Name: Leptospiral 표면 노출 단백질의 단백질 형광 분석 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-01T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 47 s
Description: 배우세요 Leptospira 표면 단백질 형광 분석법으로 외막 무결성을 유지하며 표면 노출 단백질을 정확히 평가하는 방법입니다. 이 기술은 병원성 인자 식별에 활용됩니다.

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이 연구는 보건 서비스 교부금에 의해 지원되었다 AI - 34431 알레르기 및 전염병 국립 연구소에서와 VA 메디컬 연구 기금 (DAH로)로 (DAH)을.

1. 유리 슬라이드에 Leptospira의 고정 <ol><li> Leptospira interrogans는 클래스 BSL2 병원체이다. 라이브 전지 작업은 같은 장갑을 끼고, 실험실 - 코팅 및 살균 - 모자 pipetting 단계로 적절한 처리가 필요합니다. </li><li> 30 ° C 그들이 도달할 때까지 중순에 약 6 일 늦은 로그 단계 (5 X 10 8 셀 / ML 5 × 10 7 밀도). 1 %의 토끼 혈청과 보충, EMJH medium11에서 Leptospira 그로 </li><li> 상온에서 7 분 ~ 2000 XG에서 원심 분리하여 문화를 수확. </li><li> 흡인에 의해 표면에 뜨는를 제거하고 부드럽게 인산염의 펠렛을 resuspend 5 X 10 8 셀 / ML의 최종 농도 호수 (PBS) -5 MM에게 MgCl 2, pH7.2를 버퍼. </li><li> 두 잘 챔버 유리 슬라이드의 각 웰에 세포 현탁액 1 ML을 추가하고 30 품어 ° C를 80 분에 대한 세포를 준수하도록합니다. </li><li> 조심스럽게 흡인하여 언바운드 세포가 들어있는 액체를 제거합니다. </li><li> / 잘 PBS - 5 MM MgCl 2 2 % paraformaldehyde 1 ML 추가하여 유리 슬라이드에 남아있는 그대로 박테리아를 수정. 30 40 분 품어 ° C. 이러한 슬라이드 표면 단백질의 노출 평가를위한 것입니다. </li><li> 하위 표면 단백질을 평가 제어 슬라이드에, 얼음처럼 차가운 메탄올 1 ML / 물론 100 %로 고정하여 외부 막을 permeabilize. 20 분 -20 ° C에서 알을 품다. 메탄올은 여러 가지 방법으로 행동 : 그것은 외부 막을 permeabilizes 단백질 denaturates하고, 유리 슬라이드에 수정 세포. </li><li> 열망의 요원을 고정 제거합니다. </li></ol> 2. 특정 항체와 라벨링 <ol><li> / 잘 차단 버퍼 (Difco Leptospira 농축 EMJH) 1 ML 추가하여 불특정 바인딩을 차단합니다. 90 분 30 ° C에서 알을 품다. </li><li> 특정 항체 (면역 토끼 세라 드나 마우스 단클론 항체, OmpL54 10 특정 여기 polyclonal 토끼 세라, FlaA1 12, 및 OmpL1 13)과 아무런 항체를 포함하지 미리 면역 토끼 세라이나 마우스 고행 유체 (부정적인 컨트롤로 활용시)에 희석 버퍼를 차단. 각 항체에 대한 Dilutions는 경험적으로 세포에 항원 - 항체 반응과 단백질의 풍부한, 항체 titer에 따라 결정해야합니다. 일반적인 범위는 1:600​​으로 1시 50분입니다. </li><li> 흡인에 의해 차단 버퍼를 제거하고 1 ML / 음의 희석 차 항체를 추가합니다. </li><li> 1 시간 30 ° C에서 알을 품다. </li><li> 흡인하여 액체를 제거하고 PBS (1 ML / 음)와 우물을 세 번 씻으십시오. </li></ol> 3. leptospires의 시각화 <ol><li> 1 ML / 음의 알렉사 희석 플루어 488 - 라벨 보조 항체 (염소 안티 - 토끼 IgG 또는 염소 방지 마우스 IgG)를 1:2000 및 형광 핵산 얼룩, 4'6 - diamidino - 2 - 페닐 - 인돌 dihydrochloride을 (추가 DAPI)는 0.25 μg / 버퍼를 차단에 ML의 최종 농도로 희석. 이 단계는 항체 바인딩 및 바인딩, 각각 항체의 독립 모든 spirochetes의 존재의 확인을 보장합니다. </li><li> ° C 45 분 30에 슬라이드를 품어. </li><li> 흡인하여 액체를 제거하고 증류수 (1 ML / 음)로 두 번 PBS와 한 우물을 씻으십시오. </li><li> 실과 유리 슬라이드와 ~ 10 분 건조 공기의 접착 스트립을 제거합니다. </li><li> 골드 방지 퇴색 설치 매체 (슬라이드 당 20 μl 2 X)과 24 X 50mm 커버 슬립을 연장 추가합니다. </li><li> 어둠 속에서 실온에서 하룻밤 품어. 이 단계는 설치 매체 (강화) 치료하도록하는 것이 필요합니다. </li><li> 매니큐어로 커버 슬립을 봉쇄. </li><li> DAPI에 대한 시안 / 블루 감지 필터와 알렉사 플루어 488에 녹색 검색 필터를 사용하여 형광 현미경으로 얼룩을 시각화. 샘플의 정확한 표현이 만들어되었는지 확인하려면 각 샘플에 대한 전체 챔버 영역을 평가할 수 있는지 확인하십시오. </li><li> 이미징 각 샘플에 대한 대표적인 필드로 데이터를 기록합니다. 이미지 알렉사 플루어 488 형광이 모든 샘플에 대해 같은 노출 시간을 사용하면. 