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암 연구
0 조회수 • 4:13 분 • April 30th, 2023
나팔관의 종양 형성 세포는 건강한 난소 세포를 자극하여 종양 전이를 촉진하는 화학 커뮤니케이터 또는 소분자를 생성합니다. 이러한 화학 커뮤니케이터를 시각화하려면 먼저 적절한 유리 슬라이드 위에 우물 칸막이를 조립하십시오. 우물에 플라스틱 칸막이를 대각선으로 배치하여 우물을 두 개의 동일한 크기의 구획으로 분리합니다. 액체 아가로스에 나팔관 종양 세포의 현탁액을 웰의 한 구획에 분배합니다. 냉각되면 아가로스가 응고되어 종양 세포를 포획할 수 있는 3D 네트워크를 형성합니다.
칸막이를 제거하고 건강한 난소 조직을 빈 구획 중앙에 놓습니다. 액체 아가로스 혼합물로 덮으십시오. 아가로스가 응고되어 난소 조직을 암세포 근처에 매립하도록 합니다. 원하는 기간 동안 배양합니다. 종양 세포와 건강한 난소 세포는 모두 아가로스 네트워크를 통해 인접한 세포를 향해 확산되는 작은 분자를 생성합니다.
우물 칸막이를 제거합니다. 공동 배양을 건조시켜 한천을 건조 및 평평하게 만들고 매트릭스 내에서 방출된 작은 분자를 포착합니다. 이미징 질량 분석법 또는 IMS를 사용하여 소분자의 분포를 시각화합니다.
ITO 처리 슬라이드 위에 8웰 디바이더를 놓고 플라스틱 디바이더를 웰에 대각선으로 삽입합니다. 이전에 수행한 것처럼 세포 배양을 준비하고 100마이크로리터의 세포 현탁액과 100마이크로리터의 액화 아가로스를 2밀리리터 튜브에 결합합니다. 즉시 150마이크로리터의 세포 아가로스 혼합물을 분배기의 한쪽에 도금하면서 분배기에 하향 압력을 유지합니다.
아가로스를 약 1분 동안 식히고 굳힌 다음 칸막이를 제거합니다. 집게를 사용하여 난소 외식편을 우물의 빈 절반 중앙에 배치합니다. 난소 위에 150마이크로리터의 세포 아가로스 혼합물을 추가합니다. 슬라이드를 섭씨 37도 및 5% 이산화탄소에서 가습 인큐베이터에서 배양합니다.
4일 후 아가로스 플러그에서 챔버 디바이더를 제거합니다. 평평한 주걱을 사용하여 챔버에서 아가로스의 측면을 분리하고 챔버를 위쪽으로 부드럽게 당깁니다. 아가로스 플러그가 이동되면 서로 닿지 않도록 부드럽게 위치를 변경하십시오.
슬라이드를 섭씨 37도의 오븐에 약 4시간 동안 넣고 매시간 90도 회전하여 샘플 전체에 균일한 열 분포를 보장합니다. 슬라이드는 완전히 건조되어야 합니다. 그렇지 않으면 MALDI-TOF 질량 분석기의 고진공 환경에서 샘플이 폭발할 수 있습니다.
슬라이드를 건조하고 진행 상황을 모니터링하는 것은 높은
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