Name: 세포 배양의 유도와 Hypoxia의 시험 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-08-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: 배우세요 세포 배양에서 저산소증을 유도하고 HIF-1 alpha 발현을 평가하는 방법을. 코발트 클로라이드와 저산소 인큐베이터를 사용하며, 웨스턴 블롯과 발광 검출로 결과를 확인합니다. 이 기법은 세포 생물학 및 저산소 연구에 활용됩니다.

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1. CoCl이 솔루션 유도 Hypoxia 코발트 (II) 염화물 hexahydrate은 (CoCl 2 • 6H 2 O, MW = 237.9) hypoxia - inducible 인자 - 1.3 8 화학 유도합니다. 이 제품은 명확하고 붉은 솔루션을 항복, 물 (100 MG / ML)에 용해됩니다. <ol><li> 무균 DD 물에 25mM 재고 솔루션을 준비, (사용하기 전에 바로 준비) </li><li> hypoxia를 유발하여 일반 세포 배양 매체 100μM의 최종 농도에서 CoCl 2를 사용하십시오. </li><li> 당신의 세포에 CoCl이 포함된 미디어를 추가하고 기존의 인큐베이터에 24시간에 대한 문화를 품다 (37 ° C; 5% C0 2). </li></ol> 위의 농도는 우리가 테스트를했지만 각 세포주 마약 관련 독성을 제한하고 분석을 최적화하기 위해 다양한 배양 시간뿐만 아니라 다양한 농도 (복용 종속 곡선을 설정)에서 테스트해야하는 세포 라인에 적용됩니다. 2. 모듈형 보육 회의소에서 유도된 Hypoxia <ol><li> 적어도 두 개의 동일한 (트윈 문화) 세포의 문화를 준비합니다. 세포 배양 Flasks, 접시 또는 문화 요리하실 수 있습니다. 챔버를 열려면 먼저 챔버 (hypoxic 가스를 정화 주입 / 튜브 사용)하고 부드럽게 철강 링 클램프를 열고 연결된 튜브에있는 두 개의 하얀 플라스틱 클램프를 엽니다. </li><li> 클램프를 풀어. 뚜껑과 쟁반 이제 제거할 수 있습니다. </li><li> hypoxic 챔버에서 세포 배양을 놓습니다. 또한 문화의 적절한 가습을 제공하기 위해 챔버에 멸균 물이 들어있는 페트리 접시를 놓습니다. </li><li> 컨트롤로 normoxia에서 "쌍둥이"세포 배양를 놓습니다. </li><li> 귀하의 트레이가 안전하게 움직이지 않고 다음의 뚜껑이있는 곳에는 가까이 있는지 확인합니다. 제대로 챔버의 hermetical 폐쇄를 보장하고 닫습니다 철강 링 클램프 위치를. </li><li> hypoxia을 만들려면, 1 %의 O 2 기체 혼합물을 포함하는 "hypoxia 탱크"로 튜빙을 연결합니다. 당신의 탱크에 연결된 유량계가있다면 귀하의 챔버는 직접 (가스 탱크 - 유량계 - 챔버)에 연결됩니다. 우리는 감독 당국에 통합 유량계를 사용합니다. </li><li> 7-10분 분 동안 당 20 리터 유량의 가스 탱크를 열어 챔버를 플러시 이렇게하려면 챔버와 미디어의 모든 산소 존재가있다면 대부분을 제거하는 것이 중요하다, 그리고 신속하게 해제 가스 흐름과 완전히 흰색 클램프를 모두 닫아 챔버를 닫습니다. </li><li> 시간의 원하는 기간 동안 기존의 인큐베이터로 챔버를 반환합니다. 2 시간 후 물을 반복 - 당신이 큰 문화를 사용하는 경우, 1 드 가스 문화 미디어가 수 있습니다. 위의 단계는 생성자 추천 '(빌럽스 - 로텐버그, 부동산)을 기반으로합니다. 당신은 가스 탱크가 제대로 모든 시간에 안전하게 있는지 확인합니다. </li></ol> 참고 : <ul><li> 그것이 1-3시간 후 챔버 번 다시 가스 좋습니다 미디어에 포함된 O 2를 제거하기 위해서는. </li><li> 이상 48시간보다 배양 시간에 그것은 또한 다시 가스 챔버에 좋습니다. </li><li> O 2의 측정 셀 / 챔버에 포함된 수 있도록 산소 센서 (전극 / 혈압계) 챔버 / 세포 O 2가 포함된)의보다 정확한 측정을 제공합니다. </li><li> 시간 곡선을 만들어 여러 시간 길이에 Culturing 세포는 특정 세포에서 HIF - 1α의 최적의 시간 표현을 결정하는 데 도움 것입니다. </li></ul> 3. Hypoxia 평가 <ol><li> 서양 얼룩에 의해 HIF - 1 α 검출. <ol><li> 다시 열고 챔버는 섹션 2.2에서 설명한 즉시 얼음에 문화를 놓으십시오. </li><li> 