Name: 에서 곰팡이 Endoglucanase 활동의 높은 처리량 검사 대장균 /em (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-08-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 16 s
Description: 배우세요 대장균에서 곰팡이 엔도글루카나제 활성을 고처리량으로 검사하는 방법을. 콩고 레드 염료를 활용한 시각적 판독으로 효소 정제 없이 대규무 변이체 라이브러리를 신속하게 선별할 수 있습니다.

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이 작품은 고든 무어와 베티 재단에 의해 및 UNCF / 머크 과학 이니셔티브에 의해 투자되었다.

1. 심사 플레이트 준비 <ol><li> 25g LB 성장 매체, 15g 한천과 증류수 1L에 1.5g 카르복시 메틸 셀룰로오스 (CMC) 기판 및 소독에 압력솥을 추가합니다. </li><li> autoclaving 후 적절한 항생제를 냉각하고 추가할 수 있도록 중간, 그리고 100μM의 최종 농도 IPTG. </li><li> 각 5 큰 사각형 배양 접시 / bioassay 트레이 (240 X 240 X 20mm 또는 더 큰)에 200mL 매체를 하거라. 접시가 완전히 건조하도록 허용합니다. </li></ol> 2. Endoglucanase 라이브러리 생성 및 화면 <ol><li> endoglucanase 촉매 도메인 (들)의 라이브러리를 생성합니다. 이것은 여러 가지 방법으로 수행할 수 있습니다 (예 : 사이트 이동 또는 임의의 돌연변이 유발, 재조합 등)는 연구자에 의해 결정됩니다. </li><li> 그들은 락 연산자와 T7 프로 모터의 제어하에있는 것으로 같은 벡터로 라이브러리를 복제하고, periplasm 타겟팅을위한 pelB 신호 시퀀스가​​ 포함되어 있습니다. 적당한 벡터의 예입니다 Novagen에서 pET22b (+)입니다. </li><li> E.에 endoglucanase 라이브러리를 변환 대장균은 BL21 (DE3)과 하나의 식민지에 대한 판 변형. </li><li> 37 박 변환을 품어 ° C. </li><li> 무균 이쑤시개를 사용하여 적절한 항생제로 보충 400μL LB 매체를 포함하는 96 잘 깊은 잘 접시에 클론의 예방. 37 품어 ° C 250 rpm으로 잡고 하룻밤. </li><li> -80에서 장기 저장을 위해 10 %의 최종 농도 96 ° C.에 잘 하룻밤 문화 살균 글리세롤 추가 이것은 마스터 판 것입니다. </li><li> 96 핀 스탬프를 사용하여, IPTG와 CMC를 포함한 심사 접시에 접시 야간 문화를 복제합니다. 최대 숙박 문화의 5 세트는 각 심사 플레이트에 찍혀 있습니다. </li><li> 각 96 잘 접시의 정체성과 방향이 알려져 있도록 심사 번호판을 레이블. </li><li> 실내 온도 (17-25 ° C) 숙박 또는 볼 식민지가 형성 때까지에서 스탬프 라이브러리를 품어. </li><li> 식민지의 모든 흔적을 제거 때까지 증류수로 접시를 씻어. </li><li> 세탁 판에; 붓고 콩고 레드 (물 속에 0.5 % CR). 접시를 충당하기 위해 충분 CR 추가되었는지 확인하십시오. </li><li> 실온에서 15 분 알을 품다. CR 보육을위한 15 분 초과하지 마십시오. 긴 배양 시간이 덜 뚜렷한 halos집니다. </li><li> CR을 붓고 및 1M NaCl의 풍부한 양의 (이상 충분히 번호판을 충당하기 위해) 추가합니다. </li><li> 실온에서 15 분 알을 품다. </li><li> CMC 열화 halos을 나타내기 위해 NaCl을 하거라. halos보다 해상도 들어, NaCl 또는 여러 NaCl 세척과 함께 더 이상 부화 시간이 필요할 수 있습니다. </li><li> 멸균 이쑤시개를 사용하여 더욱 특성화를위한 마스터 플레이트에서 활성 효소의 클론을 선택하십시오. </li></ol> 3. 대표 결과 : 이 높은 처리량 화면 판독의 예제는 그림 3에 표시됩니다. 클론은 저하 영역의 크기에 따라 비활성, 약하게 활성, 그리고 높은 활성 상태로 확인할 수 있습니다. 알려진 활동의 효소가 참고로 라이브러리에 포함되어있는 경우 특히 유용합니다. 여기에 그림과 같이, 활성 효소의 식별은 강력하고 재현할 수 있습니다. 그러나, 심사 플레이트의 적절한 라벨이 매우 중요하다는 것을 양해해 주시기 바랍니다. 연구원 ° C 자세한 특성화를위한 -80에서 저장된 마스터 플레이트에서를 선택하기 위해, 멀리 식민지를 세척 후 Active 변종을 식별할 수 있어야합니다. 마지막으로, 그것은 선험에게 인공 대 자연의 기판에 활동 사이의 관계를 평가하기 어렵습니다. 따라서 연구자들은 단백질 적합성을 결정하는 산업상 관련 자료에있는 모든 긍정적인 클론을 테스트해야합니다. <img src="/files/ftp_upload/2942/2942fig1.jpg" alt="그림 1"> 그림 1. 심사 절차의 ​​도식 개요. 세포 endoglucanase 라이브러리로 변환 및 단일 식민지에 대한 선택 도금입니다. 클론 -80 (1) 저장 ° C와 endoglucanase 표현을 유도하기 위해 CMC와 IPTG를 포함하는 접시에 (2) 복제 도금에 대한 96 자 딥 웰 플레이트에 야간 들어서 성장. 활성 클론은 -80 ° C.에 저장된 마스터 플레이트에서 선택되고 <img src="/files/ftp_upload/2942/2942fig2.jpg" alt="그림 2"> 그림 2. E.에 곰팡이 촉매 도메인의 복제와 표현 대장균. (A) Endoglucanase 표현 벡터가. 유전자는 T7 프로 모터의 제어하에 pET22b (+) (Novagen)에 복제되었습니다. (B) 오른쪽 패널 : endoglucanase - 표현 BL21 (DE3) 식민지. 왼쪽 패널 : 콩고 레드와 세탁 및 개발 후 CMC 열화 halos. <img src="/files/ftp_upload/2942/2942fig3.jpg" alt="그림 3"> 그림 3. CMC / 콩고 레드 화면에서 샘플 결과입니다. 사진은 세탁과 콩고 레드 개발 후 심사 번호판을 찍어. S에있는 모든 식민지creening 번호판과 비슷한 크기의되었습니다.

