Name: 세미 두께 뇌 조각의 고해상도 형광 이미징에 대한 빠른 접근 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-26T12:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 35 s
Description: 배우세요 세미 두께 뇌 조각에서 형광 뉴런을 고해상도로 시각화하는 방법을. 뇌 조직을 고정하고 절단한 후 광학적 투명화를 통해 개별 세포와 신경망을 표준 현미경으로 관찰할 수 있습니다.

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이 작품은 맥네어 재단, NARSAD, 그리고 NINDS 부여 R00NS064171 - 03을 통해 지원이 투자되었다.

1. 원위치 뇌 고정에 * 인산염 가득한 10 ML 주사기 (28 게이지 바늘)을 준비 호수 (PBS)가 버퍼. * PBS에 4 % paraformaldehyde (PFA)로 가득 10 ML 주사기 (28 게이지 바늘)을 준비합니다. 게시물에 대한 고정 PFA / PBS의 지역은 추가 5-10 ML. <ol><li> Avertin 또는 Nembutal의 치사량과 실험 마우스 intraperitoneally을 주사. </li><li> 마우스가 진정되면 에탄올과 복부를 습식 및 코크, 왁스, 또는 해부 핀을 사용하여 실리콘 엘라스토머와 계층 트레이의 하단에 마우스를 확보. 최대 마주 복부와 표면에 푸르 포스를 확보 - 가능한 한 그들처럼 넓은 확산. </li><li> 흉골의 수준에서 집게로 피부를 잡아, 간장을 폭로 십자형 했네요. 갈비와 횡경막 통해 옆으로 후 잘라. 리브 조직 플랩을 제거하고 심장에 액세스할 때까지 계속 절단. </li><li> 피어스 또는 싹둑 순환 혈액을 유출에 대한 권리 아트리움. </li><li> 좌심실을 통해 PBS의 재관류에 의해 순환 시스템에서 잔류 혈액을 플러시. </li><li> 같은 바늘 구멍을 액세스, 좌심실을 통해 PBS / PFA의 후속 재관류에 의해 전체 마우스를 해결할 수 있습니다. </li></ol> 2. 해부 및 뇌 추출 <ol><li> 두개골을 노출 anteriorly 피부를 당기는 다음, 귀 운하와 눈 주위 궤도 절단하여 머리, 목, 그리고 두개골의 피부를 제거합니다. *) 2.5 단계 2.2)의 그림에 대한 그림 2 참조 </li><li> 뼈 가위를 사용하여, 눈의에서 비강 turbinate 뼈를 통해 소켓을 십자형으로 잘라. 각 측면에 대해이 작업을 수행합니다. 크로스컷은 눈과 후각 구근을 앞쪽에 있어야합니다. </li><li> 각 귀 운하에서 안구 소켓에 세로로 잘라. </li><li> 작은 해부 가위를 사용하여, 다른 한 귀로 운하에서 소뇌를 overlying 후두 골 판 잘라. </li><li> 같은 해부 가위로 후각 전구의 수준에 정중선을 따라 anteriorly 했네요. </li><li> 포셉 사용하여 뼈를 리프팅 때 두뇌가 그대로 남아 있도록하는 결합 조직을 제거하는 간병, 두뇌에서 각 뼈 플레이트를 제거합니다. </li><li> 싹둑 광 및 두개골 신경은 상위 경추의 척추 잘라 및 정착액에 머리를 제거합니다. </li><li> 4 1-2 시간에 대한 사후 수정 ° C. 워시 3 회 15 분 PBS의 각. </li></ol> 3. 아가로 오스의 삽입 <ol><li> 용융 2% 고강도, 낮은 - 젤 포인트 아가로 오스 유형 IB (시그마 카탈로그 번호 : A0576) 전자렌지와 PBS 살린 인치 </li><li> 테스트 튜브에 녹은 아가로 오스를 전송합니다. 온도 평형까지 따뜻한 보육 또는 물 목욕 (40 ° -41 ° C가)에 넣어 테스트 튜브. </li><li> cyanoacrylate 접착제 (그림 3A)와 표본 주사기의 플런저에 접착제 고정 뇌 조직. 