Name: 하부 대정 맥 혈전증의 마우스 완전한 스테이 시스 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 34 s
Description: 학습하세요 하부 대정 맥 혈전증의 마우스 완전한 스테이 시스 모델을 통해 혈전 형성과 해소 과정을 연구하는 방법을. 정맥 벽과 혈전의 상호작용 및 급성에서 만성 염증으로의 전이를 정량적으로 분석할 수 있습니다.

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1. 마우스 아나스타샤 절차 <ol><li> 동물은 분당 0.5 리터 (기화기 제어)의 유속에서 자신의 케이지에서 제거하고 5% isoflurane과 100 % 산소로 가스 유도를위한 마취 미리 수술 유도 챔버에 배치됩니다. </li><li> 생쥐는 마취 유도 챔버에서 진정 챔버에서 제거하고 머리 depilatory가 (1min) 사용되는 경우 복부 복부는 전기 면도기로 면도, 또는 챔버 내에 유지집니다. </li><li> 아직 진정제를 맞았 는데도, 그들은 무게가 있지만, 내 눈을는 isoflurane과 산소를​​ 사용, 코 콘과 살균 안과 연고와 윤활 후 전신 마취 하에서 가열 장치를 순환 따뜻한 물 등의 recumbancy에 배치됩니다. 이 시점에서 산소 요금은 분당 0.2 리터로 축소됩니다. </li><li> 복부는 chlorhexidine 솔루션을 뿌려놓은 (chlorhexidine의 디아 세 테이트 빠르게 bacterialcidal 및 영구이다) 및 멸균 거즈로 세 번 닦아 또는 외과 사이트 깨끗한까지입니다. </li></ol> 2. 마우스 미세 수술 및 복구 절차 <ol><li> 복부 정중선 절개 (2cm)은 복부를 노출 피부와 복벽을 통해 홍채 가위로 이루어집니다. 멸균 생리 젖었 2x2in의 거즈는 동물의 왼쪽에 장내를 반영하는 데 사용됩니다. 마우스 restrainer는 하부 대정 맥 (IVC)의 장소 있도록 시각화에 들어가게된다. </li><li> 이 시점에서, 2 % 및 0.2 리터 isoflurance / 분 100 % 산소 비율의 유지 보수 수준은 수술의 나머지 부분에 사용됩니다. </li><li> 무딘 절개는 살균 작은 주걱의 면봉과 별도의 섬세한 홍채 절반 곡선 조직 집게를 사용하여 용이합니다. 관리들은 매우되기 위해 마우스 조직 처리로 촬영해야합니다. 복강을 입력시, 따라서 IVC의 시각화를 허용, 살균 드레이프로 창자를 반영하고 외면 화하다에 대한 멸균 생리 젖었 4x4in의 거즈를 사용합니다. </li><li> 사이드 지점이 7-0 반응 prolene의 봉합과 출혈도 잡았하는 동안 신장 혈관에서 장골의의 분기점 모든 IVC 뒤로 지점은, 불로 지졌죠 있습니다. </li><li> IVC는 신장 혈관 단 열등, 대동맥에서 분리됩니다. 7-0 prolene는 IVC를 ligate하는 데 사용됩니다. </li><li> 개복술 사이트는 2 계층 방식으로 닫힙니다. 우리 연구실은 복벽을 닫습니다 지속적인 패턴에 5-0 vicryl, 합성 봉합사를 사용합니다. 접착제 피부 접착제는 피부를 닫습하는 데 사용됩니다. 제거에 대한 외부 봉합이 없습니다. </li><li> 마우스가 다음 각 마우스 케이지에서 발견되며, 가열 램프 (최소 거리 - 24인치 거리 케이지에서)에서 (2 시간 45 분) 후 operatively 관찰 후, 원래의 주택으로 돌아왔습니다. 그것이 연구 목적을 방해하지 않는 경우 진통제 및 안티 - 염증성 에이전트를 사용할 수 있습니다. 과학 고통 약품을 보류 칭의, 동물, 그리고 ICUCA의 승인이 필요합니다. 저희 연구실은 Buprenorphine, 0.05-0.1 MG / kg SQ 쥐를위한 훌륭한 사전 및 사후 수술 진통 것을 발견했습니다. 또한, 4mg/kg (0.4 ML / 1 %의 솔루션의 kg)에 Lidocaine는 체계적인 진통제가 실험 결과를 혼란시킬 수있다 때 절개 사이트에 들어갈 수 있습니다. </li><li> 각 실험 그룹에서 위장 동물 IVC 또는 배수 지점 출혈도 잡았거나 불로 지졌죠하지 제외하고는 수술 접근에 사용되는 위의 절개를 받고있다. </li><li> 안락사는 설치류 동물에 대한 안락사에 미국 베티 의사회 가이드에 명시된 권장 사항에 따라 수행됩니다. </li></ol>