<ol><li>Atsumi, S., Hanai, T., Liao, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-fermentative+pathways+for+synthesis+of+branched-chain+higher+alcohols+as+biofuels%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Non-fermentative pathways for synthesis of branched-chain higher alcohols as biofuels.</a> Nature. 451, 86-89 (2008).</li>
<li>Wilson, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellulases+and+biofuels%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Cellulases and biofuels.</a> Curr Opin Biotechnol. 20, 295-299 (2009).</li>
<li>Qin, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+endoglucanase+II+from+Trichoderma+reesei+to+improve+the+catalytic+efficiency+at+a+higher+pH+optimum%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Engineering endoglucanase II from Trichoderma reesei to improve the catalytic efficiency at a higher pH optimum.</a> J Biotechnol. 135, 190-195 (2008).</li>
<li>Nakazawa, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+evolution+of+endoglucanase+III+%28Cel12A%29+from+Trichoderma+reesei%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Microbiol+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Directed evolution of endoglucanase III (Cel12A) from Trichoderma reesei.</a> Appl Microbiol Biotechnol. 83, 649-657 (2009).</li>
<li>Heinzelman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+family+of+thermostable+fungal+cellulases+created+by+structure-guided+recombination%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">A family of thermostable fungal cellulases created by structure-guided recombination.</a> Proc Natl Acad Sci. 106, 5610-5615 (2009).</li>
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<li>Mahadevan, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Site-directed+mutagenesis+and+CBM+engineering+of+Cel5A+%28Thermotoga+maritima%29%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Microbiol+Lett%22%5BJournal%5D)">Site-directed mutagenesis and CBM engineering of Cel5A (Thermotoga maritima).</a> FEMS Microbiol Lett. 287, 205-211 (2008).</li>
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<li>Wang, H., Jones, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Properties+of+the+Macrophomina+phaseolina+endoglucanase+%28EGL+1%29+gene+product+in+bacterial+and+yeast+expression+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Biochem+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Properties of the Macrophomina phaseolina endoglucanase (EGL 1) gene product in bacterial and yeast expression systems.</a> Appl Biochem Biotechnol. 81, 153-160 (1999).</li>
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<li>Howard, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+of+a+chimeric+Phanerochaete+chrysosporium+cellobiohydrolase+expressed+from+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Afr+J+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Characterisation of a chimeric Phanerochaete chrysosporium cellobiohydrolase expressed from Escherichia coli.</a> Afr J Biotechnol. 3, 349-352 (2004).</li>
<li>Teather, R. M., Wood, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+Congo+red-polysaccharide+interactions+in+enumeration+and+characterization+of+cellulolytic+bacteria+from+the+bovine+rumen%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Env+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Use of Congo red-polysaccharide interactions in enumeration and characterization of cellulolytic bacteria from the bovine rumen.</a> Appl Env Microbiol. 43, 777-780 (1982).</li>
<li>Gilkes, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mode+of+action+and+substrate+specificities+of+cellulases+from+cloned+bacterial+genes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bio+Chem%22%5BJournal%5D)">Mode of action and substrate specificities of cellulases from cloned bacterial genes.</a> J Bio Chem. 259, 10455-10459 (1984).</li>
</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