접시에 5% SDS 솔루션 hypoxia 처리 및 비 치료 세포를 Lyse하면 다음 튜브에 sonicate, spindown 세포 파편을 세포 lyzate를 전송하고 표면에 뜨는를 수집합니다. </li><li> BCA 키트를 사용하여 측정 단백질 농도는 5 분 95시 로딩 버퍼와 난방 ° C를 추가하여 샘플을 준비합니다. </li><li> 8% SDS - polyacrylamide 젤 및 Nitrocellulose의 점막에 전송에 Electrophorese 단백질. </li><li> 1 시간이나 쉐이크 4 ° C에서 하룻밤 상온에서 5% 아닌 지방 건조 우유를 포함하는 PBS에 막과 0.1 % 트윈 20 차단합니다. </li><li> 4 같은 버퍼에 방지 HIF - 1α 기본 단클론 항체 (1 / 600)와 함께 밤새 Immunoblot ° C. </li><li> PBS는 PBS에서 HRP - 이차 항체 (1 / 2000) + 0.1 % 45 분 트윈 20과 실내 온도, 5 분마다 시간과 부화에 트윈 20 0.1 %를 포함하는 3 번 씻으십시오. </li><li> PBS는 실온, 5 분 / 시간에 트윈 20 0.1 %를 포함하는 3 번 씻으십시오. </li><li> 단백질 밴드를 표시 피어스 ECL Kit 및 X - 선 필름을 사용 </li></ol></li><li> Hypoxia 시브 요소 (HRE). HIF - 1α는 Hypoxia 레굴라팅 요소 (HRE)라는 순서에 바인딩하여 수많은 유전자 (즉 VEGF, EPO)을 규정합니다. 마커 유전자에 관련된 HRE를 사용하여 It 9 HIF 활동을 감지할 수 있습니다. 이 방법을 사용하려면 먼저 귀하의 세포에 적응 transfection 방법을 사용하여 HRE - 루시페라제 플라스미드와 세포 transfect해야합니다. 예를 들어, 우리는 Lipofectamine 2000를 사용합니다. 세포는 hypoxia과 normoxia에 incubated 수 전에 최소한 4 시간 transfected해야합니다. 이번이 첫 번째 단계는 hypoxia에 의해 영향을받지 않는다 있도록 DNA가 세포를 입력할 수 있습니다. 루시페라제 신호 루시페라제 어세이 키트를 사용하여 감지됩니다. <ol><li> 모듈 챔버에서 hypoxia에 HRE - transfected 세포를 품어 또는 CoCl 2 incubated HRE - transfected 세포를 사용 normoxia 컨트롤을 포함합니다. </li><li> 원하는 잠복기 후, 세포의 성장 매체를 제거합니다. </li><li> PBS로 세포를 린스, PBS를 제거합니다. </li><li> 문화 접시에 400μl 1X 용해 시약을 조제하고 첨부된 세포를 긁어 다음, 마이크로 튜브로 전송할 수 있습니다. </li><li> 간단한 원심 분리하여 펠렛의 잔해. </li><li> 세포의 믹스 20μl는 루시페라제 분석 시약의 100μl로 뜨는 lysates과 luminometer를 사용하여 발광을 측정합니다. </li></ol></li></ol> 4. 대표 결과 : K562 세포 (인간 백혈병 세포주)에서 normoxia에 비해 낮은 산소 교양 이일, hypoxia 서양 얼룩 (그림 1)에 의해 감지되었습니다 HIF - 1α 단백질의 증가를 유도. HRE - 루시페라제은 hypoxia에 교양 (배아 신장 세포 라인) 293 세포를 수정이 중요한이 HIF - 1α 활동의 증가 hypoxic 세포에서 발견되었다 (그림 2). 사용 <img src="/files/ftp_upload/2899/2899fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1 : hypoxic 세포에서 HIF - 1α 늘립니다. K562 세포는 48 시간을위한 normoxia 및 hypoxia (hypoxic 챔버)에 문화되었으며 HIF - 1α에 대한 특정 항체를 사용하여 서양 얼룩으로 분석했다. 굴지에 대한 항체 특정은 로딩 제어 사용되었다. <img src="/files/ftp_upload/2899/2899fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> Figure2 : HIF - 1α 활동. HRE - 루시페라제는 293 세포는 48 시간을위한 hypoxia과 normoxia에 교양되었습니다 수정한 다음 루시페라제 분석 키트와 luminometer를 사용하여 루시페라제 신호를 감지하는 lysed. 결과는 상대적인 발광 장치 (RLU)로 표현됩니다.