<ol><li>Naess, I. A., Christiansen, S. C., Romundstad, P., Cannegieter, S. C., Rosendaal, F. R., Hammerstrom, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+and+mortality+of+venous+thrombosis%3A+a+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Incidence and mortality of venous thrombosis: a population-based study.</a> J Thromb Haemost. 5, 692-699 (2007).</li>
<li>White, R. H., Keenan, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+race+and+ethnicity+on+the+incidence+of+venous+thromboembolism%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of race and ethnicity on the incidence of venous thromboembolism.</a> Thromb Res. 123, Suppl 4. S11-S17 (2009).</li>
<li>Heit, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epidemiology+of+venous+thromboembolism+in+the+community%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">The epidemiology of venous thromboembolism in the community.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28, 370-372 (2008).</li>
<li>Henke, P. K., Varga, A., De, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+vein+thrombosis+resolution+is+modulated+by+monocyte+CXCR2-mediated+activity+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Deep vein thrombosis resolution is modulated by monocyte CXCR2-mediated activity in a mouse model.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24, 1130-1137 (2004).</li>
<li>McDonald, A. P., Meier, T. R., Hawley, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+is+associated+with+impaired+thrombus+resolution+in+a+mouse+model+of+stasis+induced+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Aging is associated with impaired thrombus resolution in a mouse model of stasis induced thrombosis.</a> Thromb Res. 125, 72-78 (2010).</li>
<li>Myers, D., Farris, D., Hawley, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selectins+influence+thrombosis+in+a+mouse+model+of+experimental+deep+venous+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Selectins influence thrombosis in a mouse model of experimental deep venous thrombosis.</a> J Surg Res. 108, 212-221 (2002).</li>
<li>Myers, D. D., Hawley, A. E., Farris, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P-selectin+and+leukocyte+microparticles+are+associated+with+venous+thrombogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">P-selectin and leukocyte microparticles are associated with venous thrombogenesis.</a> J Vasc Surg. 38, 1075-1089 (2003).</li>
<li>Myers, D. D. J. r, Rectenwald, J. E., Bedard, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+venous+thrombosis+with+an+oral+inhibitor+of+P+selectin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Decreased venous thrombosis with an oral inhibitor of P selectin.</a> J Vasc Surg. 42, 329-336 (2005).</li>
</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

하부 대정 맥 혈전증의 마우스 완전한 스테이 시스 모델은 다양한 연령의 마우스의 여러 변종을 수행할 수 있습니다. 모델은 대부분의 무게가 최소한 20g의 마우스에 적합합니다. 정맥 혈전증의이 동물 모델은 조사관이 정맥 벽 및 occlusive 정맥 혈전 간의 염증 상호 작용을 공부하실 수 있습니다. 우리의 경험에서, 우리는 그룹 당 10 명 이상 동물이 혈전 무게, 정맥 벽 염증성 세포 카운트, 정맥 벽 단백질, 정맥 벽 유전자 표현 및 활동에 대한 전체 혈액이나 혈장 분석에 대한 집단 간의 통계적 중요성을 얻기 위해 필요한 것으로 나타났습니다 assays.

<table border="1"><tbody><tr><td> 용품 및 장비 </td></tr><tr><td> Isoflurane 가스 </td></tr><tr><td> Prolene 7-0 봉합사 </td></tr><tr><td> Vicryl 5-0 봉합사 </td></tr><tr><td> 스킨 접착제 </td></tr><tr><td> 아이 윤활유 </td></tr><tr><td> Nolvasan 솔루션 또는 정균 솔루션 </td></tr><tr><td> Stereomicroscope 범위 </td></tr><tr><td> MediCapture </td></tr><tr><td> 커튼 Applicators </td></tr><tr><td> 2x2 거즈 </td></tr><tr><td> 손난로 </td></tr><tr><td> 마취 기계 </td></tr><tr><td> 유리 구슬 악기 살균기 </td></tr><tr><td> 마이크로 수술 악기 </td></tr><tr><td> 복부 Restrainers </td></tr></tbody></table>