여기에서 설명한 프로토콜은 최소한의 조작으로 활성 효소의 신속하고 높은 처리량 신분증을 수 있습니다. 활동 검출은 매우 민감하고, 질적으로 세포 내에서 활동의 양을 나타냅니다. 사용의 용이성은 E.의 기능적 표현에 의해 제한 효소 라이브러리의 광범위한이 방법은 적합 대장균. 또한 이런 종류의 활동 심사는 곰팡이 cellulases에 국한되지 않고 있지만 endoglucanase의 활동에 적용할 수 있습니다, 또는 cellulase 활동하는 가용성 기판 (CMC와 같은)가 있습니다.

<table border="1"><tbody><tr><th> 시약 </th><th> 회사 </th><th> 제품 번호 </th></tr><tr><td> IPTG </td><td> 시그마 </td><td> I1284 </td></tr><tr><td> 콩고 레드 </td><td> 시그마 </td><td> C6277 </td></tr><tr><td> 카르복시 메틸 셀룰로오스 </td><td> 시그마 </td><td> 360384 </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> 시그마 </td><td> S1679 </td></tr><tr><td> Bacto - 한천 </td><td> BD Biosciences </td><td> 214030 </td></tr><tr><td> Bioassay 플레이트 </td><td> 써모 과학 </td><td> 240845 </td></tr></tbody></table>