일관된 노출 시간을 사용하면 테스트 항원 대 컨트롤과 함께 결과를보다 정확한 비교를하실 수 있습니다. </li></ol> 4. 대표 결과 : 표면 및 하위 표면 단백질에 대한 항체를 사용하여 Leptospira interrogans 세포와 표면 IFA 결과의 예는 그림 2에 표시됩니다. 실질적인 형광이 표면 (그림 2A) 노출 관심 단백질에 대한 손상 leptospires과 샘플에 감지되면 시험은 긍정적인 것으로 간주됩니다. 보통 긍정적인 검사 (여기 OmpL54을 표면 노출)에, 약 같은 형광 강도는 그것은 표면 하의에 대한 항체를 사용하여 바깥쪽 - 멤브레인 무결성에 대한 부정적인 컨트롤을 포함하는 것이 필수적입니다 (그림 2A) 온전하고 permeabilized 모두 세포에서 관찰됩니다 선호 periplasmic 단백질 (예 : leptospiral FlaA1, 그림. 2B). 데이터는 외부 세포막이 손상 듀리 유지했음을 표시하는 경우에만NG 실험, 하위 표면 단백질에 대한 즉, 항체가 그대로 세포 (그림에서와 같이 permeabilized 샘플에 비해 형광 또는 훨씬 약한 형광 안돼. 2B)에 반응하지 그것은 관심의 단백질 (S)가 있다고 결론을 내렸다 수 있습니다 표면은 노출. 추가 부정적인 제어로 사전에 면역 세라 (polyclonal 항체의 경우)와 실험의 포함은 모호하지 않은 데이터를 위해 필수적이며, 그대로 또는 permeabilized 세포 (그림 2A, 2C)에 상당한 형광를 얻을 수 없습니다. 얼룩 DAPI은 부정적인 결과가 (NO 알렉사 플루어 488 형광) 관찰 때 leptospires을 시각화하는 것이 필요합니다. propidium 요오드화물의와 Counterstaining 것은 DAPI에 수용 대안입니다. 이 방법은 같은 풍요의 다른 항원에 비해 하나의 항원에 있지만 적은 표면에 노출된 epitopes로 인정되고 antigenic epitopes를 노출의 여러 표면으로 인해 발생했을 수 있습니다 질적보다는 밝은 형광으로 양적됩니다. 따라서 형광 강도는 등 서로 다른 단백질 간의 손상 대 permeabilized 세포 형광하지 농도와 같은 항체의 반응을 비교하는 데 사용할 수 있습니다. 이 구별은 훨씬 적은 형광이 permeabilized 세포 (그림 2C)에 비해 그대로 세포에서 관찰 어디에 모호한 결과를 얻을 때 중요하다. 이러한 결과 중 단백질 (그대로 세포의 일부가 아닌 구체적인 배경 얼룩 포함) 하위 표면 위치에 있음을 나타냅니다, 항체는 여러 수도 우선적으로 메탄올의 permeabilization 또는 단백질 후 노출이 아닌 기본 epitopes에 구속력이 지역화 사이트 같은 다른 spirochete, Borrelia burgdorferi 14 ERP 및 ELP 단백질에 대해 설명했다. 각각의 경우에, 이와 같은 모호한 IFA 결과가 관심의 단백질 표면 노출 여부 10 여부를 확인하는 등 표면 biotinylation 또는 표면 proteolysis로 대체 접근이 필요합니다. <img src="/files/ftp_upload/2805/2805fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> Leptospira interrogans spirochetes의 단백질 형광 분석 표면에 대해 그림 1. 플로우 차트. 첫째, 세포 현탁액 1 ML은 두 잘 챔버 슬라이드의 각 잘 추가 (각 실험에 대해 적어도 두 개의 슬라이드)와 준수 leptospires위한 incubated입니다. 다음 leptospires 그대로 외부 멤브레인 (OM)와 permeabilized OM과 샘플 1 ML / 물론 100 % 차가운 메탄올과 샘플 / 음 2 % paraformaldehyde (PFA) 1 ML 추가하여 챔버 슬라이드에 고정됩니다. 다음 leptospires 30에서 표면 하의 단백질 (주 AB의) · 90 분 C에 대한 제어 항체와 함께 표면 노출 단백질을 인식 항체와 incubated 있습니다. 그런 다음, 기본 항체는 / 잘 알렉사 플루어 488 복합 이차 항체 1 ML과 부화에 의해 감지됩니다. 마지막으로, 세포는 형광 현미경에 의해 시각입니다. <img src="/files/ftp_upload/2805/2805fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> leptospiral 단백질의 그림 2. immunofluorescence 표면 분석. Leptospira interrogans spirochetes는 면역 및 Pre - 면역 세라와 읽혔어요하고, 부정적인 결과는 spirochetes의 존재를 입증하는 DAPI counterstain와 결합했다. 녹색 형광 필터는 알렉사 플루어 세포 DNA에 바인딩 DAPI를 검색에 노출 단백질 및 파랑 / 시안 형광 필터를 표면에 바인딩 488 레이블 차 항체를 감지하는 데 사용되었다. A) Leptospires는 표면에 노출된 단백질 OmpL54 10 인식 항체와 탐지. B) 세포는 periplasmic 표면 하의 단백질, FlaA1 (대조군)에 대한 항체와 탐지. C) 세포 leptospiral porin, OmpL1에 대한 항체와 탐지. leptospires에 토끼 세라의 바인딩은 알렉사 플루어 488 복합 염소 안티 - 토끼 IgG의 파편 발견했다. 모든 이미지는 4 초 동안 노출 후 촬영됩니다.