하부 대정 맥 혈전증의 마우스 완전한 스테이 시스 모델

Mouse Complete Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombosis

정맥 thromboembolism (VTE)은 깊은 정맥 혈전증 (DVT)과 폐 색전증 (PE) 모두를 포함합니다. 미국 (미국), 높은 병적 상태와 사망률에 요금은 심각한 건강 관심사 1-2 VTE합니다. 심장 질환과 뇌졸중 후 VTE는 세 번째 가장 일반적인 혈관 질환 3. 혼자 미국에서는, 매년 영향을 추정 90만명은 300,000 사망자가 연간 3 발생과 함께있다. 이 질병의 메커니즘을 연구 생체내 동물 모델에서 신뢰성이 필요합니다. 하부 대정 맥 혈전증의 마우스 전체 스태시스 모델을 사용하는 장점은 몇 가지 있습니다. 마우스 모델은 극적으로 비용을 절감, 제한된 가용성 테스트 에이전트의 아주 작은 볼륨 관리를위한 수 있습니다. 대부분의 유망 구체적인 염증과 응고 인자의 기능을 delineated 수 있도록 유전자 knockouts와 마우스에 대한 가능성이 있습니다. 현재 분자 assays은 정맥 벽, 혈전, 전체 혈액 및 assays를위한 플라즈마의 quantitation를위한 수 있습니다. 그러나,이 모델과 관련된 주요 관심사는 수술 크기 제약과 혈관의 취쇄성입니다. 또한, 작은 IVC 샘플 무게 (0.005 g을 의미)로 인해이 같은 실시간 중합 효소의 연쇄 반응 (RT - PCR), 서양 얼룩 같은 동물 조직에 대한 정확한 통계 분석을 위해 숫자, 혈전과 혈액 assays을 높일 필요가 있습니다 효소 링크된 면역 (엘리사), zymography, 정맥 벽 및 혈전 셀룰러 분석하고, 전체 혈액 및 플라즈마 assays 4-8. 스테이시 모델의 주요 단점은 혈액 흐름의 부족은 혈전과 정맥 벽에 관리 체계 치료 대리인의 최대한의 효과를 억제한다는 것입니다.

하부 대정 맥 혈전증의 마우스 전체 스태시스 모델은 정맥 벽 조직 및 혈전의 같지는 금액을 산출. 이것은 정맥 벽과 occlusive 혈전 사이에 만성 염증으로 급성에서 진행을 평가 상호 작용을 평가하기위한 유용한 입증되었습니다.

정맥혈전색전증(VTE)은 심부정맥혈전증(DVT)과 폐색전증(PE)을 모두 포함합니다. 미국(U.S.) 내에서 높은 이환율과...

