치합니다. 이제 현미경 하에서 뇌를 해부하겠습니다. 해부 도구들은 얼음 위에 보관합니다.DEPC 처리수로 헹군 후, 뇌를 아이스 콜드 메탈 플레이트 위에 올리고 두 개의 에코 반구로 이분합니다. 상구 및 전전두엽 피질을 분리하여 수집한 후 액체 질소에 보관합니다. 다음으로 전전두엽 피질을 수집합니다. 뇌량의 앞쪽 끝부분 주변을 절단하고, 수집한 전전두엽 피질을 절단하여 액체 질소에 보관합니다.다음으로, 짚 항목을 해부합니다. 전방 평면, 음성 및 전교차 섬유 부위에서 절개하여 외피 핵을 분리하고, 이를 수집하여 액체 질소에 보관합니다. 마지막으로, 해마를 해부하겠습니다.먼저, 해마를 충분히 노출시키기 위해 중뇌를 제거해야 합니다. 액체 질소에 수집하여 보관한 해마를 분리하십시오. 뇌의 서로 다른 영역은 각기 다른 신경퇴행성 질환과 관련이 있습니다. 예를 들어, 선조체는 파킨슨병과 관련이 있는 반면, 전두엽 피질과 해마는 알츠하이머병과 관련이 있습니다.뇌의 정밀한 미세 해부를 통해 해당 영역의 mRNA 및 단백질 변화를 검출할 수 있습니다.

micro-dissection-rat-brain-for-rna-or-protein-extraction-from

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

마우스 뇌의 특정 영역별 RNA 발현 프로파일링을 위해서는 정밀하고 재현 가능한 조직 수집 전략이 필요합니다. 본 문서에서는 관상면 뇌 절단과 조직 코어러(corer) 보조 미세 절제술을 모두 사용하는 프로토콜을 설명합니다. 결과 샘플에서 얻은 총 RNA의 수율과 품질은 상술한 방법의 유용성을 입증합니다.

총 RNA의 분리 및 다운 스트림 차세대 시퀀싱 및 유전자 발현 프로 파일링에 대한 개별 마우스 뇌 영역의 Microdissection 아닌 레이저 캡처 현미경 접근법

우리는 PTSD 환자의 특징 neuroendocrine 기능의 영구적 인 변경 및 지연, 장기, 과장된 공포 반응을 보여 후 외상 후 스트레스 장애 (PTSD)의 쥐 모델을 설명합니다. 동물 모델과 여기에 설명 된 방법은 기계론의이지만 주변 흰색 혈액 세포의 생체과 함께, 환자로 측정 할 수없는 뇌 핵에 생체, 수를 상호 연관 유용합니다.

PTSD의, 신경 Hematologic, 그리고 행동 상관 관계를 누설하는 행위에 대해서는 동물 모델에서 생체

이 비디오는 안락사된 쥐로부터 뇌 미세혈관을 분리하는 과정을 보여줍니다. 여기에는 뇌 해부, 조직 세척, 기계적 소화, 그리고 미세혈관의 순수한 분획을 분리하기 위한 반복적인 원심분리가 포함됩니다.

쥐의 뇌에서 신경혈관 단위를 분리하는 방법

이 비디오는 세로토닌 증후군의 영향을 받는 쥐의 뇌 조직에서 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용하여 세로토닌 수용체 RNA 합성을 감지하는 방법을 보여줍니다. 이 프로토콜에는 조직 전처리, 프로브 혼성화 및 효소 검출이 포함되어 현미경으로 세로토닌 수용체 RNA 발현을 시각화하고 정량화합니다.

쥐 뇌 절편에서 RNA 발현을 연구하기 위해 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용한 현장 혼성화

우리는 정량 실시간 PCR 및 / 또는 전체를 게놈 microarrays를 사용하여 후속 유전자 발현 분석을위한 부상을 쥐의 뇌의 냉동 섹션에서 hippocampal 뉴런 또는 단일 뉴런의 풍부한 인구를 얻기 위해 레이저 캡처 microdissection (LCM)를 사용하는 방법에 대해 설명합니다.

외상성 뇌 손상 후 뉴런 또는 유전자 발현 분석을위한 단일 뉴런의 강화 인구의 레이저 캡처 Microdissection

특정 조직에서 세포의 서브 세트의 유전자 발현 분석가 중대한 과제이다. 이 문서에서는 레이저 캡처 미세 절제와 빠른 immunolabeling 방법을 결합하여 특정 세포 집단에서 고품질의 총 RNA를 분리하는 방법에 대해 설명합니다.

셀 특정 부분 집단에서 RNA 분리 빠른 Immunolabeling과 결합 레이저 캡처 이외에 Microdissection을 사용하여

여기, 쥐 뇌 microvessels의 격리에 대 한 고 막 샘플의 준비에 대 한 방법을 설명 합니다. 이 프로토콜 허용 단백질와 개별 동물에서 항복 하는 풍부한 microvessel 생산의 명확한 장점이 있습니다. 샘플은 다음 뇌 microvascular 내 피에 강력한 단백질 분석에 사용할 수 있습니다.

신선 하 게 고립 된 쥐 두뇌 Microvessels에서 막 샘플을 준비 하는 간단 하 고 재현할 수 방법

우리는 성인 마우스 뇌 반구의 다른 해부 된 영역에서 microglia의 격리를위한 프로토콜을 제공하고, 전체 길이 전사체의 깊은 단일 세포 RNA 시퀀싱을위한 반자동 라이브러리 준비를 제공합니다. 이 방법은 건강과 질병에서 microglia의 기능적 이질성을 해명하는 데 도움이됩니다.

깊은 단세포 RNA 염기서열 분석에 대한 하나의 성인 마우스 뇌 반구에서 영역 별 Microglia의 격리

이 절차는 저렴하고 일반적으로 사용할 수있는 도구를 사용하여 고품질의 단백질과 RNA를 얻기 위해 이산 냉동 뇌 영역의 수집을 설명합니다.

다운스트림 분석을 위한 냉동 설치류 뇌 영역 모음

우리는 마우스 뇌 제거 및 신선한 뇌 조직에서 분리 된 영역의 해부를위한 실습, 단계별, 신속한 프로토콜을 제시합니다. 분자 분석을위한 뇌 영역을 얻는 것은 많은 신경 과학 실험실에서 일상화되었습니다. 이러한 뇌 영역은 시스템 레벨 분석을 위한 고품질 전사체 데이터를 얻기 위해 즉시 동결된다.

마우스 뇌를 기능적으로나 해부학적으로 다른 영역으로 미세 해부

레이저 포획 미세 해부와 미세 유체 RT-qPCR의 조합은 단일 뉴런 및 아교 세포에서 전사체를 측정 할 때 해부학 적 및 생물 공학적 특이성을 제공합니다. 정신 질환에 대한 시스템의 생물학적 접근 방식으로 창의적인 방법을 적용하면 중독에 대한 신경 염증 보상 가설과 같은 이해와 치료의 돌파구로 이어질 수 있습니다.

해부학적으로 특이적인 단일 세포 유전자 발현 방법을 사용한 중독 행동의 반보상 동인 조사

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RNA 또는 특정 뇌 영역에서 단백질 추출에 대한 쥐 두뇌의 마이크로 해부

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