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</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

우리의 표면 IFA 기술은 다양한 borrelial 15, 16 leptospiral 12, 17 단백질의 표면 노출을 증명하기 위해 사용하는 것과 비슷합니다. 표면 IFA 방법의 내용은 유리 슬라이드에 충실하기 위해 Leptospira 세포의 경향을 활용하면서 외부 멤브레인 무결성을 유지하기 위해 세포의 조작을 최소​​화하기 위해 설계되었습니다 여기에 설명되어 있습니다. 이 메서드는 이전에 다음 ID로 출판 프로토콜 12, 17보다 바깥쪽 - 막 안정화 버퍼 (PBS 5 MM MgCl 2) 적은 세척 단계를 씻는 paraformaldehyde의 낮은 농도 (4 % 대 2 %)이 포함됩니다. 또한, 우리의 표면 IFA 방법은 정확한 데이터 해석을위한 필수적인 조절의 중요성을 강조하고 있습니다. 방법의 한계는 관심의 단백질의 에피토프 (들)을 표면 노출 인식 능력이 특정 항체의 가용성을 필요로한다는 것입니다. 어떤 경우에는, 다른 표면 단백질이나 li...

<table border="1"><tbody><tr><th> 시약의 이름 </th><th> 회사 </th><th> 카탈로그 번호 </th><th> 댓글 (옵션) </th></tr><tr><td> 두 잘 챔버 유리 슬라이드 </td><td> 랩 - 테크 </td><td> 177380 </td><td></td></tr><tr><td> 토끼 혈청 </td><td> 로클랜드 Immunochemicals </td><td> D209 - 00-0100 </td><td></td></tr><tr><td> Leptospira 농축 EMJH </td><td> BD Difco </td><td> 279510 </td><td></td></tr><tr><td> 알렉사 플루어 488 염소 안티 - 토끼 IgG (H + L) </td><td> Invitrogen / 분자 프로브 </td><td> A - 11034 </td><td></td></tr><tr><td> 알렉사 플루어 488 염소 안티 - 마우스 IgG (H + L) </td><td> Invitrogen / 분자 프로브 </td><td> A - 11029 </td><td></td></tr><tr><td> 4&#39;6 - diamidino - 2 - 페닐 - 인돌 dihydrochloride (DAPI) </td><td> Invitrogen / 분자 프로브 </td><td> D1306 </td><td></td></tr><tr><td> 골드 안티 페이드 설치 매체를 연장 </td><td> Invitrogen / 분자 프로브 </td><td> P36930 </td><td> 사용하기 전에 실온에 평형 </td></tr><tr><td> Fisherfinest 프리미엄 커버 유리 </td><td> 어부 </td><td> 12-544-14 </td><td></td></tr><tr><td> 형광 현미경 </td><td> 자이스 혈구 </td><td> Axioskop 40 </td><td></td></tr></tbody></table>