본 절차의 전반적인 목표는 하대정맥(IVC)을 결찰하여 완전한 정체를 유발함으로써 혈전증을 형성하고, 이를 통해 혈전 생성 및 해소를 연구하는 것입니다. 이를 위해 먼저 복부 정중 절개를 통해 IVC를 노출시킵니다. 그다음, 모든 후방 및 측방 배출 분지를 찾아 전기 소작하거나 결찰합니다.그 다음, 신정맥 아래쪽에서 하대정맥(IVC)을 대동맥으로부터 분리하고 결찰합니다. 마지막으로, 분자 평가를 위해 다양한 시점에서 하대정맥과 혈전물을 채취합니다. 결과적으로, 6일까지의 혈전 부담 정도를 보여주는 결과를 얻을 수 있습니다.하대정맥 결찰 마우스 모델은 유전자 결손 마우스를 연구하기 위해 본 연구실에서 개발되었습니다. 이 프로토콜을 수행하는 데 필요한 미세수술 기법으로 인해 절차 단계를 습득하기 어렵기 때문에, 본 수술 모델의 시각적 시연이 매우 중요합니다. 우선, 5% isof fluorine과 100% oxygen을 분당 0.5 liters 속도로 공급하는 마취 전 유도 챔버에서 동물을 마취하십시오.동물을 챔버에서 꺼내어 등을 바닥에 대고 눕힌 뒤, 전기 바리캉으로 복부 쪽의 털을 깎습니다. 다음으로 동물의 체중을 측정합니다. 그 후 멸균 안연고를 사용하여 눈에 윤활제를 도포합니다.isof fluorine와 산소를 이용한 전신 마취 하에 동물을 따뜻한 온수 가열 패드 위에 등으로 눕힙니다. 복부를 클로르헥시딘 용액으로 분무하고 멸균 거즈로 닦아냅니다. 수술을 시작하기 위해 수술 부위가 깨끗해질 때까지 복부를 소독합니다.홍채 가위(iris scissors)를 사용하여 피부와 복벽을 따라 복부 정중선을 절개하고, 식염수에 적신 멸균 거즈를 사용하여 복부를 노출시킵니다. 동물의 장을 왼쪽으로 밀어냅니다. 마우스 고정 장치를 사용하여 하대정맥(inferior vena cava, IVC)을 노출시킵니다.이 단계부터 수술이 끝날 때까지 2% isof fluorine과 100% oxygen을 분당 0.2 liters의 속도로 유지하여 마취 상태를 유지하십시오. 멸균 면봉과 정밀한 iris tissue forceps를 사용하여 복부 근막을 둔성 박리함으로써 IVC와 모든 분지들을 노출시키십시오.먼저 신정맥부터 장골 분기점까지의 모든 하대정맥(IVC) 후분지들을 소작하십시오. 그런 다음 7-0 비흡수성 프로린 봉합사로 측분지들을 결찰하십시오. 신정맥 바로 아래쪽에서 하대정맥을 대동맥으로부터 분리하십시오.7-0 proline 봉합사로 하대정맥(IVC)을 결찰합니다. 5-0 Vicryl 합성 봉합사를 사용하여 복벽을 봉합합니다. 그런 다음 피부 접착제를 도포하여 피부를 폐쇄합니다.가열 램프가 설치된 회복 케이지에서 동물을 관찰한 후, 원래의 사육 상자로 돌려보냅니다. 본 분석에서는 안락사 시점의 대조군 마우스와 IVC 결찰 및 혈전증을 유도한 동물을 비교합니다. 2일째 또는 6일째에 IVC 혈전과 그와 관련된 정맥벽을 제거하여 무게를 측정했습니다.혈전 무게 측정은 연구자가 혈전 형성 정도와 시간 경과에 따른 해소 정도를 기록할 수 있게 합니다. 이는 내피세포 활성화와 관련된 염증 반응의 지표입니다. 또한, 이 측정값은 치료제가 염증 및 정맥벽 혈전량을 줄이는 데 얼마나 효과적인지를 보여주는 유용한 지표가 됩니다. 본 과정에서는 대동맥과 함께 하대정맥(IVC)을 적출하였습니다.파라핀 매립 절편을 슬라이드에 올린 후 hematoxylin and eosin으로 염색하였습니다. 이 그래프는 대조군 쥐와 실험군 쥐 조직 내 다형핵 백혈구(PMN)의 수를 나타냅니다. 정맥벽 염증 세포 집단의 측정은 정맥 혈전이 존재하는 정상 동물의 정맥벽에서 나타나는 자연적인 급성에서 만성으로의 염증 반응을 기록하는 데 사용되며, 2일 차의 급성 염증 반응에서는 주로 호중구가 관찰되어야 합니다.이 그림에서 나타낸 바와 같이, 감염이 없는 경우 정맥벽의 호중구 집단은 2일 후에 감소해야 합니다. 이는 정맥 혈전증 마우스 모델에서의 결과입니다. 여기에서는 정맥벽 단핵구의 수를 비교하였습니다.더욱 아급성과 만성적인 정맥벽 염증 반응에서는 증가 양상이 나타날 것입니다. 정맥벽 단핵구 집단에서 단핵구는 단백질 분해 효소를 분비하며, 이는 정맥 혈전의 자연적인 해소를 촉진하는 것으로 밝혀졌습니다. 감염이 없는 경우 시간이 지남에 따라 이러한 과정이 진행됩니다. 이제 이 영상을 통해 IVC 결찰 모델을 수행하는 방법에 대해 충분히 이해하셨을 것입니다.이 모델은 혈전 생성 및 시간에 따른 혈전 해소를 연구하는 데 매우 유용합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

내피 활성화 및 일부 혈액 스테이시, Virchow의 깡패의 두 가지 구성 요소로 인해 정맥 혈전 형성 유형의 하부 대정 맥 결과의 내부 표면에 내피 활성화 전해 유도.