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</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

hypoxic 조건에서 세포 증식과 생존은 세포 종류에 따라 많이 다릅니다. 따라서, 당신은 전화 번호 또는 귀하의 실험에 대한 충분한 세포 / 단백질을해야합니다 있는지 확인으로 시작 문화 접시의 수를 조정해야합니다. 코발트 클로라이드 방법은 저렴한 가격과 빠른 될 수있는 장점이 있습니다. 이 제품은 HIF-1/3α 유도하여 hypoxia 일일뿐만 아니라이 제품은 그것의 &#39;모방 - 독립적으로 특정 세포의 기능과 표현형에 미칠 수있는 다른 어떤 효과를 선택하여 프로젝트에 맞게되어 있는지 확인, 다른 유전자를 조절 할 수 hypoxic &quot;효과. 또한 hypoxia을 모방하는 데 사용되는 다른 약물은 Deferoxamine 메실레이트 (돌연사 했을까, 100 μm의 최종 농도에서 사용)입니다. 이러한 약물의 사용은 experimentator가 &quot;hypoxic 상태&quot;에 영향을주지 않고 문화 판 / 요리 / 술병을 여러 번 열 수 있습니다. 가스 혼합물에 포함된 산소의 수준은 hypoxia 값이 조직 및 세포 유형에 따라 다릅니다로 실험 및 세포 종류에 따라 달라질 수 있습니다. 사실, 몇몇 세포는 O 2 기타 필요한 1 % 미만 O 2 hypoxic로 5 % hypoxic 있습니다. 5 % CO 2는 문화의 산도를 안정화하기 위해 가스 혼합물에 추가, 가스의 나머지 부분은 보통 질소이다. Hypoxic 챔버 스는 독립적으로 산소 장력의 세포 행동을 대체 할 수 의약품을 사용하지 않는 장점이 있습니다. 산소가 각 오프닝에서 챔버를 다시 입력하고 따라서 hypoxia을 lessens 그러나, 실험의 모든 유형의 작업을 수행할 수 있습니다. 귀하의 실험이 요소를 고려해야한다 hypoxia / 다시 산소 일부 세포 유형에 영향을 미칠 수있는 특정 조건입니다. 대안 hypoxia 워크 스테이션 (미리 혼합 가스 탱크 또는 가스 혼합 시스템에 연결된) 또는 실험 미디어를 변경하고 지속적인 hypoxic 환경에서 세포를 조작할 수 있도록 큰 hypoxia 인큐베이터 (글러브 박스와 hypoxia 처리 챔버)를 사용하는 것입니다. 다양한 hypoxic 챔버 스는 지난 10 년간 상용화되었습니다 귀하의 연구실에 사용, 프로젝트, 공간, 크기 및 예산에 따라 선택되어야합니다. 항상 올바른 문화 조건을 보장하여 챔버 잘 사용하고 조건을 보장합니다. 일반적으로 챔버를 사용하는 경우, hypoxia의 수준은 다양한 가스 혼합 (예 : 1퍼센트, 5 % 10 % 산소)를 선택하여 변조된 수 있습니다. HIF - 1α의 검색에 대해서는 아는 것이 중요합니다 일부 암 세포주 normoxia에서 HIF - 1α 표현. 그러므로 이러한 세포 라인에서 HIF의 기초 수준을 결정하는 normoxia - 컨트롤을 사용하는 것이 중요합니다. HIF - 1α는 또한 세포 자극이나 스트레스 다음 이외의 악성 세포 normoxia에 존재하실 수 있습니다. 이것은 또한이 세포는 굶어 죽었을 경우 발생하는 휴대폰의 문화가 적절하게 공급, 유지되어 있는지 확인 수 있습니다.