뇌 조각의 아가로 오스 고리의 이후 릴리스를 촉진하기 위해 뇌 조직의 표면에 포화 자당 - PBS 솔루션의 얇은 레이어를 브러쉬. </li><li> 플런저 주택 (그림 3B)으로 뇌 조직과 플런저를 그립니다. </li><li> 피펫 또는 뇌 조직을 덮고, 플런저 주택에 따뜻한 아가로 오스를 부어. 아가로 오스로 기포를 트래핑하지 마십시오. 아가로 오스의 공기 방울은 슬라이스의 품질을 손상됩니다. </li><li> 감기 (-25하기 위해 0 ° ° C) 1 분 아가로 오스 (그림 3C)을 설정 놀아요 차단합니다.와 표본 주사기 클램프 </li></ol> 4. Compresstome과 뇌의 슬라이스를 Sectioning <ol><li> Compresstome (그림 3D)으로 뇌 조직을 포함하고있는 표본 주사기 조립. </li><li> 표본 주사기의 콘센트 (그림 3E)와 밀접하게 면도날의 가장자리를 맞춥니다. </li><li> PBS 용액으로 버퍼 탱크를 채우십시오. </li><li> 표본 주사기의 아가로 오스 - 뇌 조직 블록을 밖으로 돌출 앞으로 마이크로 미터 한 조각의 두께를 돌리세요. </li><li> sectioning 과정을 시작하기 위해 Compresstome의 제어 장치에있는 '시작'버튼을 누르십시오. </li><li> 원하는 조각이 두께를 결정에서 구할 때까지 4.5) 단계 4.4) 반복합니다. </li><li> 튜브 또는 PBS (그림 3 층)으로 가득 얼룩의 우물에 브러시 또는 피펫과 함께 추수 뇌 슬라이스. </li></ol> 5. 광학 지우기 <ol><li> 글리세롤의 권 솔루션 : PBS 75% 권을 준비합니다. </li><li> 수집된 두뇌 조각에서 PBS 세척의 절반 볼륨에서 (또는 피펫) 하거라. </li><li> 글리세롤 / PBS로 제거 볼륨을 다시 추가합니다. </li><li> 4 부드러운 혼합과 평형을 허용 ° C 조각 싱크까지. </li><li> 최종 글리세롤 농도가 75 %에 도달할 때까지) 6.4 단계 6.2) 반복합니다. </li><li> PBS에 90 % 글리세롤과 솔루션을 교체하고 평형 수 있습니다. * 참고 : 글리세롤 솔루션을 추가하는 동안 공기 방울을 소개 안됩니다. 기포가 균일 equilibra 방해하기 때문에, 천천히 솔루션을 붓고 부드럽게 섞는다기하며 장착 슬라이드로 진행됩니다. </li></ol> 6. 슬라이스는 이미지에 대한 마운트 <ol><li> 마이크로 슬라이드 (Superfrost 플러스 25의 볼 수있는 영역에 맞게 개방 사각형으로 양면 씰 접착제 (SA - S - 1L, 그레이스 바이오 연구소) 컷 X 75 X 1mm, 고양이. # 48311-703, VWR ) 2~3mm 다양한 측면과 함께. </li><li> 피펫이나 페인트를 사용하여 접착 테이프 사각형의 중심 안쪽 뇌의 슬라이스를 놓습니다. 부드러운 흡인과 초과 글리세롤을 제거합니다. </li><li> 페인트 브러쉬로 원하는 순서대로 슬라이드 뇌 조각 마련. </li><li> 접착 테이프로 부드럽게 낮은 커버 유리 (24 X 60mm, 고양이. # 48383-139, VWR), 공기 방울을 소개하지 돌보는. 부드럽게 접착제 테이프와 접촉을 보장하기 위해 커버 유리에 압력을 적용합니다. </li><li> 슬라이드와 coverglass 사이의 가장자리에서 초과 글리세롤을 대기음. </li><li> 투명 매니큐어를 사용하여 밀봉 슬라이드 및 coverslip. </li><li> 이미징 전에 건조, 또는 4 슬라이드 상자에 장기간 저장하는 허용 ° C. </li></ol> 7. 대표 결과 : 가공, 이미징, 그리고 찬란 표시 뇌 조직을 분석은 신경 생물학의 연구에 필수가되었습니다. 