May 7th, 2011
인간 패혈증 연구에 유용한 도구로 cecal 내고 주사의 마우스 모델입니다.
안녕하세요, 제 이름은 템플 대학교 미생물학 및 혈액학과 Dr.Dena 연구실의 Miguel Toscano입니다. 오늘 우리는 C 57 Black Seas Mouse 균주에서 iCal 주장 및 펑크 모델을 설정하는 방법을 보여 드리겠습니다. 우리는 실험실에서 이 모델을 사용하여 인간의 패혈증을 모방합니다.
기본적으로 이 모델은 배설물이 복막강으로 방출되어 다균 패혈증을 생성하여 악화된 면역 반응을 생성할 수 있도록 하는 혈청의 천자로 구성됩니다. 이 모델에서는 많은 장기와 다양한 세포 유형이 돌이킬 수 없는 손상을 입습니다. 결국 동물의 죽음을 초래할 수 있습니다.
시작하겠습니다. 마우스 마취. 첫 번째 단계는 복강내 주사를 통해 동물을 마취시키는 것입니다.
케토민과 자일라진의 일대일 혼합물. 마우스에 물리지 않고 다치지 않으려면 한 손으로 꼬리에서 마우스를 잡아야 합니다. 다른 한 손으로는 바닥을 밀었다.
그런 다음 머리 뒤에서 쥐를 잡은 다음 동물을 등을 돌려 복부를 노출시킬 수 있습니다. 29 게이지의 인슐린 주사기로 복막강에 20-30 마이크로 리터의 마취제를 주입합니다. 절차를 위해 마우스를 준비하고 마우스 뒷면을 잡고 마우스의 꼬리 또는 다리를 눌러 복부를 면도합니다.
우리는 마우스가 통증에 민감하지 않은지 확인한 다음 복부를 소독합니다. 먼저 베타딘 용액으로 문지른 다음 이소프로필 알코올 물티슈로 최소 1분 동안 닦습니다. 개복술 실습 개복술을 시행하기 위해 집게로 복부 중앙의 피부를 들어 올리고 약 1cm 길이의 작은 절개를 만듭니다.
그런 다음 회음부를 들어 올리고 복막강을 드러내기 위해 또 다른 작은 절개 연습을 합니다. 구부러진 집게를 사용하여 복막을 잡습니다. 복막막을 통해 맹장을 식별하고 노출시킵니다.
복부에 올려 놓으십시오. 지금이 결찰의 순간입니다. 이것은 중요한 요소입니다.
모델의 심각도를 결정하기 위해 절차의 심각도를 조절할 수 있습니다. 결찰의 확장에 의해, 생쥐는 더 가벼운 패혈증을 발달시킬 것이다. 결찰술이 맹장 끝에 더 가깝게 이루어지고, 중간에 시행되는 경우 중간 등급 패혈증, 회장 판막 가까이에서 시행되는 경우 중증 패혈증이 이루어지는 경우, 절차의 중증도는 사망률에 의해 반영됩니다.
회장 판막을 결찰하지 마십시오. 이제 이중 매듭이 있는 실크 봉합사를 사용하여 결찰을 만들어 단단히 만들고 천자를 만듭니다 맹장을 잡고 결찰 부위 가까이에 조심스럽게 구멍을 뚫고 맹장 끝에 더 가깝게 또 다른 구멍을 뚫습니다. secum의 막은 부드럽고 매우 쉽게 구멍이 뚫립니다.
두께가 다른 바늘을 사용하고 하나 또는 두 개의 천공을 만들어 모델의 심각도를 조절할 수도 있습니다. 여기에 표시된 단일 또는 이중 펑크 방법은 고전적 속편 펑크에 대한 대체 기술입니다. 단일 또는 이중 펑크 방법을 사용하는 장점은 압착을 추구할 때 압출되는 대변의 양을 더 잘 제어할 수 있다는 것입니다.
두 손가락으로 세쿰을 잡고 맹장을 부드럽게 밀어내어 아주 적은 양의 대변을 추출합니다. 개복술을 닫은 다음 복막을 들어 올리고 맹장을 조심스럽게 다시 놓습니다. 복막강에서.
맹장이 실수로 찔리지 않도록 각별히 주의하십시오 집게와 함께 더 큰 집게를 사용하는 것이 좋습니다. 이제 복막강을 닫을 때입니다. 실크 봉합사를 사용하면 잘 닫혀 있는지 확인하는 것이 매우 중요합니다.
우리는 매듭을 짓는 상처의 한쪽에서 시작합니다. 이전 펑크의 고리 아래에 실크를 통과시켜 반대쪽까지 봉합사를 계속 만듭니다. 피부를 닫기 위해 올바른 도구를 사용하여 Mitchell 상처 클립 또는 반사 클립을 사용하여 클립을 닫을 수 있습니다.
상처가 봉합되었는지 확인하기 위해 필요한 만큼 클립을 놓습니다. 1ml의 예열 식염수 용액을 피하주사하여 생쥐를 소생시킵니다. 25 게이지 바늘을 사용하여이 유체 소생술 조치는 패혈증의 초 역학적 단계를 유도하여 절차를 마칩니다.
마우스가 마취에서 회복될 때까지 적외선 가열 조명 아래에 놓거나 또는 가열 패드 위에 놓습니다. 케이지 바닥에 음식과 물을 제공하고 8-12시간마다 동물들이 질병의 징후가 있는지 감독합니다. 수술 후 진통제를 위해 부프레노르핀을 피하로 주사합니다.
사용할 수 있는 다른 진통제는 T.Tramadol입니다. 패혈증의 징후, 패혈증의 증상으로는 발열, 무기력, 펠로, 발기, 설사, 웅크리기, 권태감 등이 있습니다. 아픈 동물은 체온이 심하게 떨어지고 고통을 피하기 위해 거의 움직이지 않습니다.
이 단계에서 안락사시켜야 H.So 이것이 우리가 낫 결찰 및 시간 엄수 모델을 수행하는 방법입니다. 바라건대, 이 절차의 시연을 즐겼고 동물 연구를 시작하기 전에 연구에 매우 유용하다는 것을 알게 되었기를 바랍니다. 우리는 결찰의 길이, 바늘의 두께, 천공의 수를 수정하여 실험에 대한 적절한 심각도를 설정하기 위해 늙거나 사용하지 않는 정신을 훈련에 사용하는 것이 좋습니다.
그 말로 작별 인사를 드립니다.
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이 기사는 인간 패혈증을 연구하는 데 사용되는 맹장 결찰 및 천공 생쥐 모델에 대해 논의합니다. 이 모델은 복강 내에 대변을 도입하여 다균종 패혈증을 모방하고, 과도한 면역 반응과 잠재적인 장기 손상으로 이어집니다.
The cecal ligation and puncture (CLP) model provides a reproducible, polymicrobial sepsis model that mirrors human pathophysiology, enabling target validation and mechanistic de-risking in early discovery. By reproducing both hyperdynamic and hypodynamic phases, it supports predictive confidence in therapeutic screening and translational biomarker identification. This model aids in assessing drug efficacy across disease stages, reducing late-stage failure risk in sepsis-related programs.
The CLP model fits within the discovery continuum from target validation through lead identification to preclinical efficacy testing, particularly for immunomodulatory agents.