<table border="1"><tbody><tr><th> 시약의 이름 </th><th> 회사 </th><th> 카탈로그 번호 </th></tr><tr><td> 안티 HIF - 1α </td><td> Invitrogen </td><td> 458400 </td></tr><tr><td> 코발트 (II) 염화물 </td><td> 시그마 </td><td> C8661 - 25G </td></tr><tr><td> 보육 상공 회의소 </td><td> 빌럽스 - 로텐버그 </td><td> MIC - 101 </td></tr><tr><td> HRE - 루시페라제 플라스미드 </td><td> Adgene </td><td> 26,731 플라스미드 </td></tr></tbody></table>

세포 배양의 유도와 hypoxia의 시험

Induction and Testing of Hypoxia in Cell Culture

Hypoxia는 기관, 조직 또는 세포에 산소의 감소 또는 결여로 정의됩니다. 산소 장력의이 감소는 산소의 감소 공급 장치 (원인이 부족한 혈관 네트워크 결함이 혈관과 빈혈을 포함)하거나 공급 장치 (갑자기 높은 세포 증식 률에 의한)에 상대적으로 산소의 증가 소비로 인해 수 . Hypoxia는 1-3, 류마티스 관절염, 죽상 경화증 등 고체 암에서와 같이 physiologic 또는 pathologic 수 있습니다 ... 각 조직과 세포는이 새로운 조건에 적응하기 위해 다른 기능이 있습니다. hypoxia 동안, hypoxia inducible 요인 알파 (HIF)를 안정화와 같은 산소 4 angiogenesis 또는 운송에 관련된 사람 등 다양한 유전자를 조절합니다. 이 단백질의 안정화 따라서 HIF가 일상적으로 hypoxia 5-7위한 화면으로 사용됩니다 감지, hypoxia의 특징이다. 이 문서에서는, 우리는 이들 세포의 hypoxic 상태를 평가하는 포유 동물 세포 배양 및 간단한 테스트에 hypoxia를 유도하기 위해 두 가지 간단한 방법을 제안합니다.

여기서 우리는 문화의 hypoxic 상태를 평가하는 세포 문화와 간단한 테스트에 hypoxia를 유발하는 간단한 방법을 제안합니다.

세포 배양의 유도와 Hypoxia의 시험

저산소증은 장기, 조직 또는 세포 내 산소의 감소 또는 결핍으로 정의됩니다. 이러한 산소 분압의 감소는 ...의 공급 감소로 인해 발생할 수 있습니다.