에서 곰팡이 endoglucanase 활동의 높은 처리량 검사 대장균</em

High Throughput Screening of Fungal Endoglucanase Activity in Escherichia coli

Cellulase 효소 (endoglucanases, cellobiohydrolases 및 β - glucosidases) 차례로 연료 알콜 1로 변환할 수 있습니다 구성 요소 당분로 hydrolyze의 셀룰로오스. 신재생 에너지를 제공하기 위해 cellulosic 바이오 매스의 효소 가수 분해에 대한 잠재력은 경제적인 연료 생산 2 cellulases을 엔지니어 노력을 강화하고있다. 특히 관심이 이미 식품, 섬유 처리에 대한 산업상 사용되는 곰팡이 cellulases 3-8은 다음과 같습니다. 돌연변이 cellulases의 라이브러리 간의 적극적인 변종을 식별하는 것은 기술 프로세스에 중요합니다, 적극적인 돌연변이가 더욱 향상된 특성 및 / 또는 추가 테스트 돌연변이 유발을 받게 될 수 있습니다. 곰팡이 cellulases의 효율적인 엔지니어링은 기본 생물에 대한 유전자 도구의 부족으로하고 heterologous 호스트에있는 효소를 표현의 어려움에 의해 방해되었다. 최근 모리카와 동료 E.의 표현 방법을 개발 대장균 H. jecorina 3,9, 대량으로 cellulases을 분비하는 능력과 함께 중요한 산업 곰팡이에서 endoglucanases의 촉매 도메인. 기능성 E. 대장균 표현도 Macrophomina phaseolina 10 Phanerochaete chrysosporium 11-12 포함한 다른 곰팡이에서 cellulases에 대한보고되었습니다. 우리는 E.에 곰팡이 endoglucanase 활동의 높은 처리량 검사에 대한 방법을 제시 대장균. (그림 1)이 방법은 고체 매체에 성장 세포에 의해 카르복시 메틸 셀룰로오스 (CMC)의 효소 저하를 시각화하는 일반적인 미생물의 염색 콩고 레드 (CR)를 사용합니다. 활동 분석은 저렴한 시약, 최소한의 조작을 필요로하고, 식민지 사이트에서 열화의 지역 ( &quot;halos&quot;)로 모호하지 않은 결과를 제공합니다. 효소 활동의 양적 측정이 방법에 의해 결정되지 않을 수 있지만, 우리는 헤일로 크기가 셀에 총 효소 활동을 상호 것으로 나타났습니다. 개인 긍정적인 클론의 추가 특성은 상대적으로 단백질 적합성을 결정합니다. 전통적인 박테리아 전체 셀 CMC / CR 활동 assays 13 교차 오염, 또는 대규모 실험을 덜받을 수있는 것입니다 CMC 한천 우물에서 잠복기 문화의 적용을받습니다 식민지, 한천에 포함된 CMC를 따르고 포함됩니다. 여기 cellulase 활동 14 기존의 세척 방법을 수정 향상된 프로토콜을보고 : CMC 한천 플레이트에 성장 세포는 이전에 CR의 얼룩을 제거됩니다. 우리 프로토콜은 크게 교차 오염을 줄이고 클론 수천의 급속한 심사를 허용, 확장성이 높은 것입니다. H. 이외에 jecorina 효소, 우리가 표현하고이 프로토콜은 생물의 범위에서 효소에 적용할 수 있다고 제안, Thermoascus aurantiacus 및 Penicillium decumbens (그림 2 참조)에서 endoglucanase 변종을 검사.

우리의 곰팡이 endoglucanase 활동을위한 화면으로 저렴한 비용, 높은 처리량 방법을 설명<em&gt; E. 대장균.</em&gt; 방법은, 기판 저하의 단순한 시각적 판독에 의존 효소 정화를 필요로하지 않으며, 확장성이 높은 것입니다. 이것은 효소 변종 대형 도서관의 신속한 심사를 위해 수 있습니다.

에서 곰팡이 Endoglucanase 활동의 높은 처리량 검사 대장균</em

셀룰라아제 효소(엔도글루카나아제, 셀로비오히드로라아제 및 &beta;-글루코시다아제)는 셀룰로오스를 구성당으로 가수분해하며, 이는 다시 ...로 전환될 수 있습니다.