leptospiral 표면 노출 단백질의 단백질 형광 분석

Immuno-fluorescence Assay of Leptospiral Surface-exposed Proteins

박테리아 표면 단백질은 호스트 세포와 직접 접촉과 환경 1 영양분의 이해에 관여하고 있습니다. 이러한 이유로, 세포 지방화는 박테리아 단백질의 기능 역할에 대한 통찰력을 제공할 수 있습니다. 세균성 단백질의 표면 지방화는 pathogenicity의 메커니즘에 관련된 독성 요소의 식별 향한 중요한 단계입니다. leptospiral 세포막의 2-5 fractionating위한 방법은 lipoproteins 대 transmembrane의 OMPs으로 바깥쪽 - 막 단백질 (OMPs)의 특정 클래스에 대한 선택 수 있으며, 따라서 misclassification 발생할 수 있습니다. 이 가능성은 구조적 차이가 어떻게 그들이 바깥 막으로 연결되어 있기 때문입니다. Lipoproteins은 N - 터미널 지질 잔기 (세명 지방산)과 지질 이중층의 phospholipids 6, 7 사이의 소수성 상호 작용을 통해 세포막과 연결되어 있습니다. 반면, transmembrane의 OMPs 일반적으로 배럴과 같은 구조 8, 9 배열 β - 시트 amphipathic에 의해 지질 이중층에 통합되어 있습니다. 또한, 바깥쪽 - 막의 단백질의 존재는 반드시 단백질 또는 도메인이 표면에 노출되는 것을 보장하지 않습니다. Spirochetal 외부 점막이 하위 표면 단백질의 세포와 포함의 부드러운 조작과 관련된 할거 그러므로 연약과 방법 것으로 알려져하는 것은 바깥 막의 무결성을 평가하기 위해 제어합니다. 여기, 우리는 직접적으로 손상 leptospires에 단백질의 표면 노출을 평가하기 위해 immunofluorescence 분석 (IFA) 메소드를 제시한다. 이 방법은 항원에 특정한 항체에 의해 leptospiral 표면 단백질의 인식을 기반으로합니다. 여기에, OmpL54 10 특정 항체는 기본, 표면 노출 epitopes에 aftero 바인딩 detetcted 있습니다. 손상 대 permeabilized 세포에 항체 반응의 비교는 단백질 leptospiral 표면에 선택적으로 존재 여부 세포 배포 평가를 가능하게합니다. 외부 막의 무결성이 선호 periplasm에있는 하나 이상의 표면 하의 단백질에 항체를 사용하여 평가해야합니다. 표면 IFA 방법은 특정 항체가 사용할 수있는 어떤 leptospiral 단백질의 표면 노출을 분석하는 데 사용할 수 있습니다. 방법의 유용 성과 한계는 모두 사용된 항체가 기본 epitopes에 바인딩할 수 있는지 여부에 따라 달라집니다. 항체가 자주 재조합 단백질, 기본, 표면 노출 단백질의 epitopes에 대한 사육되기 때문에 인정되지 않을 수 있습니다. 그럼에도 불구하고, 표면 IFA 방법은 그대로 세균 표면의 구성 요소를 공부를위한 유용한 도구입니다. 이 방법은 leptospires뿐만 아니라 다른 spirochetes 및 그람 음성 세균에 대해뿐만 아니라 적용할 수 있습니다. OMPs의 표면 노출에 대한 강한 결론에 대한 여러 셀 로컬 라이제이션 방법을 포함한 종합적인 접근 방식은 10 권장합니다.

leptospiral 단백질의 표면 노출을 평가하기위한 효율적인 방법이 설명되어 있습니다. 방법은 특별히 leptospiral 세포의 연약한 바깥 막의 중단을 방지하도록 설계되었습니다. 이 기술은 몇 가지 부정적인 컨트롤의 고용은 바깥 막과 항체 반응의 특이성의 무결성을 평가해야합니다.