이 실험 절차의 전반적인 목표는 세포 배양에서 저산소증을 유도하는 것입니다. 이는 먼저 저산소 유도 인자 1의 화학적 유도제를 처리하여 세포를 배양하거나, 특수 가스 혼합물로 채워진 저산소 인큐베이터 또는 챔버에서 세포를 배양함으로써 수행됩니다. 다음으로, 단백질 세포 추출물 내 HIF 1 alpha 발현 수준을 확인하거나, HIF 1 alpha 결합 서열을 코딩하는 벡터 ENC를 사용하여 그 활성을 측정함으로써 저산소증을 검출합니다.최종적으로, 웨스턴 블로팅과 발광 검출을 통해 HIF one alpha의 발현 수준과 활성이 증가했음을 보여주는 결과를 얻을 수 있습니다. 제 이름은 Danny U이며, Patrizia Inda 교수님 연구실의 포닥입니다. 오늘은 염화 코발트를 이용하여 저산소증을 유도하는 이 절차를 시연하겠습니다.멸균된 2회 증류수에 염화 코발트 25 millimolar 스톡 용액을 준비하여 시작합니다. 이 용액을 세포에 첨가하여 최종 농도가 100.Micromolar가 되도록 배양합니다. 저산소증을 유도하기 위해 세포를 37 degrees Celsius, 5%carbon dioxide 조건에서 24시간 동안 배양합니다.모듈형 인큐베이터 챔버를 사용하여 최소 두 개의 동일한 세포 배양물을 준비하십시오. 다만, 각 조건당 3회 반복 실험(triplicate)을 권장합니다. 챔버에 연결된 튜브에 있는 두 개의 흰색 플라스틱 클램프를 먼저 열어 모듈형 인큐베이터 챔버를 열고, 덮개와 트레이를 제거하십시오.세포 배양물을 저산소 챔버에 넣고, 배양물에 적절한 습도를 제공하기 위해 멸균수가 담긴 페트리 접시를 챔버 내에 함께 배치합니다. 저산소 상태 유도를 위한 대조군으로서 두 번째 세포 배양물은 정상 산소 상태(Normoxia)에 둡니다. 1% 산소 가스 혼합물이 들어 있는 저산소 탱크에 튜브를 연결합니다.탱크에 유량계가 연결되어 있는 경우, 챔버가 이에 직접 연결됩니다. 당사는 레귤레이터에 내장된 유량계를 사용하여 챔버와 배지 내의 모든 산소를 제거합니다. 가스 탱크를 열어 분당 20 리터의 유량으로 4분에서 7분 동안 챔버를 플러싱하십시오.그런 다음 빠르게 가스 흐름을 차단하고 챔버를 완전히 닫으십시오. 두 개의 흰색 클램프를 모두 잠가 닫아줍니다. 챔버를 일반 배양기로 옮겨 원하는 시간 동안 배양하십시오.대량 배양물을 사용하는 경우, 배지와 배양물을 1~2시간 동안 DGAs 처리한 후, 다시 한번 플러싱하여 저산소 상태를 평가하십시오. 웨스턴 블롯을 이용한 HIF one alpha 검출을 위해, 앞서 시연한 방법대로 챔버를 열고 배양물을 즉시 얼음에 놓으십시오. 저산소 처리된 세포와 처리되지 않은 세포를 5% SDS 용액으로 용해하십시오.그 다음 용해물을 튜브로 옮기고 초음파 처리하여 단백질을 추출한 후, 원심 분리하여 세포 찌꺼기를 가라앉히고 상층액을 수집합니다. 이어서 BCA 키트를 사용하여 단백질 농도를 측정합니다. 그런 다음 로딩 버퍼를 추가하고 95 °C에서 5분 동안 가열하여 겔 샘플을 준비합니다.8% SDS 폴리아크릴아마이드 겔에서 단백질을 분리하고 이를 니트로셀룰로오스 막으로 전이시킵니다. 5% 무지방 건조 탈지분유와 0.1% tween 20이 포함된 PBS에서 막을 상온에서 1시간 동안 또는 쉐이커를 이용하여 4°C에서 하룻밤 동안 블로킹합니다. 동일한 버퍼에 담긴 anti HIF 1α 일차 단클론 항체와 함께 블롯을 4°C에서 하룻밤 동안 반응시킵니다.다음 날, 상온에서 0.1% tween 20이 포함된 PBS로 블롯을 5분씩 3회 세척한 다음, 0.1% tween 20이 첨가된 PBS 내의 HRP 2차 항체와 함께 45분 동안 배양합니다. 상온에서 0.1% tween 20이 포함된 PBS로 5분씩 3회 세척합니다.그 후 멤브레인을 화학 발광 검출 용액에서 배양하고 x-ray 필름에 노출시켜 루시페라아제 활성을 측정합니다. 배양된 세포에서 성장 배지를 제거합니다. 세포를 PBS로 헹굽니다.그런 다음 배양 접시에 1x lysis reagent 400 µL를 넣습니다. 부착된 세포를 스크레이퍼로 긁어 마이크로 튜브로 옮깁니다. 짧은 시간 동안 원심분리하여 찌꺼기를 펠렛화합니다.세포 용해물 상층액 20 µL와 루시퍼레이즈 분석 시약 100 µL를 혼합하고, 루미노미터를 사용하여 발광을 측정합니다. K 5 62 세포를 정상 산소 또는 저산소 상태에서 48시간 동안 배양한 후, H one alpha 특이적 항체를 사용하여 웨스턴 블롯으로 분석하였습니다. 로딩 컨트롤을 위해 beta actin 특이적 항체를 사용하였습니다.결과는 저산소 세포에서 HIF-1α의 증가를 보여줍니다. HRE Luciferase가 변형된 293 세포를 저산소 또는 정상 산소 상태에서 48시간 동안 배양한 후, 루시페라아제 분석 키트와 루미노미터를 사용하여 루시페라아제 신호를 검출했습니다. 저산소 세포에서 HIF-1α 활성의 증가 또한 검출되었습니다.결과는 상대 발광도로 표시합니다. 정밀 가스를 취급하는 것은 매우 위험할 수 있으므로, 산소 탱크를 벽이나 벤치에 제대로 고정하고, 산소 탱크를 올바르게 열고 닫으며, 압력을 조절하는 등의 예방 조치를 이 절차를 수행하는 동안 항상 취해야 한다는 점을 잊지 마십시오.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