이러한 조사의 대부분은 정교한 유전자 조작 모두 낮은과 고해상도 이미지를 분석하여 다음 타겟의 연결 하위 집합에서 기자 표현을 얻기 위해 필요합니다. 종종 실험 및 기술 한계는 불가능 같은 동물에서 이러한 유형의 데이터를 얻을, 또는 신속한 방식으로합니다. 이 도전에 형광 이미징 에이즈에 대한 광학 - 삭제, 세미 두께 뇌 부분의 준비. 유전자 조작 광견병 바이러스에 표시된 그대로 두꺼운 뇌 슬라이스의 예제는 표현 EGFP 수 있도록 설계하고, epifluorescent 및 공촛점 현미경을 사용하여 몇 군데 그림 4에 나와 있으며, 각각 5 그림. epifluorescent 이미징을 위해 우리는 Leica M205 FA를 사용하고, 공촛점 이미지 수집을위한 우리 자이스 혈구 LSM 510를 사용합니다. 첨부된 프로토콜의 상대 단순 때문에,이 방법은 하루도 채 안의 처리 시간과 형광 기자를 표현하는 조직에서 유용하게 이미지 데이터를 항복 수 있으며, 모두 낮은과 높은 해상도 가벼운 현미경과 호환됩니다. 조사 추가 사후 라벨 방법, immunohistochemical 얼룩을 통합하거나 얇은 섹션을하도록 선택한 경우, 프로토콜은 따라 길게. 그러나, 위에서 설명한 방법은 그대로 두뇌의 핵심 기자 표현의 심사 패턴 간단하고 상대적으로 높은 처리량 방법을 나타냅니다. <img src="/files/ftp_upload/2807/2807fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. 고정, 해부, 깔끔히, 삭제하고 준결승 두께 뇌 조각의 설치 절차를 diagraming 플로우 차트. <img src="/files/ftp_upload/2807/2807fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2. 그대로 마우스 머리를 추출하는 연속 절삭 단계 다이어그램. <img src="/files/ftp_upload/2807/2807fig3.jpg" alt="그림 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 3"> 그림 3. Compresstome를 사용하여 뇌 조직을 탑재하고 슬라이스하는 방법. superglue를 사용하여 플런저를 절단에 뇌 조직의) 배치. B) 아가로 오스의 포함을위한 플런저에 탑재된 뇌 조직 아래 그리기. C) 냉장 압축 블록을 사용하여 아가로 오스 두뇌 플러그를 응고. Compresstome 절단 챔버로 아가로 오스 두뇌 플러그와 플런저의 D) 삽입. 플런저 장치에 razorblade의 E) 정렬. Compresstome 버퍼 챔버로 뇌 조각의 F) 커팅 및 수집. <img src="/files/ftp_upload/2807/2807fig4.jpg" alt="그림 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 4"> 그림 4. 강화된 녹색 형광 단백질 (EGFP)를 표현하는 전두엽 피질을 통해 글리세롤 - 삭제 뇌 조직에서 두꺼운 단면의 빛 현미경 이미지. 마우스 두뇌를 통해 A) 코로나 슬라이스 (두께 200 음)은 바이러스 벡터 표현 EGFP으로 표시하고 epifluorescent 입체경을 사용하여 낮은 해상도에서 몇 군데. 스케일 바, 2mm. <img src="/files/ftp_upload/2807/2807fig5.jpg" alt="그림 5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 5"> 그림 5. 찬란 분류 층 5 / 삭제 두꺼운 뇌 슬라이스 6 대뇌 피질의 뉴런의 높은 배율 이미지. 강조 표시 영역 (그림 4)을 통해 최대 프로젝션 Z - 스택 (두께 150 음)의) 고해상도 공촛점 이미지. 스케일 바, 25 음.