정맥 혈전증의 전해 하부 대정 맥 모델 (EIM)

이 비디오는 마우스 모델에서 오른쪽 총경동맥을 차단하고 마우스를 저산소 환경에 노출시켜 혈전성 뇌졸중을 복제하는 절차를 보여줍니다. 이 과정은 뇌로 가는 혈액과 산소의 흐름을 감소시켜 혈전 형성과 뇌 손상을 유발합니다.

마우스 모델에서 저산소증 및 허혈을 통한 혈전성 뇌졸중 유도

우리가 설명 여기에 열 등 한 베 나 정 맥 협 착 증 깊은 정 맥 혈전 증의 murine 모델. 이 모델이 혈액 흐름 제한, 인 간에 있는 정 맥 혈전 증의 주요 트리거 중 하나.

열 등 한 베 나 정 맥의 협 착 증: 깊은 정 맥 혈전 증의 Murine 모델

현재 프로토콜 스테이 시스 모델을 사용 하 여 정 맥 혈전 증을 얻기에 단계를 설명 합니다. 또한, 우리는 시간이 지남에 혈전 형성 및 해상도 측정 하는 비-침략 적 방법을 사용 하는.

스테이 시스 고주파 초음파에 의해 모니터링 하는 쥐에 의해 유도 된 깊은 정 맥 혈전 증

대반 카발 누공은 두 벽을 통해 뮤린 적외선 대인 대공을 열등한 정맥으로 뚫고 열등한 정맥 카바의 부분 결찰을 통해 유출에 협착증을 생성하여 만들어졌습니다. 이 재현 가능한 모델은 중앙 정맥 협착증을 연구하는 데 사용할 수 있습니다.

유출 협착증을 가진 Aortocaval 누공을 사용하여 중앙 정맥 협착증의 뮤린 모형

여기서, 우리는 나사 색전 방법을 통해 우수한 처상 부비동 (SSS) 혈전증의 새로운 Sprague-Dawley (SD) 쥐 모델을 확립하고, 모델의 안정성과 신뢰성을 검증하였다.<br...

스레드 색전증 방법을 통해 우수한 처상 부비동 폐색의 쥐 모델 설립

이 논문은 정맥 결찰을 달성하기 위해 혈관 클립을 사용하여 마우스 암 모델에서 정맥 혈전증을 평가하기 위한 최적화된 방법을 제시하는 것을 목표로 합니다. 최적화는 혈전증 관련 측정의 변동성을 최소화하고 인간 암 관련 정맥 혈전증과의 관련성을 향상시킵니다.

암의 마우스 모델에서 정맥 혈전증 분석

이 프로토콜은 비혈전성, 혈전성 및 혈전 후 심부 정맥에서 정맥 성형 풍선(VB) 중재를 테스트하기 위한 생존 설치류 모델을 제시합니다.

설치류 하부 정맥 Cava 정맥 성형술 풍선 모델

세포 및 분자 neotissue 형성에 대한 우리의 지식을 개선하기 위해, TEVG의 쥐 모델은 최근에 개발되었다. 이식은 C57BL / 6 마​​우스의 신동맥 대정맥 개재 이식으로 이식되었다. 이 모델은 우리의 임상 연구에서 달성 된 것과 유사한 결과를 얻을 수 있지만, 훨씬 단축 된 시간 과정을 통해.

마우스 모델에서 하대 정맥 끼어 이식의 주입

암 종양 주변 조직뿐만 아니라 로컬 프 및 항 염증 매개 의해 영향 복잡한 질환이다. 따라서, 오히려 피하 모델보다 이방성 주입 모델은 방식으로 더 잘 모방 인간의 병리 암의 진행을 연구하기 위해 유용 할 수 있습니다.

마우스의 유방 지방 패드에 유방암 세포의 소성 주입은 종양의 성장을 연구한다.

학습하세요 하부 대정 맥 혈전증의 마우스 완전한 스테이 시스 모델을 통해 혈전 형성과 해소 과정을 연구하는 방법을. 정맥 벽과 혈전의 상호작용 및 급성에서 만성 염증으로의 전이를 정량적으로 분석할 수 있습니다.

하부 대정 맥 혈전증의 마우스 완전한 스테이 시스 모델

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