hypoxia inducible 인자 - 1α 활동 Bioluminescence 이미징은 유방암 뇌 전이의 마우스 모델에서 종양 intracranial hypoxia 개발을 모니터에 적용됩니다.

유방암 뇌 전이의 종양 Hypoxia 역학 생체내의 Bioluminescence 이미징에서는 마우스 모델에서

여기, 우리는 저산소증에 HIF1A - 매개 세포 반응의 새로운 유비퀴틴과 유비​​퀴틴 같은 규제를 식별 할 수있는 대상의 siRNA "ubiquitome"화면을 수행하는 방법을 설명합니다. 이 기자 활동 중 강력한 읽기가 사용할 수있는 모든 생물학적 경로에 적용 할 수 있습니다.

배양 된 포유 동물 세포의 생물 학적 경로의 유비퀴틴과 유비​​퀴틴 같은 시스템 레귤레이터를 확인하는 siRNA를 상영

이 문서에서는 출생 후 하루 1-8 마우스 또는 쥐 새끼에 간헐적 저산소증의 짧은 기간을 관리하는 방법을 설명합니다. 이러한 접근은 효과적 저산소증 노출 30 분 이내에 수확 배양 신경 전구 세포에 대한 강력한 조직 수준 "프라이밍 효과"를 도출한다.