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가벼운 현미경에 빠르게 화면, 이미지, 손상 뇌 조직 내의 신경 네트워크 분석은 귀중한되어 필요를 통해 조사의 연결 집합을 대상으로 형광 단백질을 사용하는 광범위한 응용 프로그램을 감안할 때. 사용자 친화적인 생체내 electroporation 기법에 바이러스성 벡터, 그리고 유전자 변형 마우스 종자의 개발에 기술적인 진보는 이제 조사를 표시 셀 종류의 겉보기 무제한 소스를 제공합니다. 그러나, 손상 뇌 조직의 이미지 분석은 아직 실험에 병목 현상 남아 있습니다. 방법은 여기에 설명된 형광 기자를 표현하는 뇌 조직의 일상적인 분석을 위해 매우 유용한 것으로 입증되었습니다. 그것은 크게, 뇌 섹션에서 조직을 준비하고 분석하는 데 필요한 시간을 잘라 저전력 및 고해상도 형광 이미징 모두와 호환됩니다 immunocytochemistry와 함께 사용할 수있는 다른 실험 동물 모델에 번역하고, 중요한 것은, 널리입니다 multiphoton 이미징 장비에...

<table border="1"&gt;<tbody&gt;<tr&gt;<th항목의&gt; 이름</th&gt;<th&gt; 회사 소개</th&gt;<th&gt; 카탈로그 번호</th&gt;<th&gt; 댓글 (옵션)</th&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 뼈 가위</td&gt;<td&gt; FST</td&gt;<td&gt; 16044-10</td&gt;<td&gt; - 또는 동급</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 해부 가위</td&gt;<td&gt; FST</td&gt;<td&gt; 14084-08</td&gt;<td&gt; - 또는 동급</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 유형 IB 아가로 오스</td&gt;<td&gt; 시그마</td&gt;<td&gt; A0576</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Compresstome</td&gt;<td&gt; Precisionary 계측기</td&gt;<td&gt; VF - 200</td&gt;<td&gt; - 다른 vibratomes가 호환되는</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 더블 양면 접착</td&gt;<td&gt; 그레이스 바이오 연구소</td&gt;<td&gt; SA - S - 1L</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Superfrost 플러스 슬라이드</td&gt;<td&gt; VWR</td&gt;<td&gt; 48311-703</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 커버 유리</td&gt;<td&gt; VWR</td&gt;<td&gt; 48383-139</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 글리세롤</td&gt;<td&gt; EMD 화학 주식 회사</td&gt;<td&gt; GX0185 - 6</td&gt;<td&gt; - 또는 동급</td&gt;</tr&gt;</tbody&gt;</table&gt;

세미 두께 뇌 조각의 고해상도 형광 이미징에 대한 빠른 접근

A Rapid Approach to High-Resolution Fluorescence Imaging in Semi-Thick Brain Slices

모두 기초 및 임상 신경 과학에 대한 근본적인 목표는 더 신원, 분자 메이크업, 그리고 정상과 질병 뇌 모두에서 뉴런에 특징 아르 연결의 패턴을 이해하는 것입니다. 이 무렵, 노력의 다량은 고해상도 neuroanatomical지도 1-3 건물에 위치하고 있습니다. 분자 유전학 가벼운 현미경의 진보의 확장의 연결 morphologies뿐만 아니라 쿼리 수있는 능력을 올뿐만 아니라, 개별 뉴런과 연결된 네트워크 4 분자 및 세포 메이크업이되고있다. 설치류의 유전자 변형과 유전자 타겟팅 기술을 통해 뉴런을 표시하고 조작할 수있는 능력의 주요 발전은 이제합니다 5-6에서 &#39;프로그램&#39;의 연결 집합에 수사관을 허용합니다. 확실하게, 현대 신경 과학에 가장 영향력있는 공헌 중 하나는 필수 기자의 끊임없이 확장 도구 상자 9 항복을 7-8, 그들의 후속 기술과 함께 해양 무척추 동물에 형광 단백질 (FPS) 인코딩 유전자의 발견 및 복제되었습니다. 이산의 연결 인구에서 타겟 FP 표현을 드라이브에 활용 세포 유형의 특정 발기인 활동은 이제 유전자 정밀 neuroanatomical 조사를 내실수가 있었죠. 뉴런의 엔지니어링 FP 표현은 크게 뇌의 구조와 기능에 대한 우리의 이해를 향상되었습니다. 그러나, 깊은 뇌 조직에, 또는 3 차원 영상 개별 뉴런과 관련 네트워크, 도전 남아있다. 높은 지질 내용으로 인해, 신경 조직 오히려 불투명 전시 자동 형광입니다. 이러한 고유 biophysical 속성은 어려운 미크론 수십의 깊이 이상의 표준 epifluorescent 또는 공촛점 현미경을 사용하여 높은 해상도에서 찬란 분류 뉴런을 시각화 및 이미지를합니다. 이 과제의 수사를 회피하기 위해서는 종종 일련 박막 섹션 이미징 및 재건 방법 10, 또는 2 광자 레이저 스캐닝 현미경 11 사용합니다. 이러한 방식으로 현재의 단점은 각각 관련 노동 집약적인 조직을 준비하거나, 비용 금지 기기입니다. 여기서는 광학 삭제 및 이미징에 의해 고정 세미 두께 마우스 뇌 조각의 찬란 레이블 세포를 시각화하기 위해 상대적으로 신속하고 간단한 방법을 제시한다. 첨부된 프로토콜에서는의 방법을 설명합니다 intracardial 재관류, 2) 해부 및 전체 두뇌의 제거, 3) 아가로 오스, 4 고정 뇌 포함) 새로운 vibratome 장비를 사용하여 정밀 세미 두꺼운 슬라이스 준비를 통해 현장에서 1) 고정 뇌 조직 , 5) 정산 두뇌 글리세롤 기울기를 통해 조직, 그리고 6) 가벼운 현미경과 Z - 스택 재건 (그림 1) 유리 슬라이드에 장착. 뇌 조각을 준비하는 동안 우리는 장비의 새로운 작품은 &#39;Compresstome&#39;VF - 200 (http://www.precisionary.com/products_vf200.html)를 호출 구현했습니다. 이 악기는 다른 vibratomes 함수를 유사한 기능을 갖춘 전동 사전 및 블레이드 진동 시스템을 갖춘 세미 자동 마이크로톰입니다. 다른 vibratomes 달리 얇게하는 조직은 스테인레스 스틸 실린더 내에 아가로 오스 플러그인에 마운트됩니다. 조직 원하는 실린더의 두께로 압출하고, 앞으로 발전 진동 칼날에 의해 절단. 아가로 오스 플러그 / 실린더 시스템은 재현성 조직이 장착 정렬 및 정밀 가공을위한 수 있습니다. 우리 손 안에있는 &#39;Compresstome&#39;수율은 전기 생리학, immunohistochemistry를위한 고품질의 조직 슬라이스하고, 직접 고정 조직 실장 및 이미징. 광학 삭제와 함께, 우리가 고해상도 형광 이미징을위한 세미 두께 고정 뇌 조각의 준비를 보여줍니다.

여기 세미 두께 뇌 조각의 이미지 찬란 표시된 셀에 신속하고 간단한 방법을 설명합니다. , 고정 깔끔히 및 광학 뇌 조직을 취소하여 우리는 표준 epifluorescent 또는 공촛점 이미지가 손상 신경 조직 내의 개별 세포의 연결 네트워크를 시각화하는 데 사용할 수있는 방법에 대해 설명합니다.

기초 및 임상 신경과학의 근본적인 목표는 ...의 정체, 분자적 구성 및 연결 패턴을 더 잘 이해하는 것입니다.