Leptospiral 표면 노출 단백질의 단백질 형광 분석

박테리아 표면 단백질은 호스트 세포와의 직접적인 접촉 및 환경으로부터의 영양분 흡수에 관여합니다 1. 이러한 이유로, 세포...

박테리아 표면 단백질은 숙주 세포와 직접 접촉하며 환경으로부터 영양분을 섭취하는 과정에도 관여합니다. 따라서 박테리아 단백질의 표면 국소화는 병원성 인자를 식별하는 데 있어 핵심적인 단계입니다. 본 영상에서는 기존에 기술된 면역형광법과 비교하여, 온전한 leptospira 상에서 단백질의 표면 노출 정도를 평가하는 방법을 제시합니다.여기에 설명된 방법의 세부 사항은 외막의 무결성을 유지하기 위해 세포 조작을 최소화하도록 설계되었습니다. 먼저 lepto 나선형 현탁액을 유리 챔버 슬라이드에 첨가합니다. 세포가 부착될 수 있도록 슬라이드를 배양합니다. 부착된 lepto 나선형 세포는 표면 단백질 평가를 위해 외막의 온전한 상태를 보존하고자 2% paraform aldehyde로 고정하거나, 하부 표면 단백질을 노출시키기 위해 외막을 투과성 있게 만드는 100% methanol로 고정합니다.고정된 leptospire 나선체는 특정 항체로 라벨링한 후 형광 표지된 2차 항체를 통해 시각화합니다. 표면에 국한된 단백질은 온전한 세포와 투과성 세포 모두에서 라벨링 및 관찰이 가능하지만, 표면 하부 단백질은 투과성 세포에서만 관찰할 수 있습니다. 이 방법은 단백질이 박테리아 표면에 위치하여 숙주-병원체 상호작용에서 역할을 하는지 여부와 같이 미생물 병원성 분야의 핵심 질문들에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다.본 연구에서 제시하는 방법은 세포 조작을 최소화하도록 설계되었으며, 이는 세포막의 무결성을 유지하는 데 도움이 됩니다. 이 방법은 이전에 설명된 분석법보다 더 낮은 농도의 고정제를 사용하며, 세포막 세척 시 안정화 완충액을 사용하고 세척 단계 수를 줄였습니다. 또한, 본 표면 면역형광법은 정확한 데이터 해석을 위해 필수적인 양성 및 음성 대조군 모두의 중요성을 강조합니다.시연은 제 실험실의 박사후 연구원인 Maria Pinney 박사가 진행하겠습니다. Leptospira interrogans는 BSL 2 등급의 병원체입니다. 살아있는 세포를 다룰 때는 적절한 취급 및 주의가 필요합니다.실험복과 장갑을 항상 착용해야 합니다. 생존 세포의 모든 피펫팅 및 개방 용기 취급은 층류 생물안전 작업대(laminar flow biosafety hood) 내에서 수행해야 합니다. 1% 토끼 혈청이 첨가된 EMJH 배지에서 30 °C로 leptospira를 배양하며, 박테리아가 대수 증식기 중기에서 후기에 도달했을 때 사용합니다.약

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

특발성 질환에 적응 면역의 미생물 목표 식별은 효소 연결된 immunospot 분석을 사용하여 수행할 수 있습니다.

효소 링크된 Immunospot 분석 (ELISPOT) : 미생물 항원 반대 예뻐 - 1 세포 면역 반응의 부량

이 동영상은 백신의 면역원성 당단백질 수치를 평가하기 위해 고안된 간접 효소 결합 면역흡착 분석 또는 ELISA 샌드위치 면역포획 분석을 보여줍니다. 당단백질 특이적 항체를 포함하는 분석 플레이트는 참조 및 테스트 백신을 포함하여 연속적으로 희석된 백신 샘플과 함께 배양된 후 면역 분석을 통해 테스트 백신의 당단백질 함량을 정량화합니다.

샌드위치 ELISA를 사용하여 백신의 면역원성 당단백질 함량 측정

이 비디오는 단순 포진 바이러스-1 감염에서 감염된 세포 단백질 0, ICP0 이동을 모니터링하는 방법을 보여줍니다. Post-de novo synthesis, ICP0는 핵으로 전위되었다가 나중에 감염이 진행되는 동안 세포질로 이동합니다. 면역형광 현미경 검사는 단백질의 세포 내 국소화를 밝히고 분석하여 감염 단계 전반에 걸친 단백질의 이동에 대한 통찰력을 제공합니다.