E. coli 내의 진균 endo gluconate 활성을 확인하기 위한 이 고처리량 스크리닝에서는, 일반적인 미생물 염색약인 Congo Red를 사용하여 고체 배지에서 성장하는 세포에 의한 carboxy methyl cellulose의 효소적 분해를 시각화합니다. 먼저 세포에 endo gluconate 라이브러리를 형질전환시킨 후, 단일 콜로니가 형성되도록 선택적으로 도말합니다. 그런 다음 개별 클론을 분리하여 96-well 플레이트에서 하룻밤 동안 배양합니다. 다음으로, endo gluconate 발현을 유도하기 위해 IPTG가 포함된 CMC 플레이트에 복제 도말(replica plating)을 수행하여 효소 스크리닝을 진행합니다.마지막으로, -80°C에 보관된 마스터 플레이트에서 클론들을 픽킹합니다. 이 분석법은 콜로니 위치의 분해 구역을 통해 명확한 결과를 생성하며, 여기서 헤일로 크기는 효소 활성과 상관관계가 있어 상대적인 단백질 적합성에 대한 정성적 평가가 가능합니다. 오버레이법과 같은 기존 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은 매우 낮은 위양성률로 고속 분석이 가능하다는 점입니다.1리터의 증류수에 LB 배지 25g, 한천(agar) 15g, 그리고 카르복시메틸셀룰로오스 기질 1.5g을 넣고 오토클레이브로 멸균합니다. 배지가 식으면 적절한 항생제와 IPTG를 최종 농도 100 µM이 되도록 첨가합니다. 이제 5개의 큰 정사각형 페트리 접시 또는 바이오 에세이 트레이에 배지를 각각 200mL씩 붓고, 플레이트가 완전히 마를 때까지 둡니다.먼저, Novagen의 PET 22 B plus와 같이 lac 오퍼레이터가 포함된 T7 프로모터와 주변세포질(periplasm) 타겟팅을 위한 PAL LV 신호 서열을 가진 적절한 벡터에 endo gluconate 촉매 도메인 라이브러리를 구축합니다. 구축된 endo gluconate 라이브러리를 E. coli BL 21(DE3) 균주에 형질전환하고, 유리 비드법을 사용하여 단일 콜로니가 형성되도록 도말한 후 37 °C에서 하룻밤 동안 배양합니다. 멸균된 이쑤시개를 사용하여 클론을 96-well 플레이트에 접종합니다.적절한 항생제가 첨가된 LB 배지 400 µL를 딥웰 플레이트에 분주합니다. 37 °C에서 250 RPM으로 흔들어주며 하룻밤 동안 배양합니다. 이제 -80 °C에서 장기 보관하기 위해 하룻밤 동안 배양한 96웰 배양액에 멸균 글리세롤을 첨가합니다.96핀 스탬프를 사용하여 이를 마스터 플레이트로 활용하며, 하룻밤 동안 배양한 배양액을 IPTG와 CMC가 포함된 각 스크리닝 플레이트에 복제합니다. 하룻밤 동안 배양한 배양액 다섯 세트를 스탬핑하고 라벨을 붙인 후, 가시적인 콜로니가 형성될 때까지 상온에서 배양합니다. 콜로니의 모든 흔적이 제거될 때까지 증류수로 플레이트를 계속 헹굽니다.세척된 플레이트를 덮을 정도의 0.5% Congo red를 붓고, 상온에서 최대 15분 동안 배양합니다. 염료를 따라 버린 후, 충분한 양의 1 M sodium chloride를 붓고 상온에서 15분 동안 배양합니다. 그 다음 sodium chloride를 버리면 CMC 분해 halo가 나타납니다.멸균된 이쑤시개를 사용하여, 추가 특성 분석을 위해 마스터 플레이트에서 활성 효소를 선택합니다. 본 예시에서는 lac 오퍼레이터가 포함된 T7 프로모터의 제어 하에 pET-22b(+) 내에 endo gluconate 발현 벡터를 생성하였습니다. 이후 endo gluconate를 발현하는 BL21 콜로니의 T7 성능을 스크리닝하여 CMC 분해 헤일로를 생성하였습니다. Congo Red로 세척 및 발색시킨 후, 일반적으로 이러한 스크리닝 플레이트 상의 클론들은 분해 구역의 크기에 따라 비활성, 약활성 및 고활성으로 식별될 수 있습니다.본 방법에서 활성 효소의 식별은 강력하고 재현성이 높습니다. 마스터 플레이트에서 양성 클론을 정확하게 식별하기 위해서는 스크리닝 플레이트에 적절하게 라벨을 붙이는 것이 중요합니다.

high-throughput-screening-fungal-endoglucanase-activity-escherichia

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 프로토콜은 대장균의 표현 metagenomic 도서관에서 cellulolytic 활동에 높은 처리량 화면을 설명합니다. 화면이 솔루션을 기반으로하고 고도의 자​​동화, 그리고 흡광도 측정으로 최종 판독과 384 잘 microplates에 한 냄비 화학을 사용합니다.