배달<em&gt; 생체</em&gt; 급성 간헐적 저산소증 신생아 설치류에서 국무 뇌실 지역 유래 신경 전구 세포 배양에

이 원고는 저산소증/재산소화 하에서 배양된 면역정제된 인간 융모 세포영양아세포 세포의 독특한 체외 모델을 제시합니다. 이 모델은 멜라토닌과 같은 유망한 치료법이 산화 스트레스 증가 및 태반 기능 변화와 관련된 임신 합병증에 대한 보호 효과를 연구하는 데 적합합니다.

인간의 기본 영양막 세포 멜라토닌에 대해 저산소증의 보호 효과를 연구하기 위해 세포 배양 모델 / 재산 소화에 의한 혼란

이 원고는 종양 저산소증이 전이에 미치는 영향을 직접 테스트하고 그 작용 메커니즘을 해독할 수 있는 동물 모델의 개발을 설명합니다. 여기에 설명된 실험은 유잉 육종에 초점을 맞추고 있지만, 다른 종양 유형에도 유사한 접근법을 적용할 수 있습니다.

종양의 전이에 저산소증의 테스트 효과에 대한 생체 내 모델에서

우리는 개구리 및 제브라 피쉬 배아와 같은 수생 생물에 사용하기위한 새로운 저산소 챔버 시스템을 소개합니다. 우리의 시스템은 간단하고 견고하며 비용 효과적이며 생체 내 및 최대 48 시간 동안 저산소증의 유도 및 지속을 허용합니다. 우리는 저산소증의 효과를 모니터하기 위해 2 가지 재현 가능한 방법을 제시한다.

살아있는 개구리와 Zebrafish 태아의 저산소증 유도

여기는 hypoxic 조건 하에서 생 핵 단백질 사이의 단백질-단백질 상호 작용을 공부 하는 공동-immunoprecipitation 프로토콜에 설명 합니다. 이 메서드는 hypoxia에서 transcriptional 공동 규제 및 녹음 방송 요인 사이 상호 작용의 데모에 적합 합니다.

Hypoxic 조건 하에서 경작 하는 세포에서 내 생 적인 핵 단백질을 사용 하 여 공동 immunoprecipitation 분석 결과

공간 거리는 별도의 내피 및 심근 세포 세포층의 공동 배양 모델에서 저산소증 / 재 산소화 손상을 평가하는 핵심 매개 변수이며, 처음으로 공동 배양 공간 환경을 최적화하여 심근 세포 보호에서 내피 세포의 역할을 테스트하기위한 유리한 시험관 내 모델을 제공 할 필요가 있음을 시사합니다.

체외에서 심장 허혈/재관류를 모방하기 위한 세포 공동 배양 모델 개발

망막 색소 상피(RPE) 배양에서 산소 소비율(OCR)을 측정하기 위한 새로운 장치를 소개합니다. 이 장치는 플레이트가 표준 세포 배양 인큐베이터에 있는 동안 표준 배지가 있는 표준 세포 배양 플레이트에서 성장한 RPE에서 한 번에 몇 주 동안 OCR을 측정할 수 있습니다.

고도로 분화된 편광 망막 색소 상피 배양에서 산소 소비율의 장기 모니터링

여기서는 고대사성 근위 소관 상피 세포에서 저산소증/산소 재산화 손상을 모델링하는 시험관 내 프로토콜을 설명합니다. 이 모델은 대사 스트레스 유발 손상을 유도하도록 설계되었으며, 근위 세뇨관 손상 지표의 발현과 미토콘드리아 호흡 기능 평가를 통해 측정할 수 있습니다.

근위 관 상피 세포에서 저산소증/재산소화 손상 모델링

배우세요 세포 배양에서 저산소증을 유도하고 HIF-1 alpha 발현을 평가하는 방법을. 코발트 클로라이드와 저산소 인큐베이터를 사용하며, 웨스턴 블롯과 발광 검출로 결과를 확인합니다. 이 기법은 세포 생물학 및 저산소 연구에 활용됩니다.

세포 배양의 유도와 Hypoxia의 시험

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