감염된 세포의 바이러스 단백질 국소화를 위한 면역형광 기술

생체 내에서 상세히 T 세포 반응을 모니터링 할 수있는 능력은 면역 반응에 대한 이해의 발전을 위해 중요하다. 여기에서 우리는 유동 세포 계측법에 의해 동시에&gt; 250 매개 변수를 평가하는 생체 내 T 세포의 분석에서 형광 타겟 어레이 (FTA 체결)의 사용을 설명한다.

T 세포 반응의 평가를위한 형광 대상 배열의 사용<em&gt; 생체 내</em

혈청에서 인플루엔자 뉴라미니다아제(NA) 억제 항체 역가를 측정하기 위한 효소 결합 렉틴 분석법(ELLA)을 설명합니다. 이 분석은 땅콩 응집소를 사용하여 NA가 fetuin으로 코팅된 96웰 플레이트에서 시알산을 제거할 때 접근할 수 있는 갈락토오스 잔류물을 정량화합니다.

효소 결합 렉틴 분석에 의해 인플루엔자 뉴 라미니다 아제 억제 항체가를 측정

여기에서 우리는 광견병 백신에 있는 면역원성 당단백질 내용을 결정하기 위하여 간접적인 ELISA 샌드위치 면역 포착을 기술합니다. 이 시험은 당단백질 트리머를 인식하는 중화 단일클론 항체(mAb-D1)를 사용한다. 그것은 생산 하는 동안 백신 힘의 일관성을 따라 생체 내 NIH 테스트에 대 한 대안.

광견병 백신 효능을 평가하기 위한 시험관 내 ELISA 테스트

여기서는 항원 표시 바이러스 유사 입자(VLP)에서 중화 에피토프를 검출하는 프로토콜을 제시한다. 인간 면역결핍 바이러스(HIV)-유래 VLP의 면역 침전은 단백질 G-컨쥬게이트 자기 비드에 결합된 봉투 당단백질 특이적 단일 클론 항체를 사용하여 수행된다. 포획된 VLP는 이후 바이러스 성 코어 단백질 개그 특이적 항체를 사용하는 SDS-PAGE 및 서양 블롯 분석을 받게 된다.

포획 분석기를 사용하여 바이러스와 같은 입자(VLP) 기반 백신에 표시되는 항원에서 중화에 민감한 에피토프 검출

이 연구에서는 물 샘플의 세 가지 주요 clade에서 Leptospira 를 검출하도록 dot-blot 응용 프로그램을 설계했습니다. 이 방법을 사용하면 항-디곡시제닌 항체에 의해 쉽게 검출되는 디곡시제닌 표지 프로브에 의해 특이적으로 표적화된 최소 DNA 양을 식별할 수 있습니다. 이 접근 방식은 스크리닝 목적에 유용하고 만족스러운 도구입니다.

물 샘플에서 Leptospira 검출을 위한 중합효소 연쇄 반응 및 점-블롯 혼성화

여기에서는 이중 리포터 유세포 분석 시스템을 사용하여 안지오텐신 변환 효소-2 결합 자기 마이크로스피어에 의해 포착된 온전한 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2(SARS-CoV-2) 바이러스 입자에서 두 개의 고유한 스파이크 단백질 에피토프를 동시에 검출하는 새로 개발된 다중 형광 면역분석법에 대해 설명합니다.

Multiplex Dual-Reporter Strategy를 통한 바이러스 입자의 표면 단백질 에피토프 프로파일링

원핵생물에는 소기관 시스템이 없지만 국소적인 단백질이 있는 세포 내 영역이 있습니다. 세포 내 영역의 효소와 단백질에 대한 정량적 및 정성적 분석은 약물 및 백신 표적을 개발하는 데 중요합니다. 여기에서는 Triton X-114를 사용한 렙토스피럴 단백질의 세포내 분획과 그 분석을 설명합니다.

Triton X-114 기반 분획 접근법을 사용하여 렙토스피라의 세포하 단백질 농축

배우세요 Leptospira 표면 단백질 형광 분석법으로 외막 무결성을 유지하며 표면 노출 단백질을 정확히 평가하는 방법입니다. 이 기술은 병원성 인자 식별에 활용됩니다.

Leptospiral 표면 노출 단백질의 단백질 형광 분석

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