Metagenomic 도서관에서 Cellulase 활동 Biomining에 대해 높은 처리량 화면

출처: Kim, H. 외, 고처리량 유전효소 스크리닝 시스템을 이용한 다효소 스크리닝. J. Vis. 경험 (2016)이 영상은 메타게놈 포스미드 라이브러리와 염색 기질을 이용한 효소 발현을 검출하는 유전적 스크리닝 방법을 시연합니다. 유세포분석은 색소 생성물을 생성하는 단일 세포를 식별하고 분리하여 활성 효소 발현 세포의 고처리량 선택을 가능하게 합니다.

유전자 변형 박테리아 세포에서 표적 효소 발현 검출

이 비디오에서는 불용성 발색 폴리머 하이드로겔 기질을 사용하여 탄수화물 활성 효소 스크리닝을 위한 고처리량 분석을 시연합니다. 효소는 이러한 기질을 용해성 착색 산물로 분해하며, 이는 산물의 색 강도를 측정하여 정량화할 수 있습니다.

발색 고분자 하이드로겔 기반 효소 스크리닝 분석: 합성 기질을 사용하여 탄수화물 활성 효소를 스크리닝하는 고처리량 방법

녹색 형광 단백질에 융합을 기반으로 대장균에서 재조합 막 단백질의 발현에 대한 심사에 대한 효율적인 접근 방법이 제시된다.

막 단백질의 녹색 형광 단백질 기반의 표현 상영에<em&gt; 대장균</em

단백질 동시 발현은 단백질 복합체의 in vitro 재구성에 대한 강력한 대안이며 in vivo에서 생화학 및 유전자 검사를 수행하는 데 도움이 됩니다. 여기에서 우리는 단백질 복합체를 얻고 세포의 돌연변이 빈도를 조정하기 위해 대장균에서 단백질 공동 발현을 사용하는 것에 대해 보고합니다.

단백질 공동 식의 다각적 인 장점에<em&gt; 대장균</em

본 연구는 200개 이상의 효소에 이론적으로 적용할 수 있는 보편적인 유전 효소 스크리닝 시스템을 이용한 고처리량 스크리닝 방법을 제시합니다. 여기서 단일 스크리닝 시스템은 사용된 기질(p-니트로페닐 아세테이트, p-니트로페닐-β-D-셀로비오시드 및 페닐 포스페이트)을 간단히 변경하여 세 가지 다른 효소(리파아제, 셀룰라아제 및 알칼리성 인산가수분해효소)를 식별합니다.

멀티 효소 높은 처리량 유전자 효소 검사 시스템을 사용하여 상영

효소 스크리닝을 위한 고처리량 분석에 대해 설명합니다. 즉시 사용 가능한 이 멀티플렉스 분석 키트는 사전 선택된 Chromogenic Polymer Hydrogel (CPH) 기질과 complex Insoluble Chromogenic Biomass (ICB) 기질로 구성됩니다. 표적 효소는 다당류를 분해하는 내효소(endo-enzymes)와 프로테아제(protease)입니다.

소설 불용성 발색 기질 분석 키트를 사용하여 탄수화물 분해 효소의 높은 처리량 검열

이 프로토콜 기능 S. cerevisiae에 단백질 기반 상속에 대 한 화면을 높은 처리량 방법을 설명 합니다.

S. cerevisiae 에 단백질 기반 상속에 대 한 높은 처리량 검열

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이 프로토콜은 산업 미생물을 위한 표준 고처리량 스크리닝 워크플로우를 제공합니다. 이 과정은 ARTP 돌연변이 유발을 통해 돌연변이 라이브러리를 구축하고, 자동화된 마이크로플루이딕스를 이용한 양성 액상 스크리닝을 수행하며, 이후 결과를 검증하는 과정을 포함합니다. 이 워크플로우의 신뢰성은 고수율 B. coagulans 균주를 스크리닝하여 검증되었습니다.

자동 액상 마이크로플루이딕 플랫폼을 이용한 L-락산을 과생산하는 바실루스 응고 체 돌연변이체의 고처리량 스크리닝

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에서 곰팡이 Endoglucanase 활동의 높은 처리량 검사 대장균

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