본 절차의 전반적인 목표는 두꺼운 뇌 절편 내의 형광 뉴런을 더 쉽게 시각화하는 것입니다. 이는 먼저 뇌를 aeros 플러그 홀더에 매립함으로써 수행됩니다. 절차의 두 번째 단계는 압축 톰(compressed tome)에서 뇌를 두꺼운 절편으로 만드는 것입니다.절차의 세 번째 단계는 글리세롤 구배(glycerol gradient)를 이용해 뇌 절편을 광학적으로 투명화하는 것입니다. 절차의 마지막 단계는 투명화된 뇌 절편을 형광 이미징을 위해 슬라이드에 마운팅하는 것입니다. 최종적으로, 에피 형광 현미경(epi fluorescent microscopy) 또는 공초점 현미경(confocal microscopy)을 통해 두꺼운 뇌 절편 내 뉴런에서 고해상도의 형광 단백질 리포터 발현을 보여주는 결과를 얻을 수 있습니다.박편 제작, 연속 형광 현미경 검사 또는 다광자 이미징과 같은 기존 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은 훨씬 더 신속하고 노동력이 적게 들며, 고가의 정교한 현미경 기술이 필요하지 않다는 점입니다. 우선, 심장 관류를 통해 NC two 고정을 거치고 4 °C에서 1~2시간 동안 후고정된 마우스 뇌 조직을 준비합니다. 다음으로, PBS에 2% 고강도 저젤점 agarose 용액을 만들고 마이크로파 가열기에서 완전히 녹을 때까지 가열합니다.녹은 agros를 시험관으로 옮기고 40 °C 가열 블록에 넣어 온도를 맞춥니다. agros의 온도가 안정되는 동안 고정된 뇌 조직을 검체 시린지(specimen syringe)의 플런저에 접착제로 고정합니다. Sano Aate 접착제를 사용하여 고정된 조직을 포화 설탕 PBS 용액에 담가 뇌 표면을 코팅한 다음, 플런저를 하우징 안으로 내립니다. 따뜻한 aros를 플런저에 피펫으로 분주하여 기포가 생기지 않도록 주의하며 뇌 조직을 완전히 덮어줍니다.마지막으로, 시료 시린지를 콜드 칠링 블록으로 약 1분 동안 고정합니다. aros를 설정하려면, 뇌 조직이 임베딩된 시료 시린지를 압축 홈(compressed home)에 조립합니다. 칼날의 끝부분을 시료 시린지의 배출구에 가깝게 맞춘 다음, 완충액 탱크를 PBS로 채웁니다.마이크로미터를 회전시키십시오. 내장된 뇌 조직이 시료 주사기 밖으로 밀려 나올 때까지 슬라이스 두께 방향으로 앞으로 돌립니다. 첫 번째 슬라이스를 생성하려면 제어 장치의 시작 버튼을 누르십시오.매립된 조직을 전진시키고 시작 버튼을 누르는 과정을 반복

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

출처: Etienne, F. et al. 급성 뇌 절편에서 ATP 또는 세로토닌에 대한 미세아교세포 과정의 인력에 대한 이광자 이미징. J. Vis. Exp. (2019)이 비디오는 이광자 현미경을 사용하여 뇌 절편에 주입된 화합물에 대한 미세아교세포의 인력을 연구하는 방법을 보여줍니다. 쥐의 뇌 절편을 준비하고, 화학유인제 테스트 화합물을 주입하고, 형광 표지된 미세아교세포를 이미징하여 반응을 시각화하는 방법에 대한 개요를 제공합니다.

쥐 뇌 절편의 화합물에 대한 미세아교세포 돌기 인력을 연구하기 위한 이광자 현미경

출처: Shimojo, H., et al. 쥐 신경 발생 중 노치 신호 전달 역학의 실시간 생물 발광 이미징. J. Vis. 경험. (2019년)이 비디오에서는 형질전환 마우스 배아의 피질 절편 배양을 사용하여 3차원 이미징을 통해 유전자 발현을 모니터링합니다. 생물발광, 형광 및 명시야 이미지는 천연 조직 내에서 신경 분화 동안 실시간 유전자 발현을 시각화하는 데 사용됩니다.

3차원 이미징을 통한 뇌 절편의 실시간 유전자 발현 모니터링

제시 여기 경작 하는 수정 된 롤러 튜브 방법 이며 photoetched coverslips에 정확한 위치와 많은 주 동안 설치류 두뇌의 간헐적인 고해상도 이미징 조각. 신경 생존 및 슬라이스 형태로 잘 유지 됩니다. 셀 형 특정 식에 대 한 바이러스를 사용 하 여이 완전히 동봉 된 시스템의 응용 프로그램에 제공 됩니다.

정확 하 게 지역화 하 고 반복적인 뇌 조각 동봉 된 시스템에서의 장기적인 문화 중 간헐적인 이미징 수정된 롤러 튜브 메서드

Microglia, 두뇌의 거주 면역 세포 그들의 환경의 수정에 형태학 변화 신속 하 게 응답. 이 프로토콜 2 광자 현미경을 사용 하 여 쥐의 급성 뇌 조각에서 세로토닌 또는 ATP microglial 프로세스의 매력을 공부 하는 방법을 설명 합니다.

Microglial 프로세스 매력 ATP 또는 급성 뇌 조각에 세로토닌의 2 광자 영상

전압에 민감한 염료를 사용하여 뇌 조각을 재현하고 안정적으로 광학 기록 하는 방법을 소개합니다. 이 기사에서는 기존의 해마 슬라이스 준비를 사용하여 전압에 민감한 염료 염색 및 광 신호 기록에 대해 설명합니다.

전압에 민감한 염료를 사용하여 뇌 슬라이스의 광자 광자 광기록

여기에서는 축 신장 및 세분화의 맥락에서 마우스 배아의 세 가지 및 네 차원 이미지 데이터를 시각화하고 분석 할 수있는 계산 도구 및 방법을 설명하고, 토토 광학 투영 단층 촬영에서 얻은 다중 광자 현미경을 사용하여 라이브 이미징 및 전체 마운트 면역 형광 염색을 수행합니다.

척추동물 축 신장 및 세분화를 연구하기 위한 세 가지 및 네 차원 시각화 및 분석 접근법

이 프로토콜은 현장 축삭 성장 및 성장 원뿔 역학 을 연구하는 간단하고 강력한 방법을 보여줍니다. 생체외 생리학적으로 관련된 급성 뇌 조각을 준비하는 방법을 설명하고 사용자 친화적인 분석 파이프라인을 제공합니다.

시투에서 Axon Growth and Growth Cone Dynamics in Acute Ex Vivo Embryonic Brain Slice Cultures 시각화

이 프로토콜은 조직 제거 방법인 ScaleSF를 사용하여 뇌 절편에서 신경 세포 영상의 상세한 방법을 제공한다. 이 프로토콜에는 뇌 조직 준비, 조직 정화, 클리어 슬라이스 처리 및 공초점 레이저 스캐닝 현미경 이미징이 포함됩니다.

중시경에서 현미경 비늘에 이르기까지 신경 세포 이미징을위한 조직 제거 방법

유도성 트랜스제닉 계보 추적 마우스 라인을 사용하여 줄기 세포 및 그의 자손을 형광단으로 영구적으로 표시하는 능력은 생체내에서 활성화, 증식, 이동 및/또는 분화의 공간적 및 시간적 분석을 가능하게 한다. 계보 추적은 혈통 헌신, 개입에 대한 반응 및 다능성에 대한 새로운 정보를 나타낼 수 있습니다.

성인 마우스 뇌에서 유도성 형광 표지 줄기 세포의 계보 추적

이 프로토콜은 iDISCO+를 사용하여 온전한 마우스 뇌의 자기 공명 영상, 제거 및 면역 표지를 수행하는 방법을 설명한 다음, 라이트 시트 현미경을 사용한 이미징 및 NuMorph를 사용한 다운스트림 분석에 대한 자세한 설명을 설명합니다.

MRI, 조직 투명화 및 라이트 시트 현미경을 사용한 온전한 신생아 마우스 뇌의 전뇌 단일 세포 이미징 및 분석

본 프로토콜은 (SWITCH - H 2O2 - Antigen Retrieval - 2,2'-thiodiethanol [TDE]) SHORT 조직 형질 전환 기법과 광시트 형광 현미경 이미징을 일상적으로 높은 처리량 프로토콜로 결합하여 수십 개의 사후 인간 뇌 절편의 신속하고 동시적인 광학 투명화, 다중 라운드 라벨링 및 3D 체적 재구성을 위한 단계별 절차를 제공합니다.

Optical Clearing and Labeling for Light-sheet Fluorescence Microscopy in Large-scale Human Brain Imaging(대규모 인간 뇌 영상에서 광시트 형광 현미경을 위한 광학 투명화 및 라벨링)

배우세요 세미 두께 뇌 조각에서 형광 뉴런을 고해상도로 시각화하는 방법을. 뇌 조직을 고정하고 절단한 후 광학적 투명화를 통해 개별 세포와 신경망을 표준 현미경으로 관찰할 수 있습니다.

세미 두께 뇌 조각의 고해상도 형광 이미징에 대한 빠